הדמיה של רשתות עצביות וכלי דם בעובר תרנגולת

התחילו עם ביצת תרנגולת מופרית עם חלון המכילה עובר בשלב מוקדם עם צינור עצבי שנכרת ברמה של סומיטים מ-1 עד 7.

קח צינור עצבי של תורם עם תווית GFP מעובר עוף טרנסגני התואם שלב והשתיל אותו במקבל, תוך הבטחת אוריינטציה אנטומית נכונה.

הסר עודפי נוזלים סביב השתל כדי לשפר את ההידבקות בין התורם לרקמות המארח.

אטום את החלון עם סרט שקוף כדי למנוע התייבשות וזיהום.

דגרו על הביצה עד שהעובר מתפתח לשלב הרצוי.

הסר את הקלטת.

זהה וריד ויטלין על החלמון המוביל דם לכיוון העובר והסר את קרום הוויטלין שמעליו.

בעזרת מחט זכוכית, הזריקו בהתמדה צבע פלואורסצנטי ליפופילי לווריד.

דמיין את העובר תחת מיקרוסקופ סטריאופלואורסצנטי.

הצבע המוזרק נקשר לתאי האנדותל המצפים את כלי הדם, ומדגיש את רשת כלי הדם, בעוד שהצינור העצבי המסומן ב-GFP מאפשר מעקב אחר רשת עצבית.

כאשר מוכנים להתחיל בהליך ההשתלה, העבירו בזהירות את הצינור העצבי המנותח מזכוכית השעון לעובר המארח. מקם את הצינור העצבי בכיוון הנכון. ודחף בעדינות את האקספלנט הסמוך לאזור הכריתה. במידת הצורך, השתמש באזמל המיקרו כדי לקצץ את האקספלנט לגודל המדויק של האזור הכרות.

ברגע שאתה במצב הנכון, הסר PBS ונוזלים אחרים כדי לעזור לתורם ולרקמות המארח להיצמד ולבסס את השתל. ניתן להעריך את השילוב המוצלח של הצינור העצבי החיובי GFP המושתל במארח התרנגולות מסוג הבר תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי. אטום את החלון כולו עם סרט שקוף ברוחב 24 מילימטר כדי למנוע התייבשות וזיהום.

סמן את העובר הכימרי. ולהחזיר את הביצה לחממה להמשך התפתחות.

בנקודת הזמן הרצויה לניסוי, הוציאו את הביצית מהחממה. והסר את הסרט השקוף כדי לקבל גישה לעובר. לאחר הנראה, אתר וריד נגיש על החלמון, וודא שזרימת הדם מופנית לכיוון העובר.

בחר נקודת הסתעפות באחד מוורידי הוויטלין למיקום ההזרקה. השתמש בפינצטה כדי להסיר את קרום הוויטלין מעל נקודת ההזרקה שנבחרה על ידי קריעה בכיוונים מנוגדים. לאחר מכן, התאם את קוטר מחט הזכוכית הנמשכת לגודל הווריד.

טען את המחט ב-5 עד 10 מיקרוליטר של תמיסת DiI. הכנס במהירות את המחט לווריד. ונושפים בהתמדה עם צינור הפה כדי לאפשר ל-DiI להצטרף לזרימת הדם לאט מבלי ליצור קריש. ניתן להעריך את הצלחת הזרקת ה-DiI על ידי התבוננות קצרה בעובר תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי.