הדמיה של דפוסי הקרנה אקסונליים של נוירונים מוטוריים עובריים בדרוזופילה

התחל עם צינור המכיל עוברי דרוזופילה בשלב מאוחר 16 במדיום הרכבה.

הנוירונים המוטוריים של דרוזופילה הם בעלי תווית חיסונית.

העבירו עובר למגלשת זכוכית והוציאו אותו ממדיום ההרכבה.

לאחר מכן, הניחו את צד הגחון של העובר כלפי מעלה ונתחו אותו.

כוון את החלק הקדמי המכיל את הנוירונים המוטוריים כשהצד הגבי כלפי מעלה.

בעזרת מחט טונגסטן חותכים לאורך קו האמצע הגבי ומורחים את דופן הגוף. העבירו את העובר למדיום ההרכבה. לאחר מכן, הסירו את האיברים הפנימיים כדי לחשוף את תאי העצב שמסומנים

.

העבירו את העובר לשקופית חדשה, ואז הרכיבו ואטמו אותו.

התבונן תחת מיקרוסקופ ניגודיות הפרעות דיפרנציאליות כאשר האור עובר דרך העובר, ויוצר תמונה ברזולוציה גבוהה.

תאי העצב המסומנים עם דפוסי הקרנה אקסונליים נראים חומים כהים על רקע בהיר.

נוירונים מוטוריים מסתעפים לשני עצבים עיקריים: העצבים הבין-סגמנטליים והסגמנטליים, וענף משני, העצב הרוחבי, המעצבב את השרירים.

כדי להפיל את העוברים, במה אותם על מגלשת זכוכית

ראשית, העבירו אותם לטיפה של גליצרול גחון כלפי מעלה. לאחר מכן, תחת מיקרוסקופ דיסקציה, חתכו את החלק הקדמי ברבע מאורך הגוף. והסר את האזור האחורי ביותר, הנקי מאקסונים מוטוריים.

כעת, בעזרת בדיקת מחט, הזיזו את התכשיר מהגליצרול, כשהצד הגבי מכוון כלפי מעלה, ומקמו אותו אופקית בשדה הראייה. השלב הבא דורש מחט טונגסטן עדינה שהוחדרה לאזור החלול של בדיקת מחט ולאחר מכן כפופה בקצה. בעזרת מחט הטונגסטן, בצע חתך קטן בקצה האחורי של העובר, והמשיך לחתוך את קו האמצע הגבי.

ודא שקצה מחט הטונגסטן אינו נוגע במשטח מגלשת הזכוכית במהלך הדיסקציה, מכיוון שהמחט תתכופף בקלות כנגד הזכוכית.

לאחר מכן בעזרת הבדיקה, החזר את התכשיר בחזרה לטיפת הגליצרול, ומקם אותו בצד הגב כלפי מעלה. שם, נתק את המעי מדופן הגוף על ידי פתיחת כל דופן גוף בכיוון רוחבי גחוני. שני קירות הגוף צריכים להתפרק. כעת, בעזרת הגשושית, הזיזו בזהירות את דשי קיר הגוף על מגלשת זכוכית. בשקופית, השתמש במחט טונגסטן כדי להסיר את האיברים הפנימיים על ידי דחיפתם לרוחב.

כדי לייצב את מחט הטונגסטן ולמנוע ממנה להינזק, שמור על בדיקות המחט החלולות המחזיקות את מחט הטונגסטן צמודות אל פני השטח של מגלשת הזכוכית תוך מניפולציה של מחט הטונגסטן.

כעת הרכיבו את התכשירים ו -8 מיקרוליטר של תמיסת הרכבה על מגלשת זכוכית חדשה. צרף כיסוי ואטום את הקצוות כלפי מטה עם לק רגיל. לאחר מכן, צלם תמונות ברזולוציה גבוהה באמצעות אופטיקה של DIC.