אפיון התכונות המכניות של רקמת מוח של עכבר באמצעות מיקרוסקופ כוח אטומי

קח צלחת מצופה דבק ביולוגי עם פרוסת מוח עכבר משותקת במדיום מחומם מראש.

הנח אותו על מיקרוסקופ כוח אטומי מחומם מראש או שלב AFM כדי לשמור על תנאים פיזיולוגיים.

מרחו טיפה של המדיום על החרוז הכדורי של שלוחת ה-AFM הממוקמת מעל ראש ה-AFM.

לאחר מכן, מקם מחדש את ראש ה-AFM וטבל אותו במדיום.

יישר את קרן הלייזר על השלוחה כדי לעקוב אחר סטיית השלוחה באמצעות הפוטו-דיודה.

הורד את בדיקת ה-AFM עד שהיא באה במגע עם פני רקמת המוח.

למדידת תאימות זחילה, תכנת את בדיקת ה-AFM להפעיל כוח קבוע.

כוח זה גורם לעיוות הרקמה בזמן שהשלוחה מתכופפת. הלייזר מזהה כיפוף שלוחה

ומודד את נוקשות הרקמות.

למדידת הרפיית כוח, הכניסו את הרקמה לעומק קבוע ושמרו עליה.

הלייזר עוקב אחר כיפוף שלוחה כדי למדוד את עמידות הרקמה והרפיה לאורך זמן, ומאפשר הערכה מדויקת של התכונות המכניות של הרקמה.

טען בזהירות בדיקת AFM עם קבוע קפיץ נומינלי של 0.03 ניוטון למטר וחרוז בורוסיליקט בקוטר 20 מיקרומטר לתוך מחזיק הבדיקה. הנח פרוסת מוח המותקנת בצלחת פטרי על תנור חימום המותקן על במת AFM שחומם מראש ל-37 מעלות צלזיוס.

לאחר מכן, הוסיפו כ -2 מיליליטר של מדיום מחומם מראש.

לאחר מכן, הוסף בזהירות טיפת מדיום על בדיקת ה-AFM כדי להגן עליה מפני שבירה עקב מתח פנים כאשר היא מורידה לתוך המדיום המקיף את פרוסת המוח. לאחר מכן, מקם מחדש את ראש ה-AFM על הבמה. והתחל להוריד את הראש עד שהוא שקוע במדיום.

בעזרת המיקרוסקופ האופטי, הזז את ה-stage כך שאזור העניין יהיה מתחת לבדיקת ה-AFM המכוילת. לאחר מכן, הורד את בדיקת ה-AFM כדי ליצור מגע עם פני הרקמה. על מנת לבצע את ניסויי תאימות הזחילה, בנה פונקציית כוח מופעל בעורך הפונקציות של התוכנה.

הפונקציה מורכבת מרמפה של 0.1 שניות ל-0.05 ננו-ניוטון, המוחזקת למשך 20 שניות, ואחריה רמפה של שנייה אחת למטה ל-0 ננו-ניוטון. התוכנה תרשום נתונים על כניסת בדיקות ה-AFM לרקמה במהלך פונקציית הכוח המופעל. לאחר הפעלת ניסוי תאימות הזחילה, ערוך ניסויי הרפיית כוח על ידי יצירת פונקציית הזחה יישומית בתוכנה. הפעל פונקציה זו בזמן שהתוכנה אוספת נתונים על הכוח שחווה בדיקת AFM כשהיא נכנסת לתוך הרקמה.