אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 2:07 דק׳ • June 17th, 2025
התחל עם פרוסת רקמת גליובלסטומה המתקבלת מגידול שנכרת בניתוח.
שמור על פרוסת הרקמה במדיום תרבית כדי לתמוך בהישרדות התאים.
תאי גידול בתוך הפרוסה מבטאים חלבון פלואורסצנטי ירוק, או GFP, המאפשר הדמיה של תאי גידול במהלך נדידת התאים.
הנח את צלחת התרבות המכילה את פרוסות הרקמה על במת המיקרוסקופ הקונפוקלי.
מקם חממה במה עליונה כדי לשמור על טמפרטורת המדיום.
בחר מטרה ודמיין את תרביות הפרוסות תחת המיקרוסקופ.
מיקרוסקופים משתמשים באור לייזר כדי לעורר את החלבונים הפלואורסצנטיים בתאים.
כעת, סרוק את הדגימה שכבה אחר שכבה כדי לצלם תמונות בעומקים שונים.
ערמו את התמונות כדי ליצור ייצוג תלת-ממדי מפורט של התאים.
לאחר מכן, צלם תמונות Z-stack במרווחי זמן קבועים כדי לעקוב אחר תנועת התא וכיוונו, מה שמאפשר לחקור את נדידת תאי הגידול לאורך זמן.
מניחים את המנה לתוך אינקובטור עליון של מיקרוסקופ אטום של 37 מעלות, 5% CO2 של מיקרוסקופ קונפוקלי. השתמש במטרת אוויר למרחק עבודה ארוך, פי 10 בשילוב עם הדמיה בודדת או מרובת פוטונים כדי ללכוד תמונות תלת מימדיות שנפתרו בזמן של נדידת תאים. דמיין את הפרוסה במיקרוסקופ, ואתר שדה מתאים עם צפיפות נאותה של תאי גידול מסומנים פלואורסצנטיים בין קצה הפרוסה למרכז הרקמה. לאחר מכן, במצב הניתוח הרב-ממדי של תוכנת ההדמיה, הגדר את מרכז מחסנית ה-z כך שכל המיקומים שיש לצלם יכילו אות סלולרי פלואורסצנטי גלוי. והגדר זמן מתאים לכל רכישת z-stack.