הדמיה in vivo של תגובות נוירונים של גנגליון גניקולאט באמצעות מיקרוסקופיה אפיפלואורסצנטית

התחילו עם עכבר מורדם עם גנגליון גנקולטי שנחשף בניתוח, מקבץ של נוירונים היקפיים המעבדים טעם.

נוירונים אלה מבטאים GCaMP, אינדיקטור סידן שזוהר עם קשירת סידן.

הסר כל נוזל המכסה את הגנגליון להדמיה ברורה.

הנח את העכבר על כרית סופגת מתחת למיקרוסקופ ואתר את הגנגליון הגניקולטי באמצעות ציוני דרך אנטומיים.

באמצעות מסנן מתאים על היקף האפיפלואורסצנטי, זהה את הקרינה הירוקה מתאי עצב המבטאים GCaMP.

לאחר מכן, הכנס מחט מחלק המחוברת לצינור ההעברה של הטסטנט לתוך פיו של העכבר והעביר את הטעם.

הטסטנט מגרה את תאי קולטני הטעם, ומשחרר ATP, שנקשר לקולטני נוירונים של גנגליון, ומעורר זרם סידן.

יוני סידן אלה נקשרים ל-GCaMPs, וגורמים לפליטת פלואורסצנטיות.

יישר את המצלמה עם שדה הראייה של המיקרוסקופ וסנכרן את הקלטת הווידאו עם העברת טסטנט כדי ללכוד פעילות עצבית בזמן אמת באמצעות שינויים פלואורסצנטיים.

כדי להפעיל את לוח הטסטנט, השתמש ביניקה כדי להסיר את הנוזל מעל הגניקולט והנח את העכבר על כרית סופגת מתחת למיקרוסקופ ניתוח. השתמש בחור שנותר בבולה, בחור בעצם הטמפורלית ובעצב השביעי כדי לאתר את הגנגליון הגניקולי. והשתמש במסנן FITC/GFP בהיקף האפיפלואורסצנטי כדי לבדוק אם יש נוירונים גנגליונים גנקולטיים בודדים המבטאים GCaMP. הנח את מחט החלוקה לקו טעים אחד בחוזקה לתוך פיו של בעל החיים. סנכרן את תחילת הקלטת הווידאו עם תחילת המצגת הטעימה, תוך צפייה בהזנה החיה לתגובות.