ניטור של פעילות יוביקוויטין-הפרוטאזום בתאי חיים באמצעות ערער-חלבון Degron (DGN) ירוק פלורסנט חלבון (GFP)-מבוסס כתב

16.1K צפיות

צוטט 14 פעמים

10:25 דק׳

10 בנובמבר 2012

10.3791/3327-v

10 בנובמבר 2012

16.1K צפיות

Ruth Greussing¹ , Hermann Unterluggauer¹ , Rafal Koziel¹ , Andrea B. Maier² , Pidder Jansen-Dürr¹

¹Molecular and Cell Biology, Institute for Biomedical Aging Research, ²Department of Gerontology and Geriatrics, Netherlands Consortium for Healthy Aging, Leiden University Medical Center

שיטה כדי לעקוב אחר פעילות היוביקוויטין-הפרוטאזום בתאי חיים מתוארת. Degron-מעורער GFP-(GFP-DGN) וחלבון היתוך יציב GFP-dgnFS נוצר וtransduced לתוך התא באמצעות וקטור ביטוי lentiviral. טכניקה זו מאפשרת ליצור קו יציב GFP-dgn/GFP-dgnFS להביע תא שבו פעילות היוביקוויטין-הפרוטאזום ניתן להעריך בקלות באמצעות epifluorescence או cytometry זרימה.