אפיון צמתים עצביים-שריריים בעכברים על ידי מיקרוסקופיה משולבת קונפוקלית וסופר-רזולוציה

התחל עם סיבי שריר עכברים קבועים וחדירים כימית המונחים בבארות של צלחת מרובת בארות.

דגירה בתמיסת חסימה כדי למזער קשירת נוגדנים לא ספציפיים.

הוסף נוגדנים ראשוניים המכוונים לחלבון פרה-סינפטי המתבטא בצומת העצבי-שרירי או NMJ.

יש לשטוף עם חוצץ כדי להסיר נוגדנים לא קשורים.

דגירה עם נוגדנים משניים מצומדים פלואורופור המכוונים לנוגדנים הראשוניים, ונוירוטוקסין מצומד פלואורופור הנקשר לקולטני אצטילכולין פוסט-סינפטיים.

שטפו עם מאגר כדי להסיר ריאגנטים לא קשורים.

הנח את הסיבים על שקופית עם אמצעי הרכבה, מקם כיסוי ואבטח בעזרת מגנטים גליליים כדי לשטח את הסיבים.

התחל בהדמיה באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי-STED.

עם תאורת לייזר, החלבונים המסומנים זוהרים.

מיקרוסקופיה קונפוקלית אינה מצליחה לפתור מבני NMJ עדינים יותר בבהירות בשל הרזולוציה המוגבלת והתפשטות הקרינה.

לעומת זאת, מיקרוסקופיה STED משתמשת בלייזר דלדול כדי לדכא את התפשטות הקרינה, מה שמאפשר הדמיה ברורה של NMJ.

לאחר המתת חסד, התחל להתגרות בשרירי השוקה הקדמיים בצרורות סיבים קטנים ברוחב של כמילימטר אחד באמצעות שני מלקחיים משוננים עדינים. לאחר מכן העבירו את צרורות השרירים הללו לצלחת של 24 בארות המכילה 1% טריטון X-100 שהוכנה ב-PBS, והניחו לה להתערבל בעדינות במשך שעה בטמפרטורת החדר, או חמש שעות בטמפרטורת 4 מעלות צלזיוס.

לאחר שטיפת הדגימות שלוש פעמים במשך 5 דקות עם PBS בטמ