הדמיית זמן-lapse של חלוקת תאי גזע עצביים של עכבר באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית

קחו צלחת מרובת בארות המכילה תאי גזע עצביים דבוקים או תאי גזע עצביים שבודדו ממוח עכבר טרנסגני. תאי גזע עצביים אלה מכילים חלבון מתויג פלואורסצנטי הספציפי לשלב הגידול הראשון, או G1.

כאשר ה-NSC מתחלק, הוא זוהר בשלב G1 של מחזור התא מבלי לפלוט פלואורסצנטיות בשלבים אחרים.

הנח את הצלחת בתא הדמיה של מיקרוסקופ סריקת לייזר קונפוקלי, הנשמר בטמפרטורה מבוקרת.

בחר את עדשת המטרה הרצויה והתאם את עוצמת הקרינה.

הגדר את הפרמטרים להדמיית זמן-lapse.

בחר באפשרות התמונה הגדולה ותזמן רכישת תמונה במרווחי זמן קבועים למשך הזמן הרצוי.

השתמש בסורק תהודה מהיר כדי למנוע הלבנת אור ולשמור על רזולוציה גבוהה.

השתמש בהגדרת השדה הבהיר כדי להציג את צורת התא באופן חזותי, והשתמש במסנן פלואורסצנטי מתאים כדי ללכוד את הקרינה.

התחל הדמיית זמן-lapse של ה-NSC כדי לדמיין שלבים שונים של מחזור התא.

הכן מיקרוסקופ סריקת לייזר קונפוקלי להדמיה על ידי חימום מוקדם של תא בקרת הטמפרטורה המצורף ל-37 מעלות צלזיוס באטמוספירה של 5% פחמן דו חמצני. מקם את צלחת 96 הבארות בתוך תא המיקרוסקופ שחומם מראש והבא את הבאר הראשונה למיקוד. לאחר מכן, פתח את תוכנת ההדמיה ולחץ באמצעות לחצן העכבר הימני בחלון הראשי כדי לבחור Acquire Acquisition Controls and Deacquisition על מנת לפתוח את TI Pad ולבחור את מטרת התוכנית Apo VC 20x DIC.

לאחר מכן, לחץ על רכוש בקרות רכישה ולאחר מכן פתח את אפשרויות ה-time lapse. הגדר את המרכז של כל באר כמיקום stage ובחר באפשרות תמונה גדולה ל-7 על 7 מילימטרים בריבוע. התבונן בתמונת פסיפס סביב מרכז כל באר. הגדר את החפיפה עבור תמונת הפסיפס הגדולה ל-5% והגדר את התדירות כך שהתמונות יצולמו כל 20 דקות למשך 24 שעות.

תחת הגדרות A1 פלוס, בחר את רמת המתח של צינור מכפיל הפוטו עבור כל פלואורסצנטיות המפורטת בשורת התפריטים. בחר כדי להשיג תמונות באמצעות סורק תהודה מהיר בפורמט של 512 על 512 פיקסלים, והשתמש ב-DIC כדי להמחיש את התאים. לאחר מכן, בחר את התיקיה לשמירת קבצי הנתונים. בחר בלחצן הפעל כעת בחלון רכישת ND כדי להתחיל ברכישה.