אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 3:59 דק׳ • June 17th, 2025
התחל עם פרוסת מוח קטן המתקבלת ממוח גור חולדה לאחר לידה בצלחת מרובת בארות המכילה מדיה.
הסר את המדיה ודגר את הפרוסה בתמיסת צבע פלואורסצנטית ציטופלזמית כדי לתייג את תאי הגרגיר (GCs).
מעבירים את הפרוסה לקרום הכנסת טרנסוול ומסירים את כל עודפי הצבע.
הסר את התוספת ומלא את הבאר במדיה. לאחר מכן, החלף את התוספת והוסף מדיה לכיסוי הרקמה.
דגירה כדי לאפשר לרקמה להיצמד לקרום ההכנסה.
העבירו את הצלחת לחממה המחוברת למקרוסקופ קונפוקלי והניחו כיסוי זכוכית מעל הצלחת.
הגדר את תנאי התרבית, דגר את הרקמה עוד יותר ואז התחל לצלם.
עם תאורת לייזר, ה-GCs המסומנים זוהרים.
צלם תמונות דולג זמן כדי להמחיש את הנדידה הרדיאלית של ה-GCs דרך השכבה המולקולרית של המוח הקטן.
באמצעות תוכנת הדמיה, נתח את מרחק הנדידה של ה-GCs.
לאחר חיתוך הדגימה, השתמש בפיפטה לבנה קטומה כדי להעביר אותם עם מעט HBSS לצלחת של שש בארות. טען עד שלוש פרוסות בכל באר. לאחר מכן, לאחר ריקון המדיה בכל באר טעונה, הוסף חמישה מיליליטר של תמיסת טעינה המכילה 10 מיקרומולר של הצבע הפלואורסצנטי. כדי להגן על הדגימות מפני אור, מכסים את הצלחת בנייר כסף. לאחר מכן הניחו את הצלחת על מוטטור המוגדר ל -35 סל"ד. הניחו לצלחת לדגור במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר כדי לאפשר לצבע לתייג את התאים.
כעת, העבירו את הפרוסות כמו קודם לקרום של תוספת טרנסוול שיש לה שלוש נקבוביות מיקרון. לאחר מכן שא
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים