ניטור ביטוי גנים בזמן אמת בפרוסות מוח באמצעות הדמיה תלת מימדית

התחל עם צלחת המכילה פרוסות מוח קליפת המוח מעוברי עכברים טרנסגניים במדיה בתוספת לוציפרין.

האזור בקליפת המוח מכיל תאי גזע עצביים המבטאים חלבונים פלואורסצנטיים ירוקים או GFPs וגן מעניין המאוחה לגן מדווח לוציפראז.

הנח את המנה על במת המיקרוסקופ למדידות פלואורסצנטיות ובהירות.

צלם תמונות בדיקה של פלואורסצנטיות GFP, תוך התמקדות באזורי עניין.

במהלך התמיינות עצבית, תאי גזע מתחילים לבטא את הגן המעניין ולייצר חלבונים מאוחים עם האנזים לוציפראז.

הלוציפרין מקיים אינטראקציה עם אנזימי לוציפראז, ויוצר ביולומינסנציה המשקפת ישירות את ביטוי הגן המעניין במהלך התמיינות.

צלם תמונת פלואורסצנציה כדי לזהות אזורי פעילות ספציפיים, תמונת ביולומינסנציה לניטור ביטוי גנים דינמי ותמונת שדה בהיר כדי לספק מידע מורפולוגי.

רכוש תמונות תלת מימדיות אלה כדי לדמיין ביטוי גנים במהלך התמיינות עצבית בסביבת הרקמה המקומית.

כדי להמחיש את ביטוי מדווח הלוציפראז בתוך תרביות הפרוסה, בחר את המטרה פי 40. והנח את צלחת הדגימה על במת המיקרוסקופ. רכוש תמונת בדיקה של הקרינה. והגדר את המיקום ומישור המיקוד לאזור העניין תחת הארת אור העירור המתאים. לאחר מכן הפעל את רכישת ה-time lapse על ידי רכישות זוהר תלת מימדיות, פלואורסצנטיות ושדה בהיר למשך 24 שעות.