דפוסים של תאים עובריים באמצעות שבב להעיף ביו
October 1st, 2007
אנו להדגים שיטה פשוטה עבור הצבת תאים במקומות הרצויים על המצע. שיטה זו דפוסי תאים על ידי הטלת שבב סיליקון שמכיל microwells מלא תאים על גבי המצע. שיטה זו מספקת דרך חדשה כדי לווסת איתות diffusible ו juxtacrine בין תאים.
אני ניקל מיטל. אני סטודנטית לתואר שני במעבדת באומן. היום אני הולך לדבר על מכשיר שפותח על ידי שני סטודנטים לשעבר במעבדה שלנו, שנקרא שבב ה-bio flip.
ומכשיר זה מאפשר העברת תאים על מצע לבחירת הנסיין בתצורה של בחירת הנסיין. אז המכשיר עצמו, יש לנו אחד מהם כאן הוא פשוט מאוד. זה בעצם מורכב מבארות זעירות בחתיכת סיליקון.
כל באר מתוכננת בדרך כלל להכיל תא בודד בלבד, אך במידת הצורך, אנו יכולים כמובן להגדיל אותם. ייצור המכשיר נעשה כך שהבארות יהיו באותו סידור שהתאים יגיעו בסופו של דבר למצע. אז המכשיר עצמו מיוצר באמצעות צילומי אור רכים.
בפרט, אנו משתמשים ב-PDMS, שהוא פולי דימתיל סובוקסן, ומעצבים אותו מפרוסת סיליקון. יש לנו אחד מהם כאן. אז פרוסת התבנית עצמה מיוצרת באמצעות פוטוליתוגרפיה סטנדרטית כדי לעצב התנגדות לצילום SUA, אשר מסובבת על פרוסת הסיליקון.
אז בקצרה, תאים מועברים למצע המועדף על ידי מילוי הבארות על שבב ה-bio flip בתאים אלה. לאחר מכן אנו מורחים את השבב על המצע הנבחר, לרוב תרבית רקמה של פוליסטירן. ולבסוף, אנו הופכים את השילוב ומאפשרים לתאים ליפול מהבארות אל המצע.
אני סטפני פלבין. אני חוקר לתואר ראשון כאן במעבדת גולדמן, והיום אדגים כיצד להשתמש בשבב הביו-פליפ כדי לעצב תאים יום קודם. אנחנו רוצים לעשות ניסוי דפוסים.
נחבר פלזמה את ה-PDMS לשקופית זכוכית בגודל אינץ' על אינץ'. ואז אנו משרים את השבב למשך הלילה, היטב עם הצד כלפי מטה ותמיסת PBS. נחתוך גם אטמים שישמשו בניסוי הדפוס ונאסוף קליפסים קלסר שישמשו גם כן.
מרחו 200 מיקרוליטר BSA על פני כל שבב. ערבב את פני השבב של קצה הפיפטה כדי להוציא בועות ולאפשר לתמיסת BSA למלא בארות. תן לשבבים לשבת מתחת למכסה המנוע למשך שעה בתאי מעבר אור UV כרגיל.
לאחר שעה, שאפו את תמיסת ה-BSA מהשבבים ופתחו כל שבב עם 200 מיקרוליטר PBS, מרחו 200 מיקרוליטר של תמיסת תאי מעבר בצפיפות של 10 עד ששת התאים למיל. לאחר חמש עד 10 דקות של המתנה עד שהתאים ייפלו לבארות, שטפו את פני השבב עם PBS. הטה את השבב לפינה אחת בזווית של כ-15 מעלות והוציא לאט לאט את תמיסת התא מהפינה התחתונה של השבב.
החזר את השבב לרמה והוסף לאט לאט 50 מיקרוליטר PBS לפינה העליונה. חזור על שלב הכביסה כמה פעמים שצריך. לאחר שטיפת xls מפני השטח של השבב, הוסף כ-50 מיקרוליטר מדיה לאטם הפנימי של המנה.
הוסף מדיה לחלק העליון של כל שבב. לאחר מכן, הפוך את המנה והטה והנמיך על פני השבב, החל מפינה אחת. ואז משטחים את הצ'יפס, משטחים את המנה על הצ'יפס כדי למנוע היווצרות בועות בין המנה לצ'יפס.
הוסף קליפס קלסר לכל צד של השבב כדי לאבטח אותו למקומו. והסר את הידיות מכל קליפ קלסר כך שכאשר השבב מתהפך, הוא יישב ישר על הצלחת, יעביר את השבב לחממה ויתהפך במהירות, תוך הימנעות והימנעות מכל תנועה מיותרת.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
סקירה כללית
מחקר זה מציג שיטה חדשנית למיקום תאים על מצע באמצעות מכשיר הנקרא צ'יפ פיפ ביולוגי. על ידי הפיכת צ'יפ סיליקון עם מיקרו-בארות מלאות בתאים על המצע, חוקרים יכולים לשלוט ביעילות במיקום התאים, ולשפר את האפנון של האיתות בין התאים.
מרכיבי המחקר העיקריים
תחום המדע
- ביולוגיה תאית
- נוירומדע
- ביו-הנדסה
רקע
- מיקום התאים חיוני לחקר האינטראקציות התאיות.
- שיטות עכשוויות עשויות להיות חסרות דיוק במיקום התאים.
- הצ'יפ הפיפ הביולוגי מציע פתרון פשוט ויעיל.
- טכניקה זו יכולה להשפיע על איתות מפזר וגם על איתות צמוד.
מטרת המחקר
- לפתח שיטה אמינה למיקום תאים על מצעים.
- לשפר את ההבנה של מנגנוני האיתות התאי.
- לספק כלי לחוקרים בתחומים ביולוגיים שונים.
שיטות בשימוש
- תכנון וייצור של הצ'יפ הפיפ הביולוגי.
- מילוי מיקרו-בארות בתאים.
- הפיכת הצ'יפ על המצע הרצוי.
- תצפית וניתוח מיקום התאים והאיתות.
תוצאות עיקריות
- מיקום מוצלח של תאים במיקומות ממוקדות.
- שיפור האפנון של האיתות התאי.
- הוכחת קלות השימוש של המכשיר.
- יישומים פוטנציאליים במגוון מערכות ניסויים.
מסקנות
- הצ'יפ הפיפ הביולוגי הוא כלי חדשני למיקום תאים.
- שיטה זו יכולה להשפיע באופן משמעותי על חקר האיתות התאי.
- מחקר עתידי יכול להרחיב את הטכניקה ליישום רחב יותר.
