הדמיה של מעברי סידן מהירים בקצות עצבים של עכברים באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית

התחל עם תא ניסוי מצופה אלסטומר סיליקון המכיל שריר עכבר מאובטח הממוקם תחת מיקרוסקופ קונפוקלי.

השריר שקוע בתמיסה פיזיולוגית המכילה מעכבים החוסמים את התכווצויות השרירים.

גדם העצב המסומן בצבע סידן פלואורסצנטי ממוקם בתוך אלקטרודת היניקה, המחוברת לסטימולטור חשמלי.

בצומת העצבי-שרירי, העצב ההיקפי מחובר לשריר.

הפעל גירוי חשמלי על העצב באמצעות האלקטרודה. זה מעורר זרם מהיר של יוני סידן הנקשרים לצבע סידן תוך תאי.

האירו את הצומת העצבי-שרירי כדי לעורר את צבע הסידן, ולגרום לו להאיר.

לאחר מכן, צלם תמונות ברזולוציה גבוהה כדי להקליט מעברי סידן מהירים בקצות העצבים ההיקפיים.

בחר את אזור העניין ומדוד את עוצמת הקרינה.

עלייה מהירה בעוצמת הקרינה מצביעה על זרימת סידן בקצות העצבים ההיקפיים, בעוד ירידה משקפת פינוי סידן.

מלאו את מערכת הזילוף בתמיסת ה-Ringer המכילה 10 מיקרו-טוחנת D-tubocurarine והפעילו את משאבת יניקת הזלוף כדי להתחיל בזילוף. במיקרוסקופ קונפוקלי לסריקת לייזר, או תוכנת LSCM, בחר אלקטרופיזיולוגיה ומצב רכישה כדי להגדיר פרמטרי הדמיה. בהגדרות תפריט העבודה, בחר את הגדרות הטריגר כדי להפעיל את הסטימולטור עם דופק הסנכרון של המיקרוסקופ והגדר את שדה ההדק על המסגרת לערוץ OUT 1.

סובב את מצב הסריקה ל-xyt בתדר סריקה של 1,400 הרץ. מקדם הזום צריך להיות 6.1 כאשר חור הסיכה פתוח לחלוטין. ודא שמצב x דו-כיווני רציף מופעל. לאחר מכן הגדר את הזמן המינימלי ליצירת מסגרת על 52 אלפיות השנייה ואסוף פריימים בסרטון גולמי ב -20 פריימים. הגדר את אורך גל העירור של לייזר הארגון על 488 ננומטר, עם 8% מהספק הפלט.

כאשר הפרמטרים מוגדרים, לחץ על כפתור מצב חי כדי לקבל תצוגה מקדימה חיה של מסופי העצבים הטעונים בצבע. במצב חי, חפש את אזור העניין, או ROI, כדי להשיג את המיקוד הטוב ביותר, ולאחר מכן העבר את העיכוב על הממריץ ב-2 אלפיות שנייה פחות ביחס לערך הקודם. והפעל את תוכנת איסוף הנתונים כדי לרכוש 26 רצפים על ידי הזזת כל רצף שתי אלפיות שנייה מהקודם.