הדמיית ביולומינסנציה לחקר מעברי סידן במבני מוח של דרוזופילה

אבטח דרוזופילה טרנסגנית משותקת כשראשה חשוף בתא הקלטה על במת מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

גוף הפטרייה של הזבוב מורכב מתאי עצב המבטאים חלבון היתוך ביולוגי רגיש לסידן, המופעל על ידי קופקטור טעון מראש.

חבר צינור זלוף לתא. אתר את גופי הפטריות הפלואורסצנטיות, תוך התמקדות בגביע ובאונות המדיאליות. אשר ניקוז עם מאגר.

הגדר פרמטרי הדמיה והתמקד בגביע ובאונות המדיאליות. בחושך, רכשו תמונות פלואורסצנטיות בסיסיות של גופי הפטריות לפני החשיפה לממריצים.

השתמש בניקוטין במאגר המכיל סידן כדי להפעיל קולטני אצטילכולין ניקוטיניים, מה שמפעיל זרם סידן ופליטת אור ביולוגית.

יש לשטוף עם חוצץ כדי לשחזר את התנאים הבסיסיים.

יש להחדיר אשלגן כלורי לדה-פולריזציה של תאי עצב, לעורר שחרור סידן תוך תאי ופליטת אותות ביו-לומינסצנטיים.

יש לשטוף עם בופר כדי לשחזר את התנאים הבסיסיים.

לנתח תמונות כדי להעריך את פעילות הסידן המרחבית והזמנית בגביע ובאונות האונות האמצעיות.

- לאחר מכן, הנח את הדגימה על התושבת מתחת למיקרוסקופ, והתאם את ההגדלה ל-5x. לאחר מכן, הכנס את צינור הזלוף לתעלה דרך הפנצ'ר. כוונו את המיקרוסקופ למצב פלואורסצנטי, ואז מרכז, והביאו את גופי הפטריות למיקוד. ברגע שגופי הפטריות נמצאים בפוקוס, שנה את ההגדלה ל-20x. מרכז מחדש את התמונה והתאם את המיקוד.

לאחר מכן, מקם את מנגנון הניקוז מעל בריכת הניקוז, והתאם את גובה שאנט הניקוז כך שהקצה יהיה ממש מעל בריכת הניקוז. לאחר מכן, שטפו את הדגימה בתמיסה של רינגר למשך 30 שניות כדי לבדוק ניקוז מתאים. לבסוף, משוך את המגן כלפי מטה כדי לאטום את המכשיר מכל אור חיצוני.

באמצעות המערכת האוטומטית בתוכנית Photon Imager, בצע התאמות עדינות למיקוד וצלם תמונת פלואורסצנט ייחוס של גופי הפטריות. התאם את המיקום של תיבות אזור העניין מעל הגביע, גופי התאים והאונות האמצעיות על ידי לחיצה על התיבות וגרירתן למקומן תוך כדי לחיצה על Control.

כעת, רשום ערכי תוכנית בסיסית למשך כ- 5 עד 10 דקות. לאחר מכן, הפעל את המתג כדי להתחיל בזרימת הניקוטין. במקביל, לחץ על Enter, והוסף הערה כדי לציין שזרימת הניקוטין החלה. לאחר דקה אחת, עצרו את הזרימה, ורשמו הערה נוספת ביומן המציינת שהזרימה נעצרה. לאחר מכן, שטפו את הדגימה בתמיסה של רינגר למשך חמש דקות.

בזמן שהדגימה מתאוששת, כבה את הכביסה, הגדר את הטיימר לחמש דקות נוספות והתכונן להתחיל את זרימת האשלגן הכלורי. כאשר אתה מוכן להתחיל, התחל את זרימת האשלגן הכלורי, והזן התחלת אשלגן כלורי של 100 מילי-מולרי ליומן הדגימה. לאחר דקה אחת, עצור את הזרימה והזן אשלגן כלורי כבוי ליומן הדגימה. לאחר מכן, שטפו את הדגימה בתמיסה של רינגר למשך דקה אחת והעבירו את המיקרוסקופ למצב פלורסנט. צלם תמונה פלואורסצנטית סופית, ולאחר מכן כבה את תמיסת הצלצול והסר את הדגימה.