אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 2:58 דק׳ • May 29th, 2025
התחילו עם עכבר מורדם עם לוחית ראש מאובטחת מעל חלון קליפת המוח הדק של הגולגולת שהוכן בניתוח.
מקם את העכבר בשכיבה. הסר את עור הירך המדיאלי כדי לחשוף את וריד הירך.
הזרקת צבע פלואורסצנטי מצומד לווריד כדי לסמן פלזמת דם, המאפשרת הדמיה של כלי הדם.
לתפור את החתך.
הפוך את העכבר ואבטח את לוח הראש ברתמה כדי לייצב את העכבר.
העבר את ההגדרה לשלב מיקרוסקופ של שני פוטונים.
הוסף מי מלח מעל החלון בקליפת המוח. הורד את עדשת האובייקט עד שהיא תיצור קשר עם מי המלח.
באמצעות תאורת שדה בהיר, אתר את אזור ההדמיה.
עבור להדמיה של שני פוטונים.
הלייזר של המיקרוסקופ ממקד אור אינפרא אדום קרוב באנרגיה נמוכה לתוך המוח.
בנקודת המוקד של הלייזר, שני פוטונים משלבים את האנרגיה שלהם כדי לעורר את הצבע, מה שגורם לכלי הדם להאיר.
זהה מצע נימי - רשת של כלי דם קטנים המחברים עורקים לוורידים - והגדל אותה.
רכוש תמונות כדי לנתח את כלי הדם המיקרו של המוח.
בהליך זה, הסר את העור בירך השמאלית המדיאלית של העכבר. לאחר מכן, אתר את וריד הירך. בעזרת מזרק של 1 מיליליטר ומחט בגודל 30, שאבו 130 מיקרוליטר מתמיסת הצבע הפלורסנט. הזריקו 100 מיקרוליטר מהצבע לאט לווריד הירך.
לאחר הסרת המחט, הפעל לחץ יציב ועדין על מקום ההזרקה כדי לעצור כל דימום, ואפשר לצבע להסתובב במשך חמש דקות. לאחר מכן, סגור את אתר הניתוח עם תפרים. הפוך בזהירות את העכבר על בטנו והנח אותו ברתמת לוחית ראש העכבר. להדמיית שני פוטונים in vivo, העבר את המכשיר הכירורגי למיקרוסקופ דו-פוטוני, והקפד לשמור על רמת ההרדמה של בעל החיים.
לאחר מכן, הניחו כמות קטנה של 0.9% מי מלח לתוך מאגר לוחית הראש, והנמיכו את מטרת המיקרוסקופ כך שתבוא במגע עם מי המלח. לאחר מכן, אתר את אזור העניין, באמצעות יעד הצפייה בשדה הבהיר. לאחר מכן, התחל הדמיה של שני פוטונים. אתר מיטה נימית במסך התצוגה, והגדל אזור זה באמצעות הזום האופטי 2. רכוש תמונות של הנימים באמצעות תוכנת הדמיה דו-פוטונית.