הדמיית מצב חמצון חיזור מיטוכונדריאלי בתאי עצב ראשוניים באמצעות אינדיקטור רציומטרי

קח כיסוי עם נוירונים ראשוניים מהונדסים גנטית בתא הדמיה מלא במאגר הדמיה.

תאים אלה מבטאים אינדיקטור חמצון חיזור מבוסס חלבון פלואורסצנטי במטריצה המיטוכונדריאלית.

מקם את החדר מתחת למיקרוסקופ פלואורסצנטי, זהה את התאים באור נראה ולאחר מכן עבור להדמיה פלואורסצנטית.

החל שני אורכי גל עירור כדי לעורר את המחוון ולמדוד את פליטת הקרינה.

יחס עוצמת הקרינה באורכי גל אלה משקף את מצב החמצון המיטוכונדריאלי.

הציגו NMDA להפעלת קולטני NMDA תאיים, הגורמים לזרם סידן תוך תאי.

העלייה מעוררת ספיגת סידן מיטוכונדריאלית, וגורמת לייצור ROS וחמצון מיטוכונדריאלי

.

ה- ROS מחמצן את המחוון, משנה את הקרינה שלו ומגדיל את יחס האות.

הציגו חומרים מחמצנים כדי לחמצן את המחוון במלואו, ולמקסם את יחס האות.

הסר את המאגר, ולאחר מכן הכנס חומרי הפחתה כדי להפחית את הצבע לחלוטין, ולמזער את יחס האות.

השתמש ביחסי האותות המקסימליים והמינימליים כדי לכייל ולכמת חמצון מיטוכונדריאלי המושרה על ידי NMDA.

להדמיה חיה, הגדר את מרווח הזמן ל-30 שניות ואת משך הזמן ל-25 דקות. לאחר מכן, הרכיבו את התאים, הניחו את החדר על המיקרוסקופ ומקדו את התאים כפי שהודגם קודם לכן. עבור למצב סריקה והשתמש בערוץ 488 ננומטר בתצוגה חיה כדי להתמקד ולאתר את התאים להדמיה. לחלופין, כדי להגדיל את מספר התאים המוקלטים בכל ריצה, השתמש בפונקציה מרובת הנקודות כדי לדמות שניים עד שלושה שדות