אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 3:18 דק׳ • June 17th, 2025
קח נוירונים ראשוניים בקליפת המוח של מכרסמים שגודלו על צלחת מצופה עם תחתית זכוכית המכילה מדיה.
תאים אלה מבטאים חלבון הקשור ל-ALS מקודד גנטית וחיישן ביולוגי של סידן.
החלף את המדיה במאגר דל אשלגן כלורי.
דגירה כדי לשמור על פעילות עצבית במנוחה ורמות סידן בסיסיות.
הרכיבו את המנה על במת מיקרוסקופ קונפוקלי ומקמו את צינור הזילוף.
באמצעות תאורת שדה בהיר, התמקדו בתאי העצב, ואז עברו להדמיה פלואורסצנטית.
באמצעות הלייזר של המיקרוסקופ, עורר את החיישן הביולוגי ורשום את פליטת הקרינה כדי לקבוע את רמות הסידן התוך-תאיות הבסיסיות.
לאחר מכן, שטפו את המנה עם מאגר אשלגן כלורי גבוה.
ריכוז האשלגן הגבוה מפרק את הנוירונים, ופותח תעלות סידן מגודרות מתח במסופים הפרה-סינפטיים. זה מאפשר זרימת סידן, אשר יוזמת פעילות סינפטית עצבית.
הסידן התוך תאי המוגבר נקשר לחיישן הביולוגי, וגורם לשינוי קונפורמציה המשפר את הקרינה.
המשך להקליט פלואורסצנטיות כדי למדוד שינויים בזמן אמת ברמות הסידן התוך תאי, וחשוף פעילות סינפטית עצבית.
48 שעות לאחר הטרנספקציה עם GCaMP6m, דגרו על הנוירונים הראשוניים בקליפת המוח של המכרסמים עם ACSF נמוך של אשלגן כלורי למשך 15 דקות. לאחר מכן הרכיב את הצלחת על פלטפורמת ההדמיה ודמיין את הקרינה GCaMP6m באמצעות מסנן FITC ומטרה פי 20 או פי 40. לאחר בחירת שדה ההדמיה והפעלת מיקוד מושלם, צלם תמונת סטילס בודדת עם ערוצי FIT
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים