הדמיית דור הרמוני שני במודל חולדה לחקר פגמים בטובולין

התחל עם פרוסת רקמת מוח של חולדה המותקנת על מגלשת זכוכית וטבולה במאגר.

החולדה סובלת מטובולינופתיה, מצב הנגרם על ידי פגמים בטובולין, אבני הבניין של מיקרו-צינוריות, מה שמוביל להצטברות ושיבוש חריגים שלהם.

זה משפיע גם על ייצור המיאלין במערכת העצבים המרכזית.

הנח את הפרוסה מתחת למיקרוסקופ עירור דו-פוטוני מכוסה להדמיה מפורטת.

הרטיבו את הפרוסה באופן קבוע כדי לשמור על שלמותה.

הגדר את המיקרוסקופ למצב הדמיה שאינו סרוק, טכניקה נטולת תוויות לזיהוי אותות חלשים.

חשוף את הרקמה ללייזר אינפרא אדום פועם.

מיקרו-צינורות פולטים אור כאותות הניתנים לזיהוי הידועים כאותות דור הרמוני שני או אותות SHG.

אזורים עם הצטברות חריגה של מיקרו-צינורות מגבירים את האותות הללו, ומגבירים את יכולת הזיהוי שלהם.

החל מסננים אופטיים כדי לחדד את האותות הללו.

התמונה שצולמה חושפת צפיפות וחריגות במיקרו-צינוריות, כאשר עוצמת SHG גבוהה ואשכולות מצביעים על פגמים בטובולין וייצור מיאלין מופחת.

הנח את הדגימה מתחת למיקרוסקופ ומקם אותה כראוי מתחת למטרה על ידי תצפית ישירה דרך העיניים עם האור המועבר. הסר את עודפי ה- HBSS כך שסרט נוזלי דק יכסה את כל הדגימה. בדוק ויזואלית את הסרט הנוזלי כל כמה דקות כדי למנוע אידוי וייבוש מוגזם של הדגימה.

הכינו את שלב המיקרוסקופ להדמיה לא סרוקה, הכוללת סגירת כל דלתות תא הדגירה החשוך, או כיסוי תא הדגירה בבד מצופה פוליאוריטן ניילון שחור. בחר את מצב ההדמיה הלא סרוקה לאורך נתיב השידור. בדרך זו, לכידת אות ה-SH החלש של טובולין תהיה אופטימלית.

לאחר מכן בחר את המטרה. לאחר מכן, הגדר עוצמת לייזר עם זמן שהייה של פיקסלים של 12.6 מיקרו-שניות. צלם תמונות שגודלן אינו עולה על 512 על 512 פיקסלים, במהירות 5 ובממוצע 2 לזמן רכישה ממוצע של 15 שניות. צלם תמונות תחילה באמצעות מסנן מעבר קצר של 485 ננומטר. ובשלב שני, הוסף מסנן פס פס חד של 405 ננומטר.