אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 1:56 דק׳ • June 17th, 2025
קח צלחת מרובת בארות מצופה פולימר המכילה תאי קליפת מוח ראשוניים עובריים של עכבר, כגון תאי אב ותאי עצב. תאי אב עוברים טרנספטציה כדי לבטא חלבונים פלואורסצנטיים לתיוג ומעקב.
העבר את הצלחת לתא הדגירה שחומם מראש של מיקרוסקופ פלואורסצנטי הפוך לסביבת הדמיה יציבה.
אתר את מיקום הייחוס על הלוח למיקומי הדמיה עקביים.
בחר שדות הדמיה מרובים לכל באר בהגדלה גבוהה יותר כדי למקסם את הסבירות להתבוננות בתאים שעברו טרנספטציה.
במרווחי זמן קבועים, צלם בו זמנית תמונות ניגודיות פאזה כדי לחשוף מורפולוגיה ודינמיקה של תאים, ותמונות פלואורסצנטיות כדי לנטר ביטוי חלבון פלואורסצנטי.
השווה תמונות ניגודיות פאזה ותמונות פלואורסצנטיות כדי לעקוב אחר חלוקת תאי אב והתמיינות לשושלות עצביות.
כדי לדמות תאים שהועברו רטרו-וירוס, הנח את לוחית תרבית הרקמה בתא הדמיה המחובר לבקרי טמפרטורה ופחמן דו חמצני כדי לשמור על התאים בתנאים קבועים של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני.
בחר מיקום בציר XY שישמש כנקודת אפס, וכיול את נקודת האפס. בחר 10 עד 15 מיקומים לכל באר להדמיה בהגדלה פי 10. הגדר את התוכנה לרכוש תמונות ניגודיות פאזה כל חמש דקות ותמונות פלואורסצנטיות כל שלוש שעות כדי להפחית את הפוטוטוקסיות. בדוק והתאם את המיקוד בשלוש השעות הראשונות של הניסוי, מכיוון שהוא עשוי להשתנות בזמן שהטמפרטורה מתאזנת.