Name: Chromosomics: איתור של שינוי המספרי מבני 24 כרומוזומים כל אדם בו זמנית באמצעות Assay רומן דגים OctoChrome (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 25 s
Description: למד את שיטת OctoChrome FISH לזיהוי שינויים מספריים ומבניים בכל 24 הכרומוזומים האנושיים בבת אחת. שיטה זו משפרת את האבחון של לוקמיה ולימפומה בחולים קליניים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות לד&quot;ר Cliona מ מקהייל עבור אנושות קריאה ועריכה של כתב היד. עבודה זו מומנה על ידי המכון הלאומי למדעי בריאות הסביבה, המכון הלאומי לבריאות מענק R01ES017452 ל L &#39;אנג.

1. שקופיות מדגם הכנה <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגים OctoChrome נועד לבחון שינויים כרומוזומלית מתפשט metaphase של תאים אנושיים, כולל אך לא רק תאים בתרבית דם היקפיים, גזע / אבי תאים, שורות תאים. דוגמאות יש להכין בעקבות הליך סטנדרטי עבור קצירת metaphases 3,11-13: על ידי העסקת טיפול colcemid לעצור תאים metaphase, טיפול hypotonic להתנפח תאים, Carnoy של מקבע לתקן תאים ההשעיה על כ 0.5-1 x 10 6 תאים לכל מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקו את השקופית 8 מרובע (בתנאי בערכה OctoChrome, קטלוג #: PMP 803, Cytocell בע&quot;מ, קיימברידג&#39;, בריטניה, איור 2) על ידי טובל אתנול טהור דקות 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני ביצוע שקופיות מדגם, ולשחרר כמות קטנה של תאים לשקופית כדי לבדוק את צפיפות התאים. אם צפיפות התאים גבוהה מדי (התאים חופפים יותר מדי), לדלל את ההשעיה עם מקבע טרי. אם צפיפות התאים נמוך מדי (תא מעטים מדיזה בשקופית), לסובב את התאים מחדש להשעות בהיקף קטן יותר של מיצב טרי. פיפטה μl 5-10 של השעיה על כל תא של 8 אזורים של שקופיות תבנית ברצף של ריבועים לסירוגין 1/7 - 2/8 - 3 / 5-4 / 6. ברגע הראשון שני ריבועים יש אוויר יבש, לזהות את הריבועים הנותרים באותה צורה. זה ימנע את המרווחים סלולריים מלהתערב אחד עם השני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שקופית יבשים ניתן לאחסן ב -20 ° C באווירה של חנקן גדול יותר מ -5 שנים לפני ההכלאה. </li></ul> 2. לוקליזציה של metaphases באמצעות מערכת אוטומטית <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל 20 μl של 4 &#39;,6-diamidino-2-phenylindole (0.2 מיקרוגרם / מ&quot;ל) למרכז של כל מחצית של השקופית ולאחר מכן מכסים coverslip. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע סריקה אוטומטית של שקופיות מדגם למקם את התאים באמצעות metaphase Metafer תוכנה (MetaSystems, Altlussheim, גרמניה). זה מאפשר מיקום של כל metaphases ועתיד הערכה מחדש של כל התמונות סלולריים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להציג את תוצאות הסריקה באופן ידני ולמחוק ללא metaphase חפצים. </li></ul> 3. הכלאה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת שקופיות מדגם מכשיר OctoChrome </li><ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טובלים את השקופית מדגם במאגר SSC 2x בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות כדי לשטוף DAPI. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייבשים את השקופית מדגם באמצעות סדרה של שוטף אתנול (2 דקות כל אחד ב 70%, 85% ו 100% אתנול), לאפשר לו להתייבש ומניחים על 37 מעלות צלזיוס פלטה חשמלית במשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את Multiprobe Chromoprobe הכלאה הקאמרית (בתנאי בערכה OctoChrome) על אמבט מים 37 ° C כדי לאזן ולאפשר ל 37 ° C (+ / - 1 ° C). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים את הפתרון ההכלאה (בתנאי בערכה OctoChrome) על ידי pipetting חזר מראש חם aliquot 25 μl לכל מכשיר OctoChrome ל 37 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טרום חם כל התקן OctoChrome (בתנאי בערכה OctoChrome, ראה איור 2) על 37 מעלות צלזיוס על ידי הנחת הצד תווית המכשיר על פלטה חשמלית. לא לגעת לאהוא משטחים בולטות של המכשיר OctoChrome כפי שהם מכילים את הבדיקות. </li></ul><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המיקום של השקופית על מכשיר מדגם OctoChrome (איור 2) </li><ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 2 μl של פתרון מחומם מראש ההכלאה לכל אחד משמונה אזורים על מכשיר מחומם מראש OctoChrome בזמן שהוא נשאר ב 37 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להפוך בזהירות את השקף בתבנית על המכשיר OctoChrome כך מספר 1, הנמצא כעת הפוך, ממוקם על שטח היד הימנית העליונה של המכשיר OctoChrome. כדי לסייע באיתור ריבוע 1, את מיקומו על גבי המכשיר סומן בכתום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא כי את השקופית תבנית מיושר היטב עם האזורים תואמים במכשיר OctoChrome. להוריד בזהירות את השקף על המכשיר OctoChrome כך טיפות של תמיסת הכלאה ליצור קשר עם שקופיות. החל עדין, אפילו ללחוץ על מנת להבטיח כי הפתרון ההכלאה היא להפיץ את הקצוות של כל אחד מהאזורים שהועלו על המכשיר OctoChrome. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להריםאת השקופית / OctoChrome, מחזיק בזהירות את קצה קפוא של שקופיות זכוכית, להפוך כך השקופית הוא מתחת למכשיר OctoChrome. יש לוודא שהמכשיר לא למרוח על פני השקופית תבנית כמו זו עלול לגרום בין זיהום של הבדיקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים על 37 ° C (+ / - 1 ° C) פלטה חשמלית במשך 10 דקות. </li></ul><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Denaturation </li><ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעביר את המכשיר שקופיות / OctoChrome מדגם פלטה חשמלית בטיפול בפרט להחזיק אותו ברמה. ודא שקופיות מדגם בצורה שווה הקשר פלטה חשמלית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפגל על ​​פלטה חשמלית ב 75 ° C (+ / - 1 ° C) במשך 5 דקות. </li></ul><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכלאה </li><ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במקום מדגם שקופיות / מכשיר OctoChrome ב הקאמרית Multiprobe Chromoprobe הכלאה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלף את המכסה לצוף קאמרית 37 ° C (+ / - 1 ° C) אמבט מים (אי - ערבוב) בין לילה. שימו לב: לא לסגור את מכסה תא ההכלאה, אל לאטום את המכסה על אמבט מים, אל להכליא בחממה. צעדים אלה הם קריטיים שליטה לחות. </li></ul><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הכלאה שוטף </li><ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת פתרונות לשטוף פתרון 1: הכן את הצנצנת Coplin / Hellendahl המכיל 0.4x SSC. לאזן עד 72 ° C (+ / - 1 ° C) באמבט מים להתאים את pH עד 7.0. פתרון 2: הכן את הצנצנת Coplin / Hellendahl המכיל 2x SSC ו 0.05% Tween 20. אפשר לעמוד בטמפרטורת החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את ההתקן OctoChrome בזהירות משקופית ומניחים שקופית פתרון 1 ל -2 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את השקופית לתוך פתרון 2 במשך 30 שניות. </li></ul></ol> 4. הרכבה ויזואליזציה של תוצאות <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל 20 μl של DAPI למרכז כל מחצית של השקופית וליישם coverslip. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה בחושך במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר לפני הצפייה על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי. </li></ul> 5. נציג תוצאות FiguRe 3A מראה תא metaphase רגיל בכיכר 2. (1) - (3): כרומוזומים 8, 21 ו -12 היו צבועים אדום, ירוק וכחול, הם דמיינו את האדום טקסס, FITC, ו DEAC מסנן, בהתאמה; (4): ויזואליזציה דרך DAPI / FITC / טקסס אדום טריפל מסנן. באופן כללי, הכרומוזומים צבועים בכחול אינם ברורים דרך פילטר משולשת צריך לראות תחת מסנן DEAC ספציפי. איור 3 ב מציג תאים חריגים עם נציג טרנסלוקציה לוקמיה ספציפי aneuploidy כרומוזומלית ו. (1): t (8; 21), טרנסלוקציה כרומוזומלית שכיח לוקמיה מיאלואידית חריפה, (2): טריזומיה 21, שלושה עותקים של כרומוזום 21, aneuploidy נפוץ לוקמיה. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/3619/3619fig1.jpg" /> באיור 1. הסדר של צירופי הכרומוזומים במכשיר OctoChrome וציפו לתוצאות ציור כרומוזומליות. <img alt="איור 2" src= &quot;/ Files/ftp_upload/3619/3619fig2.jpg&quot; /&gt; איור 2. מיקום של שקופית על מכשיר מדגם OctoChrome. איור 3. תוצאות נציגלהשיג דגים OctoChrome (ריבוע 2). <img alt="איור 3 א" src="/files/ftp_upload/3619/3619fig3A.jpg" /> איור 3 א. תא נורמלי עם 8 כרומוזומים, 12, 21 צבועים בכיכר 2. <img alt="איור 3 ב" src="/files/ftp_upload/3619/3619fig3B.jpg" /> איור 3 ב. תאים חריגים עם נציג טרנסלוקציה לוקמיה ספציפי aneuploidy כרומוזומלית ו בכיכר 2.

<ol><li>Levsky, J. M., Singer, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+in+situ+hybridization%3A+past%2C+present+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Sci%22%5BJournal%5D)">Fluorescence in situ hybridization: past, present and future.</a> J. Cell. Sci. 116, 2833-2838 (2003).</li>
<li>Zhang, L., Eastmond, D. A., Smith, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nature+of+chromosomal+aberrations+detected+in+humans+exposed+to+benzene%5BTitle%5D)+AND+%22Crit.+Rev.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">The nature of chromosomal aberrations detected in humans exposed to benzene.</a> Crit. Rev. Toxicol. 32, 1-42 (2002).</li>
<li>Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aberrations+in+chromosomes+associated+with+lymphoma+and+therapy-related+leukemia+in+benzene-exposed+workers%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Mol.+Mutagen%22%5BJournal%5D)">Aberrations in chromosomes associated with lymphoma and therapy-related leukemia in benzene-exposed workers.</a> Environ. Mol. Mutagen. 48, 467-474 (2007).</li>
<li>Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Benzene+increases+aneuploidy+in+the+lymphocytes+of+exposed+workers%3A+a+comparison+of+data+obtained+by+fluorescence+in+situ+hybridization+in+interphase+and+metaphase%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Mol.+Mutagen%22%5BJournal%5D)">Benzene increases aneuploidy in the lymphocytes of exposed workers: a comparison of data obtained by fluorescence in situ hybridization in interphase and metaphase.</a> Environ. Mol. Mutagen. 34, 260-268 (1999).</li>
<li>Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+aneusomy+and+long+arm+deletion+of+chromosomes+5+and+7+in+the+lymphocytes+of+Chinese+workers+exposed+to+benzene%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">Increased aneusomy and long arm deletion of chromosomes 5 and 7 in the lymphocytes of Chinese workers exposed to benzene.</a> Carcinogenesis. 19, 1955-1961 (1998).</li>
<li>Smith, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+translocations+and+aneusomy+in+chromosomes+8+and+21+among+workers+exposed+to+benzene%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer.+Res%22%5BJournal%5D)">Increased translocations and aneusomy in chromosomes 8 and 21 among workers exposed to benzene.</a> Cancer. Res. 58, 2176-2181 (1998).</li>
<li>Bayani, J., Squire, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+the+detection+of+chromosomal+aberrations+using+spectral+karyotyping%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Genet%22%5BJournal%5D)">Advances in the detection of chromosomal aberrations using spectral karyotyping.</a> Clin. Genet. 59, 65-73 (2001).</li>
<li>Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromosome-wide+aneuploidy+study+%28CWAS%29+in+workers+exposed+to+an+established+leukemogen%2C+benzene%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">Chromosome-wide aneuploidy study (CWAS) in workers exposed to an established leukemogen, benzene.</a> Carcinogenesis. 32, 605-612 (2011).</li>
<li>Rowley, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+chromosome+translocations+in+leukemogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Hematol%22%5BJournal%5D)">The role of chromosome translocations in leukemogenesis.</a> Semin. Hematol. 36, 59-72 (1999).</li>
<li>Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+OctoChrome+fluorescence+in+situ+hybridization+to+detect+specific+aneuploidy+among+all+24+chromosomes+in+benzene-exposed+workers%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Biol.+Interact%22%5BJournal%5D)">Use of OctoChrome fluorescence in situ hybridization to detect specific aneuploidy among all 24 chromosomes in benzene-exposed workers.</a> Chem. Biol. Interact. , 153-154 (2005).</li>
<li>Barch, M. J., Lawce, H. J., Arsham, M. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBarch%2C+MJ+%22In+The+ACT+cytogenetics+laboratory%22">In The ACT cytogenetics laboratory</a>. Barch, M. J. , Raven Press. 17-30 (1991).</li>
<li>Zhang, L., Yang, W., Hubbard, A. E., Smith, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonrandom+aneuploidy+of+chromosomes+1%2C+5%2C+6%2C+7%2C+8%2C+9%2C+11%2C+12%2C+and+21+induced+by+the+benzene+metabolites+hydroquinone+and+benzenetriol%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Mol.+Mutagen%22%5BJournal%5D)">Nonrandom aneuploidy of chromosomes 1, 5, 6, 7, 8, 9, 11, 12, and 21 induced by the benzene metabolites hydroquinone and benzenetriol.</a> Environ. Mol. Mutagen. 45, 388-396 (2005).</li>
<li>Smith, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydroquinone%2C+a+benzene+metabolite%2C+increases+the+level+of+aneusomy+of+chromosomes+7+and+8+in+human+CD34-positive+blood+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">Hydroquinone, a benzene metabolite, increases the level of aneusomy of chromosomes 7 and 8 in human CD34-positive blood progenitor cells.</a> Carcinogenesis. 21, 1485-1490 (2000).</li>
<li>Smith, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+understanding+benzene+health+effects+and+susceptibility%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Public.+Health%22%5BJournal%5D)">Advances in understanding benzene health effects and susceptibility.</a> Annu. Rev. Public. Health. 31, 133-148 (2010).</li>
</ol>

אין לנו מה למסור.

זה assay הרומן דגים OctoChrome, מאפשר בו זמנית לבדוק את כל 24 הכרומוזומים האדם הכלאה אחת בשקופית 1. ההסדר של שילובים כרומוזום על 8 ריבועים תוכנן כדי להקל על זיהוי לא אקראיים rearrangements כרומוזום את לוקמיה לימפומה ו הנפוצים ביותר. לכן, assay יכול לזהות מספרי (aneuploidy), כמו גם מבנה (טרנסלוקציות) שינויים כרומוזום במקביל. השלב הקריטי ביותר assay זה שליטה על הלחות במהלך ההכלאה בין לילה בחדר צף באמבט מים. בדיקות ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> הערות (לא חובה) </td><tr><tr><td> OctoChrome Kit </td><td> Cytocell בע&quot;מ, קיימברידג&#39;, בריטניה </td><td> PMP 803 </td><td></td></tr><tr><td> phytohaemagglutinin (PHA) </td><td> Invitrogen תאגיד </td><td> 10576-015 </td><td></td></tr><tr><td> Colcemid </td><td> Invitrogen תאגיד </td><td> 15212-012 </td><td></td></tr><tr><td> Carnoy של מקבע </td><td></td><td></td><td> מתנול: חומצה אצטית קרחונית = 3: 1 </td></tr><tr><td> הקרינה מיילcroscope </td><td></td><td></td><td> מצויד מסננים כדי להציג DAPI, טקסס רד, FITC, ואת ספקטרום קומארין בנפרד DAPI / FITC / טקסס האדום טריפל מסנן כדי להציג צבעים שונים בו זמנית </td></tr><tr><td> Metafer תוכנה </td><td> MetaSystems, Altlussheim, גרמניה </td><td></td><td> לאפשר לאתר את כל metaphases כדי להעריך מחדש את הפרעות </td></tr></tbody></table>

chromosomics: איתור של שינוי המספרי מבני 24 כרומוזומים כל אדם בו זמנית באמצעות assay רומן דגים octochrome

Chromosomics: Detection of Numerical and Structural Alterations in All 24 Human Chromosomes Simultaneously Using a Novel OctoChrome FISH Assay

הקרינה ב ההכלאה באתרם (דגים) היא טכניקה המאפשרת רצפי DNA ספציפיים כדי להתגלות על הכרומוזומים metaphase או שלבי הביניים בגרעין התא 1. הטכניקה משתמשת בדיקות DNA עם רצפים ייחודיים כדי להכליא כרומוזומים שלמים או אזורי כרומוזומים מסוימים, ומשמש כתוספת חזקה cytogenetics קלאסיים. למשל, מחקרים קודמים רבים דיווחו על גילוי תכופה של סטיות כרומוזום מוגברת בחולים לוקמיה הקשורים עם חשיפה בנזן, בנזין, הרעלת חולים, עובדים בריאים שנחשפו בנזן, באמצעות ניתוח קלאסי cytogenetic 2. באמצעות דגים, לוקמיה ספציפיים שינויים כרומוזומליים נצפו להיות גבוהות עובדים בריאים לכאורה שנחשפו בנזן 3-6, המציין את התפקידים הקריטיים של שינויים cytogentic ב leukemogenesis בנזן המושרה. באופן כללי, assay דג בוחן אחד בלבד או כמה כרומוזומים שלמיםאו לוקוסים ספציפיות לכל שקופית, כך הכלאות מרובות צריך להתנהל על שקופיות מרובות כדי לכסות את כל הכרומוזומים האנושיים. Karyotyping ספקטרלי (SKY) המאפשר הדמיה של הגנום כולו בו זמנית, אבל את הדרישה תוכנה מיוחדת לתחום ציוד היישום שלה 7. כאן אנו מתארים assay דגים רומן, OctoChrome-FISH, אשר יכול להיות מיושם על Chromosomics, שאנו מגדירים כאן ניתוח סימולטני של כל 24 הכרומוזומים האנושיים בשקופית אחת מחקרים בבני אדם, כגון מחקר כרומוזום רחב aneuploidy (CWAS) 8. הבסיס של השיטה, המשווקים על ידי Cytocell כמערכת Multiprobe Chromoprobe, הוא מכשיר OctoChrome אשר מחולק 8 ריבועים, שכל אחת מהן נושאת שלוש שונים שלמים ציור בדיקות כרומוזומים (איור 1). כל אחת משלוש הבדיקות מסומן ישירות עם fluorophore בצבע אחר, ירוק (FITC), אדום (Red טקסס), וכחול (קומארין). סידור הכרומוזומים על שילובים OctoChromמכשיר ה תוכנן כדי להקל על זיהוי שאינו כרומוזום אקראיים שינויים מבניים (טרנסלוקציות) שנמצאו לוקמיה לימפומה ו הנפוצים ביותר, עבור T למשל (9, 22), t (15; 17), t (8; 21 ), t (14, 18) 9. יתר על כן, שינויים מספריים (aneuploidy) בכרומוזומים ניתן לאתר בו זמנית. השקופית תבנית המקביל מחולק גם ל -8 ריבועים על המשתרע metaphase המאוגדים (איור 2), והוא ממוקם מעל המכשיר OctoChrome. בדיקות ו-DNA היעד הם מפוגל על ​​בטמפרטורה גבוהה ו הכלאה בתא לח ולאחר מכן כל 24 הכרומוזומים האנושיים ניתן דמיינו בו זמנית. דגים OctoChrome היא טכניקה מבטיחה אבחנה קלינית של לוקמיה ולימפומה וכן זיהוי של aneuploidies בכרומוזומים כל. יש לנו ליישם את הגישה הזאת Chromosomic חדש במחקר CWAS של בנזן שנחשפו פועלים סינים 8,10.

הקרינה רומן<em&gt; באתרו</em&gt; ההכלאה (דגים) שיטה כי במקביל בוחנת שינויים כרומוזום הן מספריים ומבניים, בעיקר טרנסלוקציות כרומוזומליות ספציפיות הקשורות לוקמיה ולימפומה, של כל 24 הכרומוזומים האנושיים במכשיר אחד הכלאה 1, מתואר.

Chromosomics: איתור של שינוי המספרי מבני 24 כרומוזומים כל אדם בו זמנית באמצעות Assay רומן דגים OctoChrome

הibridiization in situ פלואורסצנטי (FISH) היא טכניקה המאפשרת זיהוי של רצפי DNA ספציפיים על כרומוזומי מטאפאזה או אינטרפאזה בתא...

בדיקת ה-Octa Chrome Fish בוחנת בו-זמנית את כל 24 הכרומוזומות האנושיות בהיברידיזציה אחת על שקופית בודדת. ראשית, הכינו פריסות מטאפאזה על השקופית המרובעת הייעודית בעלת השמונה שקופיות. לאחר מכן, בצעו סריקה אוטומטית של שקופית הדגימה כדי להקל על איתור כל המטאפאזות ועל הערכה חוזרת עתידית של כל תמונות התאים.בשלב הבא, הניחו את השקופית בעלת שמונה הריבועים מעל מכשיר ה-Octa chrome ובצעו היברידיזציה של הגששים. התוצאות המתקבלות עשויות להראות שלושה כרומוזומים שלמים צבועים באופן שונה בכל ריבוע, בהתאם לסידור שילובי הכרומוזומים במכשיר ה-RO. הרעיון לשיטת ה-RO FISH עלה לראשונה כאשר התחלתי ליישם FISH במחקרי אוכלוסיות אנושיות בתחילת שנות ה-90.לאחר מכן הצגתי את הרעיון שלי לצביעה בשלושה צבעים, שמונה שקופיות ריבועיות להצבת התאים, בוועידה השנתית של A A CR בשנת 1994. היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון כיפוף כרומוזומים קלאסי ופרוטוטייפינג ספקטרלי מודרני, הוא היכולת לנתח בקלות את כל 24 הכרומוזומים האנושיים במספר רב יותר של תאים. התחילו בהכנה של תאי מטאפאזה המקובעים בסuspended, כבקרת טיפת פיפט של תאים על שקופית, ואששו שהצפיפות הולמת.כעת טבלו שמונה ריבועי OC כרום, והחליקו אותם לתוך אתנול טהור למשך שתי דקות. ברצף של ריבועים לסירוגין, פזרו 5 µL של תרחיף תאים על שקף התבנית כדי למנוע מהפריסות התאיות להפריע זו לזו. ייבשו את הדגימות באוויר לפני הנחת זוגות סמוכים.החילו 20 µL של צבע DAPI בריכוז של 0.2 µg/mL למרכז כל חצי של השקופית, והניחו זכוכית כיסוי. כעת, בצעו סריקה אוטומטית של שקופית הדגימה כדי לאתר את תאי המטאפאזה. השתמשו בתוכנת metaverse כדי להקל על איתור כל המטאפאזות ועל הערכה חוזרת עתידית של כל תמונות התאים.בחנו את תוצאות הסריקה באופן ידני ומחקו ארטיפקטים שאינם במצב מטאפאזה. ראשית, הסירו את הצביעת DPI בבופר XSSC כפול, ולאחר מכןבצעו דהידרטציה לדגימות באמצעות סדרת שטיפות אתנול. ייבשו את השקף באוויר והניחו אותו על פלטת חימום בטמפרטורה של 37 °C למשך חמש דקות.כעת יש להביא את חיישן ה-chroma, את תא ההכלאה הרב-חיישני ואת תמיפת ההכלאה לשיווי משקל באמבט מים בטמפרטורה של 37 °C, כאשר הצד המסומן פונה כלפי מטה. הניחו את מכשיר ה-OC chrome על פלטה מחממת בטמפרטורה של 37 °C. הוסיפו 2 µL של תמיסת הכלאה שחוממה מראש לכל אחד משמונה האזורים.הפוך והכוון את התבנית בזהירות. החלק אותה מעל מכשיר ה-OC chrome. ודא שהשקופית של התבנית מיושרת למכשיר ה-Octa Chrome.לאחר מכן, הנח בעדינות את העגלה על טיפות תמיסת ההיברידיזציה והפעיל לחץ קל ואחיד כדי לפרוס את תמיסת ההיברידיזציה עד לקצוות של כל אחד מהאזורים המוגבהים במכשיר ה-OC chrome. הרם את הקצה המטוש של העגלה והפוך אותה כך שהעגלה תהיה מתחת למכשיר ה-OC chrome. הנח על פלטה חימום בטמפרטורה של 37 °C למשך 10 דקות.לאחר מכן, העבירו את הדגימה לפלטה מחוממת בטמפרטורה של 75 °C למשך חמש דקות. כדי לדנטור ל-דגימות עבור שלב ההיברידיזציה, העבירו אותן לתא היברידיזציה של chroma probe, multi probe. החזירו את המכסה והניחו את התא לצוף במסבך מים בטמפרטורה של 37 °C למשך הלילה.הוצאו את השקופית בזהירות מהמכשיר ושטפו ב-0.4 excess SC בטמפרטורה של 72 °C למשך שתי דקות. בצעו את השטיפה השנייה בטמפרטורת החדר למשך 30 שניות. המשיכו להוסיף 20 µL של DPI למרכז כל חצי של השקופית והניחו זכוכית כיסוי.יש להדגיר את הדגימות בחושך למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר לפני הבחינה במיקרוסקופ פלואורסצנציה. בדיקת Octa chrome fish מאפשרת בחינה בו-זמנית של כל 24 הכרומוזומים האנושיים באמצעות היברידיזציה אחת על שקופית אחת. כל ריבוע כולל שלושה גששים שונים לצביעת כרומוזומים שלמים, המסומנים ישירות בפלואורופורים בצבעים שונים.בדיקה של תא מטאפאזה נורמלי בריבוע שתיים של מערכת ה-Octa CHRO מראה כי כרומוזומים 8, 21 ו-12 צבועים באדום, ירוק וכחול. ניתן להדמות אותם באופן 개별י באמצעות המסננים המתאימים, או להדמותם בו-זמנית באמצעות מסנן משולב של DAPI, Fitzy ו-Texas Red. גישה זו לכרומוזומים שימושית לזיהוי תאים חריגים עם טרנסלוקציות כרומוזומליות ואנויפלואידיה הספציפיים לליקומיה.לדוגמה, T 8 21 היא טרנסלוקציה כרומוזומלית נפוצה בלוקמיה מיאלואידית חריפה. טריסומיה 21, הכוללת 3 עותקים של כרומוזום 21, היא אנאפלואידיה נפוצה בלוקמיה לאחר הפיתוח. טכניקה זו סללה את הדרך עבור מדענים בתחומי הציטוגנטיקה המולקולרית והאפידמיולוגיה המולקולרית לחקור את הסידורים הכרומוזומליים הנפוצים ביותר המגולים בלוקמיה ובלימפומה, ולבחון פלואידיות סלקטיבית בקרב כל הכרומוזומים האנושיים בחולים קליניים או באוכלוסיות שנחשפו לחומרים רעילים.לאחר צפייה בסרטון זה, תשיגו הבנה טובה של אופן הבדיקה הסימולטנית של כל 24 הכרומוזומות האנושיות בהיברידיזציה אחת על שקופית אחת באמצעות בדיקת Octo Chrome Fish. ואנו מגדירים זאת ככרומוזומות.

chromosomics-detection-numerical-structural-alterations-all-24-human

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

מאמר זה מתאר את הבחירה של בדיקות מתאים FISH מתא בודד, טכניקות הפצת עבור גרעינים blastomere, וב הכלאה באתרו ניקוד האות, להחיל אבחון גנטי טרום השרשה (PGD) בסביבה קלינית.

FISH לאבחון גנטי טרום השרשה

Karyotyping ספקטרלי (שמים) היא טכניקה מתקדמת cytogenetics לזהות סטיות כרומוזומליות גנומית. שיטה זו מנצלת את בדיקות ציור כרומוזום, המאפשרים סיווג של כרומוזומים כל. SKY יכול גם לזהות סטיות כרומוזום מורכבים ופגמים הפרדה בעכברים ובבני אדם עם מחלות שונות, לרבות מחלת כליות פוליציסטיות.

Karyotyping רפאים ללמוד חריגות כרומוזום בבני אדם ועכברים עם מחלת כליות פוליציסטיות

אנו מתארים פרוטוקול חזק ותכליתי לניתוח ארכיטקטורה גרעינית ידי דגי DNA 3D באמצעות בדיקות ניאון שכותרתו ישירות.

דגי ה-DNA 3D חזקים באמצעות בדיקות שכותרתו ישירות

ציור כרומוזום הוא שיטה שימושית לחקר ארגון גרעין התא והתפתחות הקריוטיפ. כאן, אנו מדגימים גישה לבודד ולהגביר אזורים ספציפיים של עניין מכרומוזומי פוליטן יחיד המשמשים לאחר מכן עבור פלואורסצנט דו מימדי בהכלאה situ (FISH).

ציור כרומוזום דו מימדי ותלות מימדי אצל יתושים מלריה

פרוטוקול מתואר להכנת התפשטות כרומוזומים מיטוטיים איכותיים בשיטת ייבוש אוויר מהירה המתאימה לזיהוי FISH של בדיקות DNA בודדות וגבוהות.

כרומוזום מהיר האוויר יבש השמטת הכנת שיטה מתאימה לדגים בצמחים

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את התועלת של הכלאה פלואורסצנטית מרובה באתרה (mFISH) וקריוטיפ ספקטרלי (SKY) בזיהוי סטיות יציבות בין-כרומוזומליות בתאי מח העצם של עכברים לאחר חשיפה לקרינה כוללת של הגוף.

איתור של סטיות יציבות אינטר-כרומוזומליות ידי קרינה נפוצה<em&gt; באתרו</em&gt; הכלאה (mFISH) ו ספקטרלית Karyotyping (SKY) בעכברים מוקרנים

כתב יד זה מציג שיטה מפורטת ליצירת X-כרומוזום הזרוע המחקרים וכל ביצוע קרינה פלואורסצנטית בחיי עיר הכלאה (דגים) לבדוק את מצבה של אחותך כרומטידה לכידות ב- prometaphase, מפה של עצרתי  דרוזופילה oocytes. פרוטוקול זה מתאים לקביעת אם הזרוע meiotic לכידות הוא שלם או קטועים ב שונים אחרים.

באמצעות קרינה פלואורסצנטית בחיי עיר הכלאה (דגים) כדי לנטר את מצב היד לכידות ב- Prometaphase, מפה של אני דרוזופילה Oocytes

3d-DNA דגים ססגוניות מייצג כלי להמחיש המקום גנומית מרובים בתוך גרעיני תלת-ממד משומרים, חד משמעית הגדרת אינטראקציות הדדית שלהם לוקליזציה בתוך החלל הגרעיני ברמת תא בודד. כאן, פרוטוקול צעד אחר צעד מתואר עבור קשת רחבה של תאים ראשוניים אנושיים.

3D מרובת צבעים דג DNA כלי ללמוד אדריכלות גרעינית בתאים ראשוניים אנושיים

שגיאות מיוטיות בסינפסות ורקומבינציה נפוצות בביציות של יונקים. ניתוח קפדני של חלבונים המעורבים בתהליכים אלה חיוני להבנה כיצד ומדוע ביציות משתבשות לעתים קרובות. הטכניקות המוצגות כאן מאפשרות ניטור מקיף של רקומבינציה וסינפסות כדי להעריך את איכות הביציות בעכברים.

הכנת התפשטות כרומוזומים מיוטיים מביציות עכבר להערכת סינפסה ורקומבינציה

זה וידאו מאמר זה מתאר, צעד אחר צעד, כיצד תהליך דגימת זרע כדי להשיג באיכות טובה...

פלואורסצנציה באתרו הכלאה (FISH) פרוטוקול של זרע אדם

למד את שיטת OctoChrome FISH לזיהוי שינויים מספריים ומבניים בכל 24 הכרומוזומים האנושיים בבת אחת. שיטה זו משפרת את האבחון של לוקמיה ולימפומה בחולים קליניים.

Chromosomics: איתור של שינוי המספרי מבני 24 כרומוזומים כל אדם בו זמנית באמצעות Assay רומן דגים OctoChrome

גלה סרטונים נוספים