אבלציה עצבית ממוקדת באמצעות מיקרוסקופיה דו-פוטונית בזחל דג זברה

התחל עם זחל דג זברה טרנסגני מורדם משותק באגרוז ומונח בצלחת פטרי המכילה תמיסת הרדמה.

מקם אותו מתחת למיקרוסקופ לייזר דו-פוטוני, המשתמש בשני פוטונים להדמיה מפורטת.

התמקדו בשכבות העליונות והתחתונות של המוח כדי להגדיר גבולות הדמיה.

צלם תמונות בעומקים שונים כדי לצפות בנוירונים לפני טיפול בלייזר.

התאם את המיקוד באזור העניין והתאם את גודל המסגרת כדי למקד את המיקוד בנוירונים.

בחר והקרין את הנוירונים באמצעות לייזר דו-פוטוני.

הלייזר גורם לחום מקומי, וכתוצאה מכך מוות עצבי עם נזק מינימלי לרקמות הסובבות. צלמו את התמונה.

השווה תמונות לפני ואחרי הטיפול כדי להעריך שינויים פלואורסצנטיים.

מקדו מחדש את הנוירונים במישורים עמוקים יותר וחזרו על ההקרנה כדי לטפל בכל הנוירונים באזור העניין.

צלם מחדש את התמונה והשווה אותה לתמונה שלפני הטיפול. אובדן הקרינה לאחר טיפול בלייזר מאשר אבלציה עצבית מוצלחת.

הנח את הזחל המוטבע באגרוז מתחת למיקרוסקופ סריקת לייזר של 2 פוטונים והפעל את מערכת המיקרוסקופיה. פתח את תוכנת רכישת התמונות, ותחת הכרטיסייה לייזר, לחץ על כפתור ההפעלה כדי להפעיל את הלייזר. המתן עד שמצב הלייזר ישתנה ממצב עסוק למצב נעול.

בכרטיסייה ערוצים, הגדר את אורך הגל של הלייזר ל-880 ננומטר עבור אבלציה של EGFP, או 800 ננומטר עבור אבלציה של GcAMP. בחר את עדשת האובייקטיבית פי 20 על ידי הזזה ידנית של אקדח העדשה. לאחר מכן, לחץ