הדמיה פלואורסצנטית לכל החיים של צבירת חלבון PolyQ בנוירונים של Caenorhabditis elegans
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 5:36 דק׳ • June 17th, 2025
התחל עם תולעי בקרה מורדמת, תואמת גיל ותולעי Caenorhabditis elegans חסרות מלווה.
שתי הקבוצות מבטאות חלבוני polyQ מתויגים פלואורופור בתאי העצב שלהן המועדים לקיפול שגוי.
בתולעי ביקורת, חלבוני צ'פרון מגבילים צבירת polyQ לא מקופלת כהלכה, בעוד שבתולעים עם מחסור במלווים, polyQ לא מקופל יוצר בקלות אגרגטים.
הניחו את שקופית הבקרה על במת מיקרוסקופ קונפוקלי עבור מיקרוסקופ הדמיה פלואורסצנטי לכל החיים (FLIM).
האירו את התולעים באמצעות לייזר פולס.
הלייזר מעורר את הפלואורופור, אשר פולט פוטון כשהוא חוזר למצב הקרקע.
FLIM מודד את אורך החיים הקרינה – משך הזמן שהפלואורופור נשאר במצב מעורר שלו.
בתולעים חסרות מלווה, צבירת polyQ מאגדת פלואורופורים, מקדמת העברת אנרגיה בין פלואורופורים סמוכים במקום פליטת פוטונים, ובכך מפחיתה את חיי הקרינה.
תוכנת FLIM מעבדת את תקופות החיים הללו כדי ליצור מפות מקודדות בצבע, המאפשרות הדמיית צבירה.
אורך חיים מופחת של פלואורסצנטיות בתולעים חסרות מלווה, בהשוואה לביקורת, מעיד על צבירת polyQ מוגברת.
ודא שהנמטודות אינן זזות לחלוטין. פתח את תוכנת הרכישה של FLIM. אתר את כפתור הכרטיסייה ולחץ על הפעל יציאות. הנח את השקופית עם C. elegans המותקן על הבמה, ובאמצעות עדשת הגדלה פי 10 במצב שידור, מקם את מיקום הנמטודות על השקופית. הסר את השקופית, העבר את המטרה לעדשת הגדלה פי 63 והחל את מדיום הטביל
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים