הדמיה וכימות של התחדשות אקסונלית בנוירונים של גנגליון רשתית של חולדה

קחו תרבית משותפת של תאי גליה המעטפים את חוש הריח האנושי האלמוות, או תאי OEG, ונוירונים אקסוטומיים של גנגליון רשתית של חולדות, או RGNs, על כיסוי.

תאי OEG מציגים תכונות נוירו-רגנרטיביות המאפשרות התחדשות אקסונלית ב-RGNs.

RGNs מסומנים בצבע חיסוני כך שהסומות, או גופי התאים שלהם, זוהרים באדום בעוד שהאקסונים שלהם זוהרים בירוק.

בעזרת אמצעי הרכבה, התקן את הכיסוי המכיל את התאים.

השתמש במיקרוסקופ אפיפלואורסצנטי כדי לצלם תמונות מרובות של RGNs.

פתח תמונה בתוכנת הדמיה.

כמת את אחוז הנוירונים עם האקסונים ביחס למספר הכולל של RGNs.

לאחר מכן, עקבו אחר אקסון שמתחיל מהסומה ועד הסוף והתחילו לעקוב אחר אקסונים כדי לקבוע את האורכים של כל האקסונים.

כמת את מדד ההתחדשות האקסונלית על-ידי חלוקת סכום כל האורכים האקסונליים במספר הכולל של RGNs.

הרכיבו את הכיסויים עם מדיום הרכבה ושמרו אותם על 4 מעלות צלזיוס. השתמש במטרה פי 40 של מיקרוסקופ אפיפלואורסצנטי כדי לכמת התחדשות אקסונלית. כמת את אחוז הנוירונים עם אקסונים ביחס לאוכלוסייה הכוללת של נוירוני גנגליון ברשתית.

השתמש בתוסף NeuronJ ב-ImageJ כדי לכמת את מדד ההתחדשות האקסונלית, או אורך אקסונלי ממוצע, שהוא סכום האורכים של כל האקסונים שזוהו חלקי המספר הכולל של נוירונים שנספרו, בין אם הם הציגו אקסון ובין אם לאו. לאחר פתיחת התמונה, לחץ על ניתוח והגדר קנה מידה לפי הגדרות המיקרוסקופ, תוך עבודה בפיקסלים למיקרומטר. בחר/י ״הוסף עקיבות״ כדי להתחיל במעקב אחר האקסונים, ולאחר מכן עקוב/י אחר האקסונים מהסומה ועד הסוף. לחץ על מדידת מעקבים, הצגת מדידות מעקב והפעלה.