JoVE Encyclopedia of Experiments
מדעי המוח
0 צפיות • 2:24 דק' • June 17th, 2025
התחל עם עכבר מורדם המאובטח במערכת כלוב ניידת.
לעכבר יש עדשת מקדם שבירה שיפוע מושתלת מראש המכוונת לאמיגדלה של המוח, שם נוירונים מבטאים חלבון פלואורסצנטי רגיש לסידן.
משטח העדשה מכוסה להגנה.
אפשר לעכבר להתעורר ולאחר מכן הפעל זרימת אוויר לסיבוב כלוב ללא חיכוך.
הסר את מכסה העדשה ומקם מיקרוסקופ ממוזער מעל המוח.
הפעל את נורית ה- LED של המיקרוסקופ. לאחר מכן, יישר את המיקרוסקופ כך שהעדשה תהיה מרוכזת בשדה הראייה.
צלם את תמונת העדשה והתאם את מיקום המיקרוסקופ.
כאשר הכלוב מסתובב, תנועות הרגליים של העכבר יוצרות פחד, ומעוררות את נוירוני האמיגדלה.
זה מעורר זרם של יוני סידן, הנקשרים לאינדיקטורים פלואורסצנטיים.
נורית ה-LED מעוררת את האינדיקטורים הקשורים לסידן, וגורמת להם להאיר.
עדשת מקדם השבירה של השיפוע לוכדת ומעבירה ביעילות את הקרינה הזו למיקרוסקופ.
זה מאפשר הדמיית סידן בזמן אמת של פעילות עצבית באמיגדלה.
כדי להעריך את איכות השתלת עדשת ה-GRIN, הנח כלוב פחמן מתחת לעכבר המורדם על מוט הראש של מערכת כלוב ביתית ניידת, והפעל את זרימת האוויר כך שהכלוב ינוע בחופשיות ללא חיכוך. השתמש בתופס מיקרוסקופ ובמניפולטור סטריאוטקסי כדי ליישר אנכית מיקרוסקופ ממוזער למסגרת, לפני הורדת המיקרוסקופ עד שפני השטח של עדשת ה-GRIN המושתלת יופיעו בשדה הראייה של התמונה בתוך התוכנה. יישר את מרכז עדשת ה-GRIN המושתלת עם מרכז שדה הראייה, וצלם את התמונה של פני השטח של עדשת ה-GRIN המושתלת. לאחר מכן, הרם לאט את עדשת האובייקט של המיקרוסקופ תוך התבוננות בתמונה להופעת תאים המבטאים GCaMP.