Name: Live-תא הדמיה של תאים מעבר הבעת חלבונים fluorescently-מתויג מטריקס תלת מימדי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-12-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 26 s
Description: למד לדמות חלבונים מתויגים בפלואורסצנציה בתאים חיים בתוך מטריקס קולגן תלת-ממדי. שיטה זו מאפשרת לחקור דינמיקת חלבונים והתמקמותם בזמן אמת במהלך נדידת תאים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים לד&quot;ר גרנט סאמידה לקריאה ביקורתית של כתב היד. עבודה זו נתמכה על ידי פרס החוקר הצעיר Beckman (ש&quot;י), משפחה חדשה הלמן הפקולטה פרס (ש&quot;י), EUREKA-NIH, מאוניברסיטת קליפורניה לחקר הסרטן ועדת התיאום.

<ol><li>Shih, W., Yamada, S., Myosin, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dependent+retrograde+flow+drives+3D+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+J%22%5BJournal%5D)">A dependent retrograde flow drives 3D cell migration.</a> Biophys. J. 98 (8), L29-L31 (2010).</li>
<li>O'Brien, L. E., Yu, W., Tang, K., Jou, T. S., Zegers, M. M., Mostov, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+biochemical+analysis+of+Rac1+in+three-dimensional+epithelial+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Morphological and biochemical analysis of Rac1 in three-dimensional epithelial cell cultures.</a> Methods Enzymol. 406, 676-691 (2006).</li>
<li>Legant, W. R., Miller, J. S., Blakely, B. L., Cohen, D. M., Genin, G. M., Chen, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+mechanical+tractions+exerted+by+cells+in+three-dimensional+matrices%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Measurement of mechanical tractions exerted by cells in three-dimensional matrices.</a> Nat. Methods. 7 (12), 969-971 (2010).</li>
<li>Del Alamo, J. C., Meili, R., Alonso-Latorre, B., Rodriguez-Rodriguez, J., Aliseda, A., Firtel, R. A., Lasheras, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatio-temporal+analysis+of+eurkaryotic+cell+motility+by+improved+force+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Spatio-temporal analysis of eurkaryotic cell motility by improved force cytometry.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104 (33), 13343-13348 (2007).</li>
<li>Lippincott-Schwartz, J., Snapp, E., Kenworthy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studying+protein+dynamics+in+living+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Studying protein dynamics in living cells.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2 (6), 444-456 (2001).</li>
<li>Phair, R. D., Misteli, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+modeling+approaches+to+in+vivo+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Kinetic modeling approaches to in vivo imaging.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2 (12), 898-907 (2001).</li>
<li>Giepmans, B. N., Adams, S. R., Ellisman, M. H., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+toolbox+for+assessing+protein+location+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Fluorescent toolbox for assessing protein location and function.</a> Science. 312 (5771), 217-224 (2006).</li>
<li>Shaner, N. C., Steinbach, P. A., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+choosing+fluorescent+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">A guide to choosing fluorescent proteins.</a> Nat. Methods. 2, 905-909 (2005).</li>
<li>Cukierman, E., Pankov, R., Stevens, D. R., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taking+cell-matrix+adhesions+to+the+third+dimension%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Taking cell-matrix adhesions to the third dimension.</a> Science. 294 (5547), 1708-1712 (2001).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

כאן אנו מתארים שיטה לשימוש לחיות תאים הדמיה ללמוד את המכניזם של נדידת תאים במטריצה ​​תלת מימדי. ההצלחה של טכניקה זו תלויה בהשגת &quot;טוב&quot; שיבוטים ביציבות להביע GFP-tagged חלבונים. רמה נמוכה של חלבון ה-GFP ידרוש חשיפה עירור עודף פשרות בריאות התא, ואילו רמה גבוהה מדי של GFP יהיו תופעות לוואי לא רצויות על התא. לכן, הבחירה וקטור transfect הגנים לתוך התאים חשוב (למשל, האמרגן, תג הקרינה וכו &#39;). ישנם תגי פלורסנט רבים אחרים מאשר ה-GFP, כולל חלבון פלואורסצנטי אדום (RFP) 7,8....

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> קולגן, שור, סוג I </td><td> BD Biosciences </td><td> 354231 </td><td> מלאי הוא כ 3 מ&quot;ג / מ&quot;ל </td></tr><tr><td> 3-aminopropyltrimethoxysilane </td><td> סיגמא אולדריץ&#39; </td><td> 281778 </td><td> מדולל במים </td></tr><tr><td> glutaraldehyde </td><td> סיגמא אולדריץ&#39; </td><td> 340855 </td><td> מדולל ב PBS </td></tr><tr><td> 1M Hepes </td><td> Invitrogen </td><td> 15630-080 </td><td></td></tr><tr><td> Fluospheres פוליסטירן microspheres 1 מיקרומטר, אדום פלואורסצנטי (580/605) </td><td> Invitrogen </td><td> F13083 </td><td></td></tr><tr><td> Geneticin (G418) </td><td> Invitrogen </td><td> 11811-031 </td><td></td></tr&gt; <tr><td colspan="4"> תרבות התקשורת מרכיבים: </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 31600-034 </td><td></td></tr><tr><td> סרום שור עוברית </td><td> אטלנטה הביולוגיים </td><td> S115500 </td><td></td></tr><tr><td> פניצילין / סטרפטומיצין </td><td> Invitrogen </td><td> 15140-122 </td><td></td></tr><tr><td> Kanamycin </td><td> Invitrogen </td><td> 15160-054 </td><td></td></tr></tbody></table>

live-תא הדמיה של תאים מעבר הבעת חלבונים fluorescently-מתויג מטריקס תלת מימדי

Live-cell Imaging of Migrating Cells Expressing Fluorescently-tagged Proteins in a Three-dimensional Matrix

באופן מסורתי, נדידת תאים נחקרה על דו מימדי, משטחי פלסטיק נוקשה. עם זאת, במהלך תהליכים ביולוגיים חשובים כגון ריפוי פצעים, התחדשות רקמות, גרורות סרטן, התאים חייבים לנווט רקמות מורכבות תלת ממדי, תאית. כדי להבין טוב יותר את המנגנונים מאחורי אלה תהליכים ביולוגיים, חשוב לבחון את תפקידם של החלבונים האחראיים על נהיגה נדידת תאים. כאן, אנו מתאר פרוטוקול ללמוד את המכניזם של נדידת תאים באמצעות שורת תאים אפיתל (MDCK), וכן תלת ממדי, סיבי, עצמית polymerizing מטריקס כמערכת מודל. זה תאי מטריקס ברור אופטית ניתנת בקלות לחיות תאים לימודי הדמיה טוב יותר מחקה את הסביבה הפיזיולוגית, רקמות רכות. דו&quot;ח זה מדגים טכניקה ישירות חזותי לוקליזציה חלבון דינמיקה, ו דפורמציה של מטריקס תלת ממדי שמסביב. בחינהביעור לוקליזציה של חלבונים ודינמיקה במהלך תהליכים תאיים מספק תובנה מפתח לתוך פונקציות חלבון. תגי פלורסנט מקודדים גנטית לספק שיטה ייחודית התבוננות לוקליזציה חלבון ודינמיקה. באמצעות טכניקה זו, אנו יכולים לנתח את הצטברות subcellular של מפתח, כוח להפקת רכיבים cytoskeletal בזמן אמת כמו תמרונים התא באמצעות המטריצה. בנוסף, באמצעות תגי פלורסנט עם מספר אורכי גל שונים, אנו יכולים לבחון את לוקליזציה של חלבונים רבים בו זמנית, ובכך מאפשר לנו לבחון, למשל, אם חלבונים שונים יש תפקידים דומים או מסתעף. יתר על כן, הדינמיקה של החלבונים המתויגים fluorescently ניתן לכמת באמצעות שחזור פלורסנט לאחר photobleaching (FRAP) ניתוח. זה מבחני המדידה ניידות חלבון ואיך קשור ביציבות החלבונים הם לרשת cytoskeletal. על ידי שילוב של תאים חיים הדמיה בטיפול של מעכבי תפקוד החלבון,אנו יכולים לבחון בזמן אמת את השינויים בהתפלגות של חלבונים מורפולוגיה של תאים נודדים. יתר על כן, אנו משלבים גם לחיות תאים הדמיה עם שימוש של חלקיקים נותב פלורסנט מוטבע בתוך המטריצה ​​כדי להמחיש את העיוות מטריקס במהלך נדידת תאים. לפיכך, אנו יכולים לדמיין כיצד תא נודדות מפיצה כוח להפקת חלבונים, שבו כוחות המתיחה הם הפעילו את המטריצה ​​שמסביב. באמצעות טכניקות אלה, אנו יכולים לקבל תובנה חשובה התפקידים של חלבונים ספציפיים תרומתם המנגנונים של נדידת תאים.

תהליכים תאיים כגון נדידת תאים מסורתי נחקרו על דו מימדי, משטחי פלסטיק נוקשה. דו&quot;ח זה מתאר טכניקה ישירות חזותי לוקליזציה חלבון וניתוח הדינמיקה חלבון בתאי נודדות בתוך מטריצה ​​יותר רלוונטי מבחינה פיזיולוגית תלת מימדי,.

Live-תא הדמיה של תאים מעבר הבעת חלבונים fluorescently-מתויג מטריקס תלת מימדי

באופן מסורתי, נדידת תאים נחקרה על משטחי פלסטיק קשיחים דו-ממדיים. עם זאת, במהלך תהליכים ביולוגיים חשובים כגון ריפוי פצעים...

הדגמה זו נועדה לדמות חלבונים המסומנים פלואורסצנטית בתאים חיים בתוך מטריצה תלת-ממדית (3D). ראשית, ייצרו שורות תאים יציבות המבטאות חלבונים מסומנים פלואורסצנטית. זרעו תאים אלו לתוך מטריצת קולגן תלת-ממדית, ולאחר מכן רכשו תמונות Time-lapse של תאים נודדים באמצעות מיקרוסקופ קונפוקאלי.בסופו של דבר, התוצאות שופכות אור על לוקליזציה ודינמיקה של חלבונים בתוך תאים נודדים באמצעות דימותים של lapsed-time וניתוח FP, תוך התבוננות בדינמיקה ובלוקליזציה של חלבונים בתלת-ממד ובזמן אמת. גישה זו מציעה דרך אחת למענה על שאלות יסודיות בנוגע לנדידה של תאים. לדוגמה, כיצד מווסרות מגעים אדחסיביים על ידי חלבונים ציטופלזמיים?וגם כיצד מגעים אלו מושפעים על ידי מעכבים ספציפיים. בצלחת P35, תרבלו תאים בדרגת התרבות (confluency) של 80% עד 90%, והעבירו את הפלסמיד הרלוונטי לתאים באמצעות Lipo 2000 בהתאם להוראות היצרן. לאחר מכן, הניחו את התאים באינקובטור.ביום למחרת, חלק את התאים לשתי צלחוני פטרי P1 50 והדגר אותם למשך לילה. חדש את המצע כדי להוסיף 50 µg/mL של G418. המשך את התרבית תחת ברירה אנטיביוטית למשך שבועיים.בדקו את התרבית לאיתור מושבות עמידות ל-G four 18. לאחר מכן, באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנציה הפוך, זהו וסמנו את המושבות החיוביות ל-GFP.שטפו את התאים פעמיים ב-PBS. לאחר השטיפה השנייה, השאירו שכבה דקה של נוזל כדי למנוע מהתאים להתייבש בכל מושבה מסומנת. נגבו במידת האפשר קרוב ככל האפשר לשוליים באמצעות מקל צמר sterilized, וטפטפו 10 µL של trypsin על המושבה.חזרו על הפעולה במהירות עבור כל מושבה. לאחר מכן, דגרו את הצלחת ב-37 °C כדי להשיג ניתוק של התאים. ודאו את המראה העגול תחת מיקרוסקופ.הוסיפו 10 µL של trypsin לכל מושבה, ובצעו פיפטינג כדי לנתק לחלוטין את התאים מהצלחת. לאחר מכן, העבירו כל מושבת תאים לבאר בודדת בצלחת תרבית של 24 בארות כדי להגדיל מושבות יציבות. לאחר מכן, העריכו את ביטוי החלבון של המושבות באמצעות western blot סטנדרטי ואימונופלואורסצנציה.הרחב את שינוי פני השטח של קווי תאים נבחרים על הזכוכית. מצע תחתון מספק קישור אופטימלי לקולגן. העבר בפיפטה 300 µL של תמיסת סילוניזציה על חלק הזכוכית של כל צלחת P 35 עם פתח של 10 mm.דגרו למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר. שאבו את התמיסה ושטפו במים מסוננים שלוש פעמים, למשך 10 דקות בכל פעם. הסירו את המים והניחו את הצלחות על פלטה מחוממת בטמפרטורה של 50 °C למשך 1.5 שעות.הניחו את מכסי הצלחונות מעט בצורה לא אטומה כדי לאפשר ייבוש. לאחר שהצלחונות היבשים התקררו, טפטפו 300 µL של תמיסת glutaraldehyde בריכוז 2% על החלק הזכוכיתי של כל צלחון. דגרו למשך שעה אחת, ולאחר מכן שטפו עם PBS 3 פעמים למשך 10 דקות בכל פעם.המשיכו בעיקור של הצלחונות באמצעות חשיפה לקרינת UV למשך שעה אחת. ראשית, השקיעו 100 µL של חלקיקי סמן פלואורסצנטיים באמצעות צנטריפוגה. השליכו את הנוזל והשעיקו מחדש את החלקיקים ב-500 µL של מצע גידול.בצע חמישה שטיפות, ולאחר מכן השהה מחדש את החלקיקים ב-30 µL של מצע. לאחר מכן, אסוף את התאים המבטאים GFP באמצעות טריפסין והכן תרחיף של 2 מיליון תאים ל-mL בתוך מבחנה מסוג einor. העבר באמצעות פיפטה 240 µL של מצע גידול. הוסף 12.6 µL של heaps בריכוז 1 M, 20 µL של מים מסוננים, 50 µL של תמיסת תאים ו-10 µL של החלקיקים הפלואורסצנטיים.לבסוף, הוסיפו 167 µL של קולגן מהדרמיס של בקר, וערבבו את התמיסה היטב. כעת, העבירו 80 µL על החלק הזכוכיתי של הצלחית הסילילית שהוכנה. הדגירו בטמפרטורה של 37 °C למשך 50 דקות כדי לאפשר לג'ל לעבור פולימריזציה.לאחר מכן, הוסיפו בזהירות 2 mL של מצע גידול. יישוו את תא המיקרוסקופ לטמפרטורה יציבה של 37 °C והשלימו את מצע התאים. כדי לשמור על pH ניטרלי עבור דימויי DIC, החליפו את מכסה הצלחית במכסה זכוכית עם רצועה דקה של פאראפילם.כסו את דופן הצלחת כדי למנוע התאיידות עבור עדשת שמן (oil immersion). הניחו טיפה אחת של נוזל טבילה במיקום העדשה. הניחו את הצלחת המכילה את ג'ל הקולגן עלבמת המיקרוסקופ כך שהצלחת תיבוא במגע עם נוזל הטבילה.מקדו את הדגימה וחפשו תאים רלוונטיים לצילום כדי למזער את סחיפת השולחן. המתינו כ-45 דקות עד שהצלחת תתייצב. לפני תחילת רצף צילום ארוך, הגדירו את פרמטרי רכישת התמונה עבור ניסויי הוספת מעכבים.הכינו מצע תזונה מועשר בתרופה בריכוז העבודה הרצוי. השלימו את מצע התאים כדי לשמור על pH ניטרלי, אך אל תאטמו עם perfil. העבירו את הדגימה למיקרוסקופ והמשיכו בדימות במועד הטיפול בתרופה.השהה את התמונה, תפס והסר בזהירות את מכסה הצלחת מבלי להסיט את הצלחת עצמה. שאב את המצע והעבר בעזרת פיפט את המצע המכיל את התרופה אל תוך הצלחת. לאחר מכן, החזר בזהירות את המכסה למקומו.ההגדרות למערך FRAP עשויות להשתנות בין מערכות שונות, לכן יש להיוועץ בהוראות היצרן. ראשית, הגדירו את הפרמטרים עבור דימוי תאים חיים.עבור הבהרה פוטוכימית (photobleaching). יש לבחון פרמטרים אלו על תאי תרגול כדי להשיג עוצמת לייזר מספקת להבהרת האות הפלואורסצנטיי ללא פגיעה בתא. לאחר מכן, התחל בלכידת תמונות של הדגימה ורכוש לפחות חמישה פריימים.לאחר מכן, בצעו פוטובליצ'ינג (photobleach) לאזור העניין. המשיכו בלכידת תמונות לאורך זמן ההתאוששות. מדדו את עוצמת הפלואורסצנציה הממוצעת של האזור שעבר פוטובליצ'ינג לפני ואחרי הפעולה לאורך זמן, באמצעות תוכנה לניתוח סטטיסטי.התאימו את עקומת ההתאוששות למשוואה האקספוננציאלית. השגיאו את הפרמטרים עבור זמן מחצית החיים והעוצמה הסופית מעקומת ההתאמה האקספוננציאלית. לאחר מכן, חשבו את הפракציה הניידת על ידי חישוב היחס בין עוצמות הפלואורסצנציה הסופית וההתחלתית.תמונות תלת-ממדיות אלו של תאים חיים מציגות תאי אפיתל בריאים המבטאים actin-GFP. לאחר ארבעה ימי תרבית, תאים אלו יצרו ציסטה במטריצת קולגן תלת-ממדית. חלק מהתאים נדדו לאורך פני השטח של הציסטה בעוד שאחרים נדדו בתוך פנימיה של הציסטה.עיוות המטריקס כתוצאה מכוחות המתיחה המופעלים על ידי תאים נודדים, ננתח באמצעות תזוזת חלקיקי סמן המוטמעים במטריקס הסובב. השפעת עיכוב של RO kinase על כוח המתיחה מוצגת כאן. תנועות חלקיקי הסמן מוצגות כתמונת היטל מקסימלי (maximum projection) של נקודות זמן שונות, כאשר כל נקודת זמן צבועה בצבע פסאודו.לחלופין, התמונות של חלקיק סימון בודד מוצגות כמסך תמונות (montage) כדי להראות את תנועת חלקיק הסימון. עם הזמן, חלקיק סימון זה נע לעבר השפה האחורית של התא הנודד ומרחקה, לפני ואחרי הוספת Y 2 7 6 3 2 בהתאמה. ניתוח ה-frap עוקב אחר תאים המבטאים GFP actin בעודם נודדים במטריצה תלת-ממדית, המעידה על התאוששות פלואורסצנציה טיפוסית. לאחר ניסוי של הלבנה פוטו-כימית (photo bleaching) בהגדרות לייזר מותאמות, עוצמת הפלואורסצנציה של אזור העניין (ROI) פחתה באופן נראה לעין בהשוואה לרמת הרקע, תוך שמירה על תאים בריאים שאינם פגומים.גרף זה מציג את התאמה של עקומת ההתאוששות לפונקציה מעריכית. לאחר רכישת מיומנות, זריעת התאים במטריצה עשויה להימשך שעה. אין לשכוח כי עבודה עם amino propyl trimethyl עלולה להיות מסוכנת ביותר.לכן, נקטו באמצעי זהירות כגון עבודה במכסה מ photochemical (מapay). כמו כן, זכרו לשמור על תנאי סטריליות בעת עבודה עם תאים במטריקס תלת-ממדי (3D matrix).

live-cell-imaging-migrating-cells-expressing-fluorescently-tagged

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

מודלים של פלישת תאים סרטניים לתוך מטריצה ​​תלת ממדי תאיים לשקף טוב יותר...

מידול והדמיה 3-Dimensional Cell קיבוציים Invasion

שיטה להרכבה של שיפועים ודבק מסיסים בתא מיקרוסקופי למחקרי נדידת תאי חיים מתוארת. הסביבה המהונדסת משלבת משטחי antifouling ופסי דבק עם שיפועי פתרון ולכן מאפשרת אחת כדי לקבוע את החשיבות היחסית של רמזי הדרכה.

יצירת Gradients הדבק והמסיס לנדידת תאי דימות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי

מאמר זה מציג שיטה לתייג קולגן שניתן להשתמש בו גם תיקון נוסף ולהדמית חיה של תרביות תאי 3D fluorescently. כמו כן אנו מספקים פרוטוקול מותאם לדמיין חלבוני cytoskeletal אנדוגניים של תאים בתרבית בסביבות 3D.

חושף את ארגון cytoskeletal של תאי סרטן פולשני ב-3D

5 חלבוני ניאון קומבינטורית סימון של תאי גזע ואבות היווצרות הדם מאפשר במעקב משובט vivo באמצעות confocal ושני פוטונים במיקרוסקופ, מתן תובנות ארכיטקטורת hematopoietic מח העצם במהלך רגנרציה. שיטה זו מאפשרת מיפוי גורל לא פולשנית של תאים נגזרים HSPCs ספקטרלי מקודדים ברקמות שלמות לתקופות נרחבות של זמן לאחר השתלה.

במשובט מעקב vivo של גזע hematopoietic ובתאים המסומנים על ידי חמישה חלבונים ניאון באמצעות Confocal וmultiphoton מיקרוסקופית

נדידת תאים היא תופעה ביולוגית כי הוא מעורב בשפע של פיסיולוגי, כגון ריפוי פצעים ותגובה חיסונית, ותהליכי pathophysiological, כמו סרטן. Assay הגירת מטריצת 3D-קולגן הוא כלי תכליתי כדי לנתח את מאפייני נדידת תאים מסוגים שונים של מסגרת בסביבה דמוית פיזיולוגית 3D.

ניתוח של נדידת תאים בתוך קולגן מטריקס תלת ממדי

הנכסים ומייקרו של המטריצה ​​תאית מכאניים מאוד משפיעים על הגירת 3D של תאים. שיטה במבחנה ללמוד spatiotemporal התנהגות נדידת תאים בסביבות biophysically משתנים, בשתי רמות אוכלוסייה ותא בודדות, מתואר.

מערכת ג&#39;ל קונצנטריים כדי ללמוד את תפקיד Biophysical של מטריקס מייקרו-סביבה על נדידת תאי 3D

בשילוב של השתלת תאים, תיוג שלד ציטו וגישות אובדן/רווח תפקוד, פרוטוקול זה מתאר כיצד ניתן להשתמש בצלחת הקדם-כורדלית הפוטנציאלית של דג הזברה הנודד כדי לנתח את תפקודו של גן מועמד בנדידת תאים in vivo.

ניתוח<em&gt; In vivo</em&gt; נדידת תאים באמצעות השתלות תא והדמיה זמן לשגות עוברי דג הזברה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להמחיש תאים חיסוניים בתוך מטריצה תלת מימדי (3D) קולגן באמצעות מיקרוסקופ אור גיליונות. פרוטוקול זה מרחיב כיצד לעקוב אחר נדידת תאים ב- 3D. פרוטוקול זה יכול להיות מועסק עבור סוגים אחרים של תאים השעיה מטריקס תלת-ממד.

מיקרוסקופ אור גיליונות עבור ויזואליזציה תלת מימדי של תאים חיסוניים אנושי

בפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה משולבת חוקרים נדידת תאים סרטן ופלישה על פלטפורמה אחת בזמן אמת, מתן אפשרות היעילה הדירים בקלות ללמוד ניידות תא ו מורפולוגיה.

זרימת עבודה פשוטה הגירה/הפלישה באמצעות Imager אוטומטיות של תאים חיים

מחקר זה מציג פרוטוקול של אימונוציטוכימיה של תאים תלת-ממדיים חיים המיושמים על קו תאי גליומה מפוזר בקו האמצע בילדים, שימושי כדי לחקור בזמן אמת את ביטוי החלבונים על קרום הפלזמה במהלך תהליכים דינמיים כמו פלישה ונדידה של תאים תלת-ממדיים.

בדיקות אימונוציטוכימיה של תאים תלת-ממדיים חיים של גליומה מפושטת בקו האמצע בילדים

למד לדמות חלבונים מתויגים בפלואורסצנציה בתאים חיים בתוך מטריקס קולגן תלת-ממדי. שיטה זו מאפשרת לחקור דינמיקת חלבונים והתמקמותם בזמן אמת במהלך נדידת תאים.

Live-תא הדמיה של תאים מעבר הבעת חלבונים fluorescently-מתויג מטריקס תלת מימדי

גלה סרטונים נוספים