אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 3:54 דק׳ • May 29th, 2025
אבטח דרוזופילה טרנסגנית משותקת כשראשה חשוף בתא הקלטה על במת מיקרוסקופ פלואורסצנטי.
גוף הפטרייה של הזבוב מורכב מתאי עצב המבטאים חלבון היתוך ביולוגי רגיש לסידן, המופעל על ידי קופקטור טעון מראש.
חבר צינור זלוף לתא. אתר את גופי הפטריות הפלואורסצנטיות, תוך התמקדות בגביע ובאונות המדיאליות. אשר ניקוז עם מאגר.
הגדר פרמטרי הדמיה והתמקד בגביע ובאונות המדיאליות. בחושך, רכשו תמונות פלואורסצנטיות בסיסיות של גופי הפטריות לפני החשיפה לממריצים.
השתמש בניקוטין במאגר המכיל סידן כדי להפעיל קולטני אצטילכולין ניקוטיניים, מה שמפעיל זרם סידן ופליטת אור ביולוגית.
יש לשטוף עם חוצץ כדי לשחזר את התנאים הבסיסיים.
יש להחדיר אשלגן כלורי לדה-פולריזציה של תאי עצב, לעורר שחרור סידן תוך תאי ופליטת אותות ביו-לומינסצנטיים.
יש לשטוף עם בופר כדי לשחזר את התנאים הבסיסיים.
לנתח תמונות כדי להעריך את פעילות הסידן המרחבית והזמנית בגביע ובאונות האונות האמצעיות.
- לאחר מכן, הנח את הדגימה על התושבת מתחת למיקרוסקופ, והתאם את ההגדלה ל-5x. לאחר מכן, הכנס את צינור הזלוף לתעלה דרך הפנצ'ר. כוונו את המיקרוסקופ למצב פלואורסצנטי, ואז מרכז, והביאו את גופי הפטריות למיקוד. ברגע שגופי הפטריות נמצאים בפוקוס, שנה את ההגדלה ל-20x. מרכז מחדש את התמונה והתאם את המיקוד.
לאחר מכן, מקם את מנגנון הניקוז מעל בריכת הניקוז, והתאם את גובה שאנט הניקוז כך שהק
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים