פרי ניתוח נדיפים באמצעות האף האלקטרוני

המטרה הכוללת של הליך זה היא לבצע ניתוח מהיר של תרכובות נדיפות בפירות. זה מושג על ידי חיתוך והומוגניזציה של רקמת הפרי. לאחר מכן מנותח שלב האדים מעל הדגימה הנוזלית עם האף האלקטרוני.

לאחר ניתוח אף אלקטרוני, הנתונים מיוצאים ומשתנים. השלב האחרון של ההליך הוא זיהוי חלונות אינדקס קובאס ואיחוד הפסגות תחת תווית אינדקס קובאס אחת באמצעות הממשק הגרפי. בסופו של דבר, התוצאות מראות כי הבדלים בשפע זקיקי הפירות כפי שנמדדו באף אלקטרוני יכולים להיות קשורים לטיפולים ניסיוניים כגון מגוון פירות, בשלות ואחסון.

היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כמו כרומטוגרפיית גז מסורתית, הוא בכך שהיא מאפשרת ניתוח מהיר יותר של תרכובות נדיפות בפרי. בעת ביצוע ניתוח זה, עשויים להתרחש שינויים קלים בזמני שמירת האנליטים. זה עלול להוביל לפרשנות שגויה של הנתונים ללא התייחסות מדוקדקת לתהליך יישור השיא.

לאחר קציר הפירות בשלב הבשלות הרצוי, יש לשטוף במי ברז. על מנת להסיר לכלוך ואבק, בחרו פירות לניתוח. בהתבסס על היעדר פגמים וגודל חיצוניים ופנימיים, הומוגניות חותכת פירות לאורך לטריזים שישמשו לדגימה נדיפה.

במידת הצורך, יש להסיר זרעי עור, רקמת חלל זרעים או פרי גלען. בחירת הרקמות חייבת להיות עקבית לאורך כל הניסוי, ויש לקחת בחשבון שונות בתוך פרי בודד. לדוגמה, יש לקבל דגימות באופן שווה מחלקי הפריחה המשוונית והגבעול.

מערבבים את רקמת הפרי שנבחרה, מערבבים אותה על מנת לחלק באופן אקראי ואז שוקלים 200 גרם לבלנדר מסחרי. הוסף 200 מיליליטר תמיסת סידן כלוריד רוויה. הסידן הכלורי נועד לשמש כמעכב פעילות אנזימטית, שעלולה להתרחש לאחר חיתוך והומוגניזציה של בשר הפרי.

לאחר מכן הוסף 50 מיקרוליטר של תמיסה של 100 מילי-מולרית של שני מתיל בוטיל איזו שנאכלו במתנול. פתרון זה מתווסף כתקן פנימי לניטור כל הפסדים אפשריים של תרכובות נדיפות במהלך תהליך ההומוגניזציה. לאחר מכן, הומוגניזציה של התערובת בבלנדר מעבדה למשך 30 שניות ב -18, 000 סל"ד.

ואז יוצקים מיד לבקבוק זכוכית ואוטמים במכסה טפלון. שמור את ההומוגנאט בבקבוק עד הכנת כל הדגימות. פיפטה חמישה מיליליטר של מיץ ללא קצף לבקבוקוני ענבר מזכוכית של 20 מיליליטר להכנת לפחות שלושה בקבוקונים לדגימה.

לשמש כשכפולים טכניים. אטום את הבקבוקונים עם מכסי בורג מפלדה המצוידים במחיצות סיליקון טפלון. בשלב זה, ניתן לנתח דגימות באופן מיידי או להקפיא אותן בחנקן נוזלי ולאחסן אותן בטמפרטורה נמוכה במיוחד לניתוח מאוחר יותר.

טען את שיטת הניתוח המתאימה על ה-Xenos. הזן את הפרמטרים כפי שנמצאו בפרוטוקול הכתוב. חבר מחט נירוסטה עם קצה ללא ליבה לכניסת הקסנוס.

נקה את המערכת מספר פעמים באוויר הסביבה עד שקו הבסיס יציב ולא מתגלות פסגות גדולות מ-200 ספירות. התכוננו לכוון את המכשיר על ידי החדרת מחט למחיצה של בקבוקון המכיל תמיסה של שרשרת ישרה כדי להקל על הלחץ. לאחר מכן הכנס את המחט המחוברת לכניסת המכשיר לתוך המחיצה.

בצע את המנגינה על ידי התחלת דגימת מרווח ראש. תוצאת המנגינה משמשת את תוכנת המכשיר כדי להמיר את זמן השמירה של הפסגות הנרמזות מיחידות זמן לאינדקס קובאס או יחידות KI. כתוצאה מכך, לאחר כוונון המערכת, זמני השמירה מדווחים ביחידות KI.

התחל בניתוח הדגימה לאחר שיווי משקל הדגימה למשך 30 דקות על ידי החדרת מחטים למחיצה של בקבוקון הדגימה. כפי שנעשה לפתרון של שרשרת ישרה. התחל דגימת מרווח ראש באופן ידני על ידי לחיצה על כפתור ההפעלה, מה שגורם למשאבה להפעיל ולמשוך את האדים הקיימים מעל הדגימה.

בתום הניתוח מופיעה כרומטוגרמה על המסך והחיישן מחומם אוטומטית ל -150 מעלות צלזיוס למשך 10 שניות כדי לנקות אותו. כאשר תיבת מצב המערכת הופכת לירוקה, שוב, המכשיר מוכן לנתח דגימה אחרת. כדי להבטיח קו בסיס יציב וניקוי נכון של המערכת, הפעל לפחות ריק אוויר אחד בין כל דגימה.

נתח לפחות שלושה שכפולים טכניים לכל דגימה וכן ריקים בבקבוקון. ייצא את הנתונים לקובץ Microsoft Excel לאחר הרכישה באמצעות פונקציית הנתונים המאוחסנים ביומן בתוכנת Mense. לאחר ייצוא הנתונים, הוסף עמודות המכילות תוויות עבור משתנים ושכפולים.

ניתן לשנות את פורמט הנתונים המיוצא מתוכנת מכשירים למניפולציה קלה יותר באמצעות סקריפט Python 0.6 שנוצר על ידי מעבדה זו. שם קובץ המקור ושם הגיליון עבור נתוני הקלט, כמו גם שם הקובץ הרצוי לפלט נערכים ישירות בסקריפט. סקריפט זה מקל על מניפולציה וניתוח נתונים באמצעות זיהוי kis ייחודי בכל הדגימות.

הנתונים מסודרים מחדש עם מידע לדוגמה בשורות ו- KIS ייחודי בעמודות כאשר כל תא מייצג את אזור השיא המתאים. אם לא מזוהה שיא עבור ערך KI בדגימה, התא המתאים נשאר ריק. לאחר מכן, באמצעות קובץ Script שני שנוצר על-ידי ייבוא מעבדה זה, הנתונים מהקובץ נערכו בשלב הקודם.

הניתוח מבוסס על הצגה וניתוח של מספר הפעמים שזוהה כל ערך KI. לפיכך, התוכנית מציגה גרף עמודות של כניסות KI. עבור כל ערך KI, הערך את פגיעות ה-K של תת-קבוצות ספציפיות של דגימות, ונתח כל קבוצה של שכפולים טכניים יחד.

לשם כך, נתח כל טיפול או משתנה בנפרד על ידי סימון או ביטול הסימון של התיבות המתאימות. לאחר זיהוי הרוחב של כל חלון KI באמצעות הממשק הגרפי, בחר באופן אקראי כמה מהכרומטוגרמות המתאימות. בתוכנה mense להעריך פסגות חופפות בין השכפולים הטכניים.

לאחר שחלון ה-KI הופך לאינדיבידואציה, תכונת המיזוג בממשק הגרפי משמשת למיזוג ה-KIS הנופלים בחלון ל-ki First המאוכלס ביותר. לחץ על כפתור המיזוג כדי להפעיל את התכונה ובחר את ה-ki המאוכלס ביותר במרכז החלון על ידי לחיצה ימנית על הסרגל המתאים. לאחר בחירת הסרגל, הוא משנה את צבעו והופך לירוק כדי למזג את ה-KIS שנופלים בתוך החלון לתוך ה-ki שנבחר לחיצה ימנית על הסורגים המתאימים.

זה גורם לסורגים להפוך לאדומים בעוד פס כחול באורך המתאים מתווסף על גבי ה-ki המרכזי. לאחר שכל ה-kis שנבחרו מוזגו ל-ki המרכזי המתאים, לחץ שוב על כפתור המיזוג כדי לקבל את השינויים. פעולה זו גורמת ללחצן המיזוג להפוך לצהוב במקרה של טעויות.

לחצן ביטול המיזוג זמין גם לביטול המיזוג. לחץ על כפתור ביטול המיזוג בממשק הגרפי. לאחר מכן לחץ לחיצה ימנית על הסרגל האדום כדי לבטל את המיזוג.

מאדום, המוט הופך לכחול. לחץ שוב על לחצן ביטול המיזוג כדי לקבל את השינויים. אם מנסים למזג באופן שגוי שתי פסגות בדגימה אחת לערך KI יחיד, מודפסת הודעת שגיאה.

לאחר שכל פעולות המיזוג נשמרו בקובץ לפני שתמשיך בניתוח סטטיסטי, הכרומטוגרמות של האוויר והבקבוקון מנותחות כדי לנטר זיהומים אפשריים. לאחר זיהוי ה-ki של הפסגות והחסר, הפחיתו את שטח השיא שזוהה באוויר ו/או ריק הבקבוקון מאזור הפסגה הקיימת. בדגימה, האף האלקטרוני הצליח לזהות הבדלים בפרופילים נדיפים בין פרי מלון שנקטף בשלבי בגרות שונים.

מוצגות כאן דוגמאות לכרומטוגרמות מפירות בוגרים מוקדמים ופירות בשלים לחלוטין, החושפים את ההבדלים באזור השיא עבור פסגות רבות, זוהו 20 K חלונות בכל הדגימות. ניתוח של וריאנטים הראה כי מבין ה-kis השונים הללו, השפע של 14 פסגות שזוהו על ידי האף האלקטרוני השתנה באופן משמעותי בין שני שלבי בגרות. כאן, שיא השפע של הפרי הבוגר המוקדם עבור כל אחד מהקיס הללו משורטט בירוק, וזה של הפרי הבשל לחלוטין משורטט בכתום.

לאחר השלמת הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו כרומטוגרפיית גז יחד עם ספקטרומטריית מסה על מנת לזהות את הרכיבים המתאימים לפסגות בודדות על האף האלקטרוני לאחר פיתוחו. טכניקה זו תספק כלי ניתוח מהיר ותאפשר לחוקרים בתחום הפתולוגיה של הצמח, פיזיולוגיה של הצמח, ביולוגיה לאחר הקטיף ומדעי המזון לחקור שינויים בהרכב הנדיף בפרי כפונקציה של בגרות, מגוון או אחסון. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב באיזו מהירות לנתח תרכובות נדיפות עם אף אלקטרוני ולבצע יישור שיא באמצעות הממשק הגרפי שלנו.