Name: ניתוח של הגירה קרסט בידול עצבית ועל ידי חוצה מינים להשתלות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 3 s
Description: למדו שיטה לניתוח הגירה והתמיינות תאי קרסט עצבי בעוברים כימריים של שליו-תרנגולת. טכניקת השתלת צינור עצבי משמשת לעקיבה אחר תאים אלו בביולוגיה התפתחותית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים אנשי המעבדה Lwigale לביקורת של כתב היד. SLG נתמך על ידי ל &#39;רות Kirschstein NRSA אחוות מן הלאומי Eye Institute (F32 EY02167301). PYL נתמך על ידי National Eye Institute (EY018050).

החוקרים אין לי מה לחשוף.

השתלת של הצינור העצבי שליו לעוברי חומוס המארחות המתוארת כאן היא טכניקה פשוטה וזולה לאיתור subpopulations ספציפיות של העברת NCCs שמקורם באזורים שונים לאורך ציר הזנב rostro-21,67-69. שיטה זו מנצלת את הקלות של גישה עוברי העופות (לעומת עוברי יונקים) ו ניתן בשילוב עם טכניקות אחרות, כגון אבלציה רקמות, הזרקה של מולקולות מעכבות או מניפולציה גנטית דרך electroporation של פלסמידים הביטוי, כדי לבדוק באופן ניסויי התגובה של אוכלוסיות מסוימות נודדות NCC לאותות התפתחותיים שונים בתוך עו...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> חומוס ביצים </td><td> שונים - אנו משתמשים טקסס A &amp; M University עופות המדע של המחלקה, טקסס. </td><td></td></tr><tr><td> שליו ביצים </td><td> שונים - אנו משתמשים Ozarks החברה ביצה, מיזורי. </td><td></td></tr><tr><td> ביצה חממה (הצג הדיגיטלי 1502 ספורטאי החממה w / לחות 110-120 וולט AC) </td><td> <a href="http://www.poultrysupply.com" target="_blank">www.poultrysupply.com</a> </td><td> 1502 </td></tr><tr><td> דומון AA מלקחיים, Inox אפוקסי מצופה </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 11210-10 </td></tr><tr><td> נייר דבק </td><td> כל חנות לציוד משרדי </td><td></td></tr><tr><td> עקום איריס מלקחיים </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 11065-07 </td></tr><tr><td> אניndia דיו </td><td> כל ההיצע בחנות האמנות </td><td></td></tr><tr><td> פן / דלקת (פניצילין, סטרפטומיצין) פתרון </td><td> VWR הבינלאומי </td><td> 101447-068 </td></tr><tr><td> סרט אריזה ברור </td><td> כל חנות לציוד משרדי </td><td></td></tr><tr><td> מנגנון משיכת המחט </td><td> Narashige, יפן </td><td> PE-21 </td></tr><tr><td> זכוכית מחט הוציא, עשה 1.5-1.8 צינור x 100mm בורוסיליקט זכוכית נימי </td><td> קימבל מרדף </td><td> 34500 99 </td></tr><tr><td> משך זכוכית פיפטה, עשוי 5 ¾ &quot;פיפטה פסטר </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 13-678-6A </td></tr><tr><td> הפה פיפטה המנגנון (צינור aspirator הרכבה על פיפטה microcapillary מכויל) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5177-52 א </td></tr><tr><td> דומון # 5 מלקחיים </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 11251-30 </td></tr><tr><td> חבית גדולהחוט gsten, קוטר 0.1mm </td><td> VWR הבינלאומי </td><td> AA10404-H2 </td></tr><tr><td> מחזיקי מחט (מצופה ניקל בעל קוד אישי) </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 26018-17 </td></tr><tr><td> QCPN antiserum </td><td> התפתחותית מחקרים Hybridoma בנק, אוניברסיטת איווה </td><td> QCPN </td></tr><tr><td> Alexa פלואוריד משני נוגדנים (למשל, Alexa פלואוריד 594 עיזים נגד העכבר IgG1) </td><td> Invitrogen </td><td> A21125 </td></tr><tr><td> הצלצול של פתרון (2L): <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 14.4g NaCl </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 0.34g CaCl 2 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 0.74g KCl </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 0.230g Na 2 HPO 4 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 0.04g KH 2 PO 4 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> DDH 2 O ל-2L </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סינון החיטוי </li></ul></td><td> כל ריאגנטים של פישר סיינטיפיק </td><td><ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 7647-14-5 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 10043-52-4 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 7447-40-7 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 7558-79-4 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 7778-77-0 </li></ul></td></tr></tbody></table>

ניתוח של הגירה קרסט בידול עצבית ועל ידי חוצה מינים להשתלות

Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation

עוברי העופות לספק פלטפורמה ייחודית לחקר תהליכים התפתחותיים רבים החוליות, בשל גישה קלה של עוברים בתוך הביצה. עוברי העופות chimeric, שבו הרקמה שליו התורם הושתלו העובר חומוס ב לג&#39;ימי, לשלב את העוצמה של תיוג גנטי של אוכלוסיות תאים בל יימחה בקלות מניפולציה שהוצגו על ידי העובר העופות. שליו, חומוס מפלצות הם כלי קלאסי עבור מעקב אחר תאים נודדים לפסגה עצביים (NCCs) 1-3. NCCs הם אוכלוסייה נודדות חולפות של התאים בעובר, אשר מקורם באזור הגבי של 4 בפיתוח בצינור העצבי. הם עוברים אפיתל המעבר mesenchymal ובהמשך נודדים לאזורים אחרים של העובר, שם הם להתמיין לסוגי תאים שונים, כולל 5-13 סחוס, מלנוציטים 11,14-20, הנוירונים גליה 21-32. NCCs הם multipotent, ואת גורלם האולטימטיבי שלהם משפיעיםenced לפי אזור 1) של הצינור העצבי שבו הם נובעים לאורך ציר rostro-הזנב של העובר 11,33-37, 2) לאותות ששיגרו התאים הסמוכים כשהם נודדים 38-44, ו - 3) microenvironment של האולטימטיבי שלהם היעד בתוך העובר 45,46. מעקב אחר התאים האלה מנקודת המוצא אל הצינור העצבי, למיקום הסופי וגורלו בתוך העובר, מספק תובנה חשובה לתוך התהליכים ההתפתחותיים המווסתים דפוסים ו organogenesis. השתלת אזורים משלימים של הצינור העצבי התורם (homotopic השתלת) או באזורים שונים של הצינור העצבי התורם (heterotopic השתלת) יכול לגלות הבדלים במפרט מראש של NCCs לאורך ציר rostro-הזנב 2,47. טכניקה זו ניתן להתאים עוד יותר להשתיל תא החד צדדית של הצינור העצבי, כך שצד אחד נגזר רקמות התורם, ואת שרידי בצד הנגדי מוטרד בעובר המארח, ייelding הבקרה הפנימית בתוך מדגם זהה 2,47. זה גם יכול להיות מותאמים עבור השתלת קטעי מוח עוברי מאוחר יותר, לאחר HH10, כאשר בצינור העצבי הקדמי סגר 47. כאן אנו מדווחים על טכניקות להפקת שליו, חומוס מפלצות באמצעות השתלת בצינור העצבי, אשר מאפשרים מעקב אחר NCCs נודדים שמקורם קטע נפרד של הצינור העצבי. מינים ספציפיים תיוג של התורם הנגזרות תאים עם נוגדן ספציפי QCPN שליו 48-56 מאפשרת לחוקר להבחין התורם תאים המארחות בנקודת סיום הניסוי. טכניקה זו היא פשוטה, זולה, ויש לה יישומים רבים, כולל מיפוי, גורל, השושלת תא מעקב, זיהוי דפוסים מראש אירועים לאורך ציר הזנב rostro-45. בגלל הקלות של גישה העובר העופות, הטכניקה שליו, חומוס שתל עשוי להיות משולב עם מניפולציות אחרות, כולל אך לא רק, אבלציה העדשה 40, הזרקה של מולקולות מעכבות 57,58 או מניפולציה גנטית דרך electroporation של פלסמידים הביטוי 59-61, כדי לזהות את התגובה של זרמים נודדות מיוחדות של NCCs על הפרעות בתוכנית ההתפתחות של העובר. יתר על כן, שיטה זו השתלת יכול לשמש גם כדי לייצר אחרים עוברים interspecific chimeric כמו שליו, ברווז מפלצות ללמוד תרומה NCC כדי המורפוגנזה Craniofacial או עכבר חומוס מפלצות לשלב את כוחה של הגנטיקה העכבר בקלות מניפולציה של העובר העופות . 62

הגישה לניתוח הגירה גורלו הסופי של העופות לפסגה תאים עצביים שליו, חומוס עוברים chimeric מתואר. שיטה זו היא טכניקה פשוטה וישירה לאיתור תאים עצביים לפסגה במהלך הגירה והבחנה שקשה אחרת להבחין בתוך העובר גוזל unmanipulated.

עוברי עוף מהווים פלטפורמה ייחודית לחקר תהליכי התפתחות רבים של חרפת-חושה, וזאת בשל הגישה הקלה לעוברים בתוך הביצה. ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא להשתיל רקמה גבייה של צינור העצבים (dorsal neural tube explan) מעובר של שליו לתוך עובר של תרנגולת בשלב התפתחותי תואם, וזאת כדי לעקוב אחר נדידתם וגורלם של תאי רכס העצבים (neural crest cells). פעולה זו מתבצעת תחילה על ידי פקיעה של חור קטן בממברנת ה-IGN של עובר התרנגולת המארח כדי להגיע לצינור העצבים. לאחר מכן, עובר השליו התורם מוצא מהביצה שלו כדי להכינו לחיתוך השתל.בשלב הבא, מוציאים את אזור העניין מהצינור העצבי של העובר המארח. לאחר מכן, מוציאים אזור דומה מהצינור העצבי של התורם לצורך השתלה. לבסוף, משתילים את הצינור העצבי של התורם לתוך הצינור העצבי של המארח.לבסוף, העובר הכימרי מדגיר עד לשלב הרצוי לצורך זיהוי תאי רב-עצב (neural crest) שהגיעו לאיבר הנבחר. בסופו של דבר, ניתן לדייק את נדידתם והבידול של תאי רב-עצב שמקורם בתורם למיקומים שונים בעובר המארח באמצעות מיקרוסקופיה של אימונופלואורסצנציה. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית כיוון ששלבי המיקרו-דיסקציה וההשתלה דורשים מיומנויות מוטוריות עדינות מאוד, מה שהופך את למידתם לקשה.התחילו בשטיפת לכלוך מביצי האפרוחים במים פושרים. סדרו את הביצים בצורה אופקית על מגש, ולאחר מכן סמנו בעיפרון את הצד הפונה כלפי מעלה כדי לציין את האזור שבו ימוקם העובר. להכנת עוברים תורמים בשיטת X ovo, הדגרירו את רגלי הסלוקיות כאשר הצד הקה פו

analysis-neural-crest-migration-differentiation-cross-species

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

כדי לטפח גזע עצביים לפסגה תאים (NCSC) במבחנה, בינוני מיוחד (NCSCM) נדרשת. חלק חיוני של NCSCM הוא עובר אפרוח לחלץ (CEE). כאן אנו מתארים טכניקות מדויקות כדי לייצר כמות מוגדל של איכות CEE טהור גבוהה, כולל פרטים כמו בידוד, מסמוס, צנטריפוגה, תהליכי סינון.

הפקה של חילוץ העובר צ&#39;יק לגידול Murine בתאי גזע עצביים קרסט

גישה לנתח את ההגירה של תאים (תאי explanted רכס עצביים גזע) הוא תאר. שיטה זו היא זולה, עדינה, ומסוגלת להבחין chemotaxis משני chemokinesis והשפעות אחרות על קוטביות נדידה כגון אלה נגזרים מאינטראקציות תא תא בתוך התרבות העיקרית הגזע עצבי פסגת התא.

ניתוח של נדידת תאים עצביות קרסט טרונק באמצעות Assay השתנה Zigmond הקאמרי

הבידוד של הרכס העצבי העובר מן הצינור העצבי מאפשרת את...

בידוד והתרבות של תאים עצביים לפסגה מהצינור עובריים עצבית Murine

Mesenchyme הגולגולת עובר תנועות morphogenic דרמטיות שעשויים מספקת כוח מניע לגובה של הקפלים...

Assay Explant להערכת התנהגות ניידת של mesenchyme הגולגולת

פרוטוקול זה מתאר כיצד לנתח פסגת premigratory גולגולת עצבית (NC) מneurulas laevis Xenopus. יכול להיות מצופה explants אלה בפיברונקטין ותרבית במבחנה, או מורכב בחזרה לעוברי מארח. טכניקה זו מאפשרת חקר המנגנונים של מעבר NC האפיתל לmesenchyme, הגירה, ובידול.

Dissection של<em&gt; Laevis Xenopus</em&gt; העצבי קרסט עבור<em&gt; במבחנה</em&gt; Explant תרבות או<em&gt; In vivo</em&gt; השתלות

שילוב של טכניקות אופטי מתקדם של סריקת מיקרוסקופ עם זמן עירור קרינה פלואורסצנטית פוטון מרובה אורך גל לייזר בוצע כדי ללכוד דימות ברזולוציה גבוהה, תלת מימדי, בזמן אמת של הרכס העצבי הגירה ב Tg (sox10:EGFP) ו- Tg (foxd3:GFP) דג זברה עוברי.

פוטון רב זמן לשגות הדמיה כדי להמחיש את התפתחות בזמן אמת: ויזואליזציה של העברת תאי הרכס העצבי עוברי דג זברה

פרוטוקול זה מתאר את הניתוח והתרבות של תאי ציצה עצביים הגולגולת מדגמי העכבר, בעיקר למחקר של הגירה תא. אנו מתארים את טכניקות ההדמיה החי בשימוש וניתוח של מהירות וצורה תא שינויים.

חיתוך, תרבות וניתוח של הגולגולת הראשי ציצה עצביים תאים מעכבר לחקר של ציצה של תא העצבים העצבי והגירה

מאמר זה מתאר טכניקת השתלת רקמות שנועדה לבחון את תכונות האיתות והדפוס של המוח הקדמי הבסיסי במהלך התפתחות הגולגולת.

יצירת כימרות במוח הקדמי של העופות להערכת התפתחות הפנים

פרוטוקול רב-תכליתי זה מתאר את הבידוד של תאי פסגה עצבית קדם-מיגרטיבית (NCCs) באמצעות כריתה של קפלים עצביים גולגולתיים מעוברי אפרוחים. עם הציפוי והדגירה, NCCs נודדים מגיחים מתוך קצוות עצביים, מה שמאפשר הערכה של מורפולוגיה של תאים ונדידה בסביבה דו-ממדית פשוטה.

הכנה וניתוח מורפולוגי של תרביות תאי צמרת עצביים גולגולתיים של אפרוחים

אנו מציגים פרוטוקול התמיינות תלת מימדי (תלת מימדי) במבחנה המייצר נוירוספירות בגודל הניתן לשחזור כדי לייצר תאי פסגה עצבית גולגולתית מתאי גזע עובריים של עכברים. אנו מראים כי מתודולוגיה זו מפחיתה את השונות בהשוואה לפרוטוקולים קודמים וכיצד ניתן להשתמש בה לבדיקה מרובה לחקר התפתחות תאי פסגה עצבית גולגולתית.

תאי פסגה עצבית גולגולתית פרוטוקול התמיינות תלת מימדי במבחנה לבדיקה מרובבת

למדו שיטה לניתוח הגירה והתמיינות תאי קרסט עצבי בעוברים כימריים של שליו-תרנגולת. טכניקת השתלת צינור עצבי משמשת לעקיבה אחר תאים אלו בביולוגיה התפתחותית.

ניתוח של הגירה קרסט בידול עצבית ועל ידי חוצה מינים להשתלות

גלה סרטונים נוספים