הדמיית רקמות עמוקות של מוח דג זברה באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי בעל שלושה פוטונים

הנח צלחת פטרי המכילה דג זברה מורדם עם צינור מוכנס לפיו כדי להעביר מים מחומצנים מתחת לעדשת האובייקטיבית בהגדלה נמוכה של מיקרוסקופ שלושת הפוטונים.

מוחו של דג הזברה מכיל נוירונים מהונדסים גנטית המבטאים חלבונים בעלי תווית פלואורסצנטית להדמיית רקמות עמוקות במהלך ההדמיה.

האירו את המנה באמצעות מקור אור LED, והתאימו את פרמטרי ההדמיה לבהירות התמונה.

הורד את עדשת האובייקט עד שדג הזברה נראה, מרכז את ראשו בשדה הראייה.

החלף את עדשת ההגדלה הנמוכה במטרה ברזולוציה גבוהה להדמיית שלושה פוטונים.

הורד בזהירות את המטרה עד שהראש נראה ללא מגע פיזי, והגדר את ערכי הציר לאפס.

כבה את מקור אור ה-LED וסגור את הווילון הכהה כדי למזער רעשי רקע.

הגדר את פרמטרי ההדמיה ובצע הדמיה של שלושה פוטונים, כאשר אורכי גל ארוכים יותר מאפשרים עירור של שלושה פוטונים ברקמות עמוקות.

עם עירור, פלואורופורים עצביים פולטים פלואורסצנטיות, ומאפשרים הדמיה בזמן אמת של נוירונים בעומקים שונים.

לצורך הדמיה, הנח אובייקט הגדלה נמוכה על מיקרוסקופ שלושת הפוטונים. לאחר מכן הניחו את צלחת הפטרי המכילה את הדג והצינורות מתחת למיקרוסקופ, והשתמשו במקור אור LED כדי להאיר את צלחת הפטרי. מתוכנת רכישת התמונות, פתח את מצב המצלמה. לחץ על שידור חי. בחר ערוץ A בצד ימין של המסך והתאם את הגדרות ההיסטוגרמה כדי לראות את התמונה בבירור.

לאחר הגדרת הגדרת המנוע בבקר המנוע לבסיס, הורד את המטרה עד שהדג נראה. מקם את מרכז ראש הדג במרכז שדה הראייה. לאחר מכן הזיזו את המטרה למעלה והרחק מראש הדג. החלף את עדשת האובייקט בהגדלה נמוכה בעדשת האובייקט עם הצמצם המספרי הגבוה להדמיית שלושה פוטונים. לאחר מכן הזיזו אותו קרוב לכיוון ראש הדג. הגדר את ערכי הציר של כל המנועים לאפס.

הורד לאט את עדשת האובייקט, וודא שהאובייקט לא נוגע פיזית בראש. בתוכנת מצלמת CCD, הפסק להזיז את המטרה כאשר החלק העליון של הראש גלוי. והגדר את המיקומים x, y ו-z לאפס. כבה את מקור אור ה-LED וסגור את הווילון הכהה סביב המערכת. לאחר מכן הגדר את תוכנת רכישת ההדמיה למצב GG מרובה פוטונים עבור הדמיית שלושה פוטונים, והגדר את ההספק מתחת לעדשת המטרה לפחות ממיליוואט אחד.

לחץ על כפתור Live בתוכנת רכישת התמונות. פתח ערוצי PMT והתאם את הגבר ורמת הרקע של PMT בהתאם לצורך. התקדם לאט במעלה עדשת האובייקט כדי לאתר את פני הראש על ידי ניטור תעלת ה-THG מכלי הדם הגדולים ומשטח הזכוכית של החלון.