הדמיה קונפוקלית תלת-ממדית ברזולוציה גבוהה של מחסום הדם-מוח בקטע מוח של עכבר

התחל עם תוכנת מיקרוסקופ קונפוקלי והגדר את פרמטרי רכישת התמונה.

לאחר מכן, קחו קטע מוח של עכבר המותקן על מגלשת זכוכית. חלק זה מוכתם בנוגדנים המכוונים לרכיבי מחסום דם-מוח.

מחסום הדם-מוח הוא ממשק תאי סלקטיבי בין זרם הדם למוח לשמירה על הומאוסטזיס.

מרחו טיפה של שמן טבילה עם מקדם שבירה רצוי על הכיסוי כדי לייעל את הרזולוציה ולמזער את שבירת האור.

הנח את השקופית על המיקרוסקופ stage והשתמש במנורת האפיפלואורסצנציה כדי לדמיין את הדגימה.

בעזרת המסננים המתאימים, אתר את הגרעינים המוכתמים ב-DAPI וזהה את מקטע הנימים להדמיה.

התחל את הסריקה החיה והתאם את הפרמטרים עבור כל ערוץ פלואורסצנטי כדי לצלם תמונות באיכות גבוהה.

לבסוף, הגדירו את נקודות ההתחלה והסיום לרכישת Z-stack כדי ליצור תמונה תלת מימדית של מחסום הדם-מוח.

בתפריט הרכישה של התוכנה השולט במיקרוסקופ, הגדר את הפרמטרים של רכישת התמונה. בתפריט הנפתח של גודל התמונה, בחר ערך של 1,024 על 1,024 פיקסלים. שנו את גודל הפיקסלים לערך בין 200 ל- 300 ננומטר באמצעות התאמת הערך של התפריט 'זום'.

בתפריט הנפתח מהירות רכישה, בחר ערך של 400 הרץ. לאחר מכן, בתפריט הגדרות מערכת, בחר את עומק הפיקסלים ושנה את הערך ל- 12 סיביות. לאחר מכן, בתוכנת המיקרוסקופ, בכרטיסייה רכישה, הפעל את האפשרות לרכישת מסגרת רציפה. הגדר את עובי המקטע האופטי לערך בין 0.75 ל- 1 מיקרומטר לכל ערוץ, על-ידי שינוי הערך בתפריט Pinhole.

הוסף טיפה של שמן טבילה עם מקדם שבירה של 1.52 על גבי הכיסוי, כאשר קטע המוח יתאים למקדם השבירה של כיסוי הזכוכית והמטרה. לאחר מכן, הנח את הדגימה במיקרוסקופ, והפעל את המנורה האפיפלואורסצנטית כדי לדמיין את הדגימה באמצעות משקפת המיקרוסקופ. לאחר מכן, לחץ על הכפתור כדי להתחיל את מצב הסריקה החיה. במהלך הסריקה, התאם את הרווח ועוצמת הלייזר עבור כל ערוץ כדי למקסם את הטווח הדינמי של התמונות ולהימנע מרוויית פיקסלים. לאחר מכן קבע את קטעי ההתחלה והסיום לביצוע ערימות Z אופטיות המשתרעות על כל נפח הנימים, והשתמש בגודל צעד של 0.45 מיקרומטר.

חשוב לציין, יש לשמור על כל הגדרות הרכישה זהות במהלך סשן ההדמיה.