Name: בדיקה קלינית הסרת חוט השדרה במודל של עכברים של טרשת לרוחב amyotrophic (ALS) (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 35 s
Description: למדו הערכה קלינית והתנהגותית של מודל עכברים לטרשת לרוחב amyotrophic (ALS) באמצעות בדיקות מנוע כמו rotor ו-hanging wire. שיטה זו מאפשרת הכנה של חוט השדרה לניתוח אימונוהיסטולוגי ומספקת כלים חיוניים לחקר מנגנוני המחלה והתקדמותה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

LT קיבלה תמיכה מענק Forschungsförderungsprogramm של רפואה באוניברסיטת גטינגן. PL ו MB נתמכו על ידי המרכז למחקר DFG על פיזיולוגיה מולקולרית של המוח (CMPB), גטינגן. המחברים מודים לד&quot;ר לארס Tatenhorst לעזרה עם videography ו בירגיט ליבאו עזרה עם אודיו עריכת וידאו.

בעלי חיים נרכשו מ ג&#39;קסון המעבדה (# 002726) 1. הם קלעו קלינית נתון הבדיקה של המנוע הפונקציה (rotarod מבחן) ושל כוח השרירים (תלוי במבחן תיל). כל הבדיקות האלה לבין הרג של בעלי חיים מאוחר יותר, על מנת להכין את חוט השדרה בוצעו בהתאם קרוב מאוד ההנחיות מקומיים לניהול נכון של ניסויים בבעלי חיים. 1. ציון קלינית מלבד הערכה של עכברים משקל הגוף נבחנים סימנים של הגירעון מנוע עם מערכת הנקודה הבאה 4 הבקיע 2: 4 נקודות: רגילות (שום סימן של חוסר תפקוד המנוע) 3 נקודות: רעד בגפיים האחוריות ניכרים כאשר תנאי בזנבו 2 נקודות: הפרעות בהליכה נוכחים 1 נקודה: גרירה של איבר אחד לפחות האחורית 0 נקודה: סימטרי<html> , שיתוק וחוסר יכולת הזכות עצמה או הפסד של 20% ממשקל הגוף לכל היותר, במקרה זה את בעלי החיים מומתים מיד את הניסוי הסתיים 2. בדיקות של תפקוד מוטורי וכוח שרירים תלוי חוט בדיקה זו משמשת להערכת כוח שרירי 3, 4. כל בעלי החיים לבצע את הבדיקה לפחות יום או יומיים לאחר הבדיקה rotarod. כל העכבר ממוקם על המכסה מחוייט עם חוט במרווחים של 0.8 ס&quot;מ ובזהירות התהפך, 60 ס&quot;מ מעל קש מכוסה התחתונה. אחרי האימון במשך שלוש פעמים רצופות של לפחות 180 של חביון ליפול נמדד. עכבר זה ניתנת עד שלושה ניסיונות לקיים על מכסה הפוך לתקופה מקסימלית של 180 וה התקופה הארוכה ביותר נרשם. Rotarod מבחן s = &quot;jove_content&quot;&gt; מנגנון rotarod (אוגו באזיל, Comerio, איטליה) שימש למדידת בתיאום המנוע, איזון המנוע יכולת הלמידה 3, 4. ביצועים טובים דורש רמה גבוהה של תיאום הסנסורית. המכשיר צריך להיות ממוקם בסביבה שלווה ולא מטרידה, כדי למנוע גירויים distractive עבור בעל החיים נבדק. הוא מורכב ציר המנוע מונע מבוקרת מחשב מסתובב וחמישה נתיבים חמש עכברים. פולס של העכברים מזוהים אוטומטית על צלחת פלסטיק בחלק התחתון של לחץ. אחרי האימון במשך שלוש פעמים רצופות של של לפחות 180 במהירות קבועה של 15 סל&quot;ד הזמן שבו בעלי חיים יכול להישאר על מוט מסתובב נמדד. כל חיה עוברת שלושה ניסיונות ההשהיה הארוכה ביותר בלי ליפול נרשם. בזמן של 180 נבחר זמן גיזום &#39;, כי רוב הבדלים משמעותיים תיאום מנוע מזוהים במסגרת הזמן הזה. 3. חוט השדרה הכנה <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעלי חיים נהרגים על ידי הפחה 2 CO בהתאם להנחיות המקומיות ושהם perfused מיד transcardially פתרון PBS ואחריו פתרון paraformaldehyde 4%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת להכין את חוט השדרה של העכבר הקריב, חיה ממוקם על שולחן הניתוח ואת ארבעת הגפיים קבועים בצד כדי לחשוף את הצד האחורי של העכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כביסה קצר עם פתרון אתנול 70% מנקה את האתר של דיסקציה ומשטחת את המעיל שיער. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן העור חקוק באיזמל חד של הקו החציוני. על מנת להקל על חיתוך העור נמתח על שני הצדדים. אם שרירי הרגליים יהיה מוכן, העור שלהם גם להיות חקוק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר חיתוך העור הושלמה, הוא הסיט עם זוג פינצטה לחשוף fascia השטחית הבסיסית של הגוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שרירי הצוואר רצועה עורפית צריך להסיר והם CAמוכן refully. היזהר שלא לחתוך את חבל הטבור עמוק פגיעה בעמוד השדרה. שרירי הכתף ניתן גם להסיר על מנת לחשוף טוב יותר את עמוד השדרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אז השרירים paravertebral יוסרו עמוד השדרה כולו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת לפתוח את laminectomies עמוד השדרה כמה צריך להתבצע. יש להתחיל מהחלק העליון גולגולתי באתר של מפרק atlanto-העורפית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זה הכי קל להסיר את קיבוע של שתי גפיים עליונות ו להתמתח יתר על המידה את הצוואר כדי להיות מסוגל יותר לבצע את laminectomy חוליות 1. אלה התרחקה בלי לגעת בחוט השדרה חשוף צוואר הרחם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חוליות יותר יוסרו על ידי 1 חוצים את קשתות בחוליות בשני הצדדים עם מספריים בזווית ואז מושך את התהליכים הגב. חלקים לרוחב הנותרים של החוליות יש להסיר כדי להקל מאוחר יותר הסרה מלאה של חוט השדרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציון דרך האנטומי של שדרה מותניכבל אני הוא עבוי כי נוכחת גם חוט השדרה הצווארי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כשסיים laminectomy של חוט השדרה כולו, ודא כי אתה גם transect כל השורשים הגחון ולשחרר את חוט השדרה של מאטר דורה של קרומי המוח את. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אז חוט השדרה הצווארי הוא חתך cranially ואתה מתחיל להסיר את חוט השדרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבסוף חוט השדרה הוא חתך גם דיסטלי cauda-equina להשתחרר לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסופו של דבר, חוט השדרה ממוקמת בפתרון postfixating (paraformaldehyde למשל 4%) במשך הלילה יכול להיות מעובד יותר. בדרך כלל אנחנו cryosection חוט השדרה להכין אותו לניתוח immunohistological. </li></ol> 4. נציג תוצאות הטכניקה של הכנת חוט השדרה מהווה את המוקד של מאמר זה וידאו. זהו תנאי הכרחי חתך ברקמת מאוחר יותר, ובסופו של דבר לניתוח immunohistological של ספינהחוט וסעד חלקים. כדוגמה התוצאה הסופית, הבדיקות immunohistochemical האזור הקרן הקדמית של חוט השדרה המותני של העכבר wildtype (WT) של SOD G93A transgene (TG) העכבר באה לידי ביטוי. הנוירונים המוטוריים ניתן לזהות נוגדנים נגד דברו הראשי וסימון ניאון לאחר מכן עם נוגדנים Cy3 משני. בנוסף, גרעיני נגד כתם עם DAPI (4,6-diamidino-2-phenylindole) שבוצעה (איור 1). <img src="/files/ftp_upload/3936/3936fig1.jpg" alt="איור 1" /> באיור 1. Photomicrographs פלורסנט חזותי immunodetection של motoneurons עם נוגדן אנטי דברו (אדום) ואת גרעין הסלולר נגד כתם ידי DAPI (כחול) קרן חוט השדרה המותני העכבר הקדמי של wildtype (ט) (משמאל) ושל SOD G93A מהונדס (TG) (מימין) העכבר בגיל 130 ימים. סרגל קנה מידה: 40 מיקרומטר. כמו ניתוח immunohistochemical שלאת SOD בעכברים G93A אינו היקף העיקרי של מאמר זה יש לפנות את הפרסום המקורי, שבו אלה העכברים הטרנסגניים אופיינו ואת אלה האחרונים יותר, ללמוד גישות טיפוליות לעיון נוסף 1, 5, 6. אם השפעות טיפוליות יהיו מובחנים ברמה immunohistological מוגדר אלגוריתמים הערכה כמותית יש להחיל נתמך על ידי תוכנת stereological (לדוגמה לראות 7).

<ol><li>Gurney, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+neuron+degeneration+in+mice+that+express+a+human+Cu%2C+Zn+superoxide+dismutase+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu, Zn superoxide dismutase mutation.</a> Science. 264 (5166), 1772-1775 (1994).</li>
<li>Weydt, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+disease+onset+and+progression+in+the+SOD1+mouse+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Assessing disease onset and progression in the SOD1 mouse model of ALS.</a> Neuroreport. 14 (7), 1051-1054 (2003).</li>
<li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+phenotyping+strategies+for+mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Behavioral phenotyping strategies for mutant mice.</a> Neuron. 57 (6), 809-818 (2008).</li>
<li>Miana-Mena, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+methods+to+characterize+the+G93A+mouse+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Amyotroph.+Lateral+Scler.+Other+Motor+Neuron+Disord%22%5BJournal%5D)">Optimal methods to characterize the G93A mouse model of ALS.</a> Amyotroph. Lateral Scler. Other Motor Neuron Disord. 6 (1), 55-62 (2005).</li>
<li>Zhong, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+protein+C+therapy+slows+ALS-like+disease+in+mice+by+transcriptionally+inhibiting+SOD1+in+motor+neurons+and+microglia+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Activated protein C therapy slows ALS-like disease in mice by transcriptionally inhibiting SOD1 in motor neurons and microglia cells.</a> J. Clin. Invest. 119 (11), 3437-3449 (2009).</li>
<li>Pitzer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Granulocyte-colony+stimulating+factor+improves+outcome+in+a+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Granulocyte-colony stimulating factor improves outcome in a mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Brain. 131 (Pt. 12), 3335-3347 (2008).</li>
<li>Gowing, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ablation+of+proliferating+microglia+does+not+affect+motor+neuron+degeneration+in+amyotrophic+lateral+sclerosis+caused+by+mutant+superoxide+dismutase%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Ablation of proliferating microglia does not affect motor neuron degeneration in amyotrophic lateral sclerosis caused by mutant superoxide dismutase.</a> J. Neurosci. 28 (41), 10234-10244 (2008).</li>
<li>Scott, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((interpretation+of+studies+in+the+standard+murine+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Amyotroph+Lateral+Scler%22%5BJournal%5D)">interpretation of studies in the standard murine model of ALS.</a> Amyotroph Lateral Scler. 9 (1), 4-15 (2008).</li>
<li>Turner, B. J., Talbot, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenics%2C+toxicity+and+therapeutics+in+rodent+models+of+mutant+SOD1-mediated+familial+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Transgenics, toxicity and therapeutics in rodent models of mutant SOD1-mediated familial ALS.</a> Prog Neurobiol. 85 (1), 94-134 (2008).</li>
<li>Corse, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+testing+of+neuroprotective+neurotrophic+factors+in+a+model+of+chronic+motor+neuron+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Preclinical testing of neuroprotective neurotrophic factors in a model of chronic motor neuron degeneration.</a> Neurobiol Dis. 6 (5), 335-346 (1999).</li>
<li>Knippenberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Significance+of+behavioural+tests+in+a+transgenic+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+%28ALS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Significance of behavioural tests in a transgenic mouse model of amyotrophic lateral sclerosis (ALS).</a> Behav Brain Res. 213 (1), 82-87 (2010).</li>
<li>Burgess, R. W., Cox, G. A., Seburn, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuromuscular+disease+models+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Neuromuscular disease models and analysis.</a> Methods Mol. Biol. 602, 347-393 (2010).</li>
<li>Hayworth, C. R., Gonzalez-Lima, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-symptomatic+detection+of+chronic+motor+deficits+and+genotype+prediction+in+congenic+B6.SOD1%28G93A%29+ALS+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Pre-symptomatic detection of chronic motor deficits and genotype prediction in congenic B6.SOD1(G93A) ALS mouse model.</a> Neuroscience. 164 (3), 975-985 (2009).</li>
<li>Ludolph, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+preclinical+animal+research+in+ALS%2FMND%3A+A+consensus+meeting%5BTitle%5D)+AND+%22Amyotroph+Lateral+Scler%22%5BJournal%5D)">Guidelines for preclinical animal research in ALS/MND: A consensus meeting.</a> Amyotroph Lateral Scler. 11 (1-2), 38-45 (2010).</li>
<li>Boillee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Onset+and+progression+in+inherited+ALS+determined+by+motor+neurons+and+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Onset and progression in inherited ALS determined by motor neurons and microglia.</a> Science. 5778 (3), 1389-1392 (2006).</li>
</ol>

אין ניגוד עניינים הצהיר.

המודל (G93A) SOD1 העכבר הגנטי הוא מודל בעל חיים בעל ערך לחקור את מהלך המחלה של אובדן motoneuron מתקדמת להשוות טרשת האנושי לרוחב amyotrophic 8. מגוון של פרדיגמות טיפול שונות הוערכו במודל זה ולייצג הבסיס לאחר מכן לבצע בדיקה קלינית 8-10 מחקרים בבני אדם. כדי להיות מסוגל לזהות הבדלים משמעותיים במחקר טיפול ניסיוני בעכברים אלו, יש חשיבות הנודע לכלול לפחות 24 גורים בהתאמה מגדרית מאוזנות עכברים בעלי רקע גנטי זהה ופעל עיצוב כפול עיוור 8. להשוות מחקרים קליניי...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td></td><td> יצרן </td><td> הזמנת מידע </td></tr><tr><td> ההתנהגות בדיקה </td><td></td><td></td></tr><tr><td> רוטה-Rod של עכברים </td><td> אוגו באזיל, Comerio, איטליה </td><td> # 47600 </td></tr><tr><td> תלוי במכשיר תיל </td><td> מחוייט </td><td></td></tr><tr><td colspan="3"></td></tr><tr><td> חוט השדרה הכנה </td><td></td><td></td></tr><tr><td> מבצע טבלה מבצע מנורה כפפות מגן </td><td></td><td></td></tr><tr><td> &quot;איריס&quot; מספריים, מוטה הצידה </td><td> מדע כלים עדינים, היידלברג, גרמניה </td><td> 14063-09 </td></tr><tr><td> כוהן-Vannas אביב מספריים, ישרים </td><td> מדע כלים עדינים, היידלברג, גרמניה </td><td> 15000-10 </td&gt; </tr><tr><td> מיקרו מלקחיים </td><td> Hammacher, Solingen, גרמניה </td><td> HWC 111-10 </td></tr><tr><td> אזמל &quot;präzisa פלוס&quot; </td><td> Dahlhausen, קלן, גרמניה </td><td> 11.000.00.510, איור 10 </td></tr></tbody></table>

בדיקה קלינית הסרת חוט השדרה במודל של עכברים של טרשת לרוחב amyotrophic (als)

Clinical Testing and Spinal Cord Removal in a Mouse Model for Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS)

טרשת לרוחב amyotrophic (ALS) היא מחלת ניוון עצבים קטלנית והתוצאה היא ניוון הדרגתי של motoneurons. השיא של התפרצות הוא סביב 60 שנה למחלה סדירה סביב 50 שנה למחלה משפחתית. בעקבות הקורס המתקדם שלה, 50% מהחולים מתים תוך 30 חודשים של תחילת הסימפטומים. על מנת להעריך אפשרויות טיפול חדשות למחלה זו, מודלים העכבר הגנטיים של ALS נוצרו על בסיס מוטציות משפחתיות האדם בגן SOD, כמו מוטציה SOD1 (G93A). ההיבטים החשובים ביותר שיש הערכה במודל הם בסך הכל, הישרדות כמובן קלינית בתפקוד המוטורי. הנה, אנחנו מדגימים את הערכה קלינית, להראות ההולכה של שתי בדיקות רכב התנהגותיים ולספק מערכות הבקיע כמותיים על כל הפרמטרים. כי בניתוח מעמיק של המודל העכבר ALS בדרך כלל דורש בדיקה immunohistochemical של חוט השדרה, אנחנו מדגימים את הכנתה בפירוט החלת לעשותlaminectomy rsal השיטה. הממצאים היסטולוגית למופת הם הפגינו. יישום מקיף של שיטות הבדיקה המתואר מחקרים על מודל עכברים של ALS יאפשר חוקר באופן אמין לבחון אפשרויות טיפוליות עתידיות אשר יכול לשמש בסיס ניסויים קליניים בבני אדם אחר כך.

במודל של עכברים של טרשת לרוחב amyotrophic (ALS) נבחן קלינית התנהגותית. כתנאי ניתוח immunohistological נלווה להכנת חוט השדרה מתואר בפירוט.

בדיקה קלינית הסרת חוט השדרה במודל של עכברים של טרשת לרוחב amyotrophic (ALS)

טרשת נשיתית שרירית (ALS) היא הפרעה נוירודגנרטיבית קטלנית הגורמת לניוון פרוגרסיבי של נוירונים מוטוריים. שיאו של גיל הפריצה הוא סביב גיל 60...

שלום, שמי לאר טרנר. אני פוסט-דוקטורנט במחלקה לנוירולוגיה באוניברסיטת אינגהאם, גרמניה. היי, שמי לין גונדה.אני סטודנט לרפואה ואני מבצע את עבודת הגמר שלי במעבדה זו. היום נדגים לכם את הבדיקה הקלינית של SODG 93, מודל עכבר לטרשת צדית (ALS). יתר על כן, נדגים את מבחן התפקוד המוטורי באמצעות מבחן הרוטור, ובנוסף, מבחן תפקוד מוטורי נוסף של אחיזת חוט תלוי, וזאת כדי לבצע ניתוח אימונולוגי.לאחר בדיקה תפקודית של עכברי ה-a s, הליך נחוץ כולל את הסרת חבל השדרה, עצב ה-STIC ושריר ה-gastroc. אנו מעוניינים להדגים את ההליך הכירורגי הזה בפירוט, ובסוף נציג מספר ממצאים אימונולוגיים לדוגמה. ובכן, כעת נתחיל קודם כל בבדיקה הקלינית.זהו עכבר מסוג wild type בעל תנועה חופשית, שאינו מראה תסמינים קליניים כלשהם, כגון רעד בשרירים או שיתוק, לפי מערכת הסיווג הקלינית שלנו. מצב כזה יקבל ציון ארבע. זהו עכבר טרנסגני עם ALS.בשלב מוקדם של המחלה, נצפית רעד חמור של הגפה האחורית הימנית המסווג כ-SCORE שלושה E. הפרעות הליכה חמורות מסווגות את החיה כ-score שתיים. גרירה של גפה אחורית אחת לפחות מסווגת כציון קליני one. במבחן תליית התיל (Hanging wire test), מוערכת עוצמה שרירית גסה. כל עכבר מונח על תיל המיוצר בהתאמה אישית (CustomMade) וסובב בזהירות למצב הפוך מעל כפתור המכוסה בקש.לאחר אימון שלושה פעמים רצופות של לפחות 180 seconds, נמדד הזמן עד לנפילה (latency to falls). לכל עכבר ניתנים עד שלושה ניסיונות להחזיק במכסה ההפוך למשך מקסימום של 180 seconds, והתקופה הארוכה ביותר נרשמת. בהשוואה לעכבר מסוג תיל לבן בצד ימין, העכבר הטרנסגני עם הפלאקים בצד שמאל חלש מאוד ונופל מהמכסה לפני הגעה למקסימום.מכשיר ה-Rotor rod משמש למדידת קואורדינציה מוטורית, שיווי משקל ויכולת למידה מוטורית. ביצועים טובים דורשים רמה גבוהה של קואורדינציה סנסורי-מוטורית. המכשיר מורכב מציר מסתובב המונע על ידי מנוע ונשלט באמצעות מחשב, וחמישה נתיבים עבור חמישה עכברים.נפילות של העכברים מזוהות באופן אוטומטי על ידי לחץ על לוח הפלסטיק התחתון. לאחר אימון של שלושה פעמים רצופות של לפחות 180 שניות במהירות קבועה של 15 סיבובים לדקה, נמדד הזמן שבו בעל חיים יכול להישאר על הרוטט המסתובב. כל בעל חיים עובר שלושה ניסיונות, וההשהיה הארוכה ביותר ללא נפילה נרשמת.העכבר מסוג הפרא (wild type) הבריא בצד שמאל רץ ללא קושי על מוט הסיבוב (rotor rod). לעומת זאת, לעכבר הטרנסגני a s mo בצד ימין יש קשיים חמורים אפילו רק להישאר על מוט הסיבוב, והוא מחליק ממנו לאחר זמן קצר, כפי שנצפה מאחור. ניתן לראות את קשיי הריצה החמורים של עכבר ה-retre השמאלי.בהשוואה לעכבר wire tap בריא, הוא אינו מסוגל לעמוד בקצב המהירות של מוט הרוטור ואינו יכול לדחוף כלפי מעלה עם גפי ה-HIN. על מנת לבצע ניתוח אימונוכימי של חוט השדרה, יש להקריב את בעלי החיים. חשוב מאוד להקפיד תמיד על הנחיות מקומיות לביצוע תקין של ניסויים בבעלי חיים.בהקשר זה, בסקירה פשוטה מאוד זו של עמוד השדרה והרקמות הסובבות אותו, מוצגים המבנים האנטומיים העיקריים. נניח את בעל החיים על צדו הבטני ונתחיל להכין את השרירים מהשק הגבי. לאחר הסרת רקמת השריר, נגיע לעמוד השדרה העוטף את חוט השדרה.לאחר שהבעל חיים הוקרב והועבר לו פירפורפוזציה (ביומיסור) עם תמיסה המכילה פאראפורמליד, ניתן להוציא את חוט השדרה. בעל החיים מונח על שולחן ניתוחים וגפיו מקובעים לצדדים כדי לחשוף את גבו של העכבר. בעל החיים נרטב כדי להשטיח את הפרווה ולהקל על חיתוך העור הבא.לשם כך, יש להשתמש בסכין מנתחים (סקלפל) חדה. יש להקפיד למתוח את העור לשני הצדדים. כדי להקל על החיתוך, יש להכין את שריר הרגל.יש לחתור גם את עורם. לאחר השלמת חיתוך העור, יש להזיזו בעדינות הצידה. לאחר הסרת שרירי הרגל ועצב ה-sciatic באמצעות פינצטה, נמשיך להתקרב לחוט השדרה ונניח את בעל החיים על שולחן ניתוחים חדש.כעת ניתן לזהות בקלות את הגולגולת, הצוואר, השרירים ועמוד השדרה. לאחר זיהוי כל המבנים הללו, ניתן להמשיך בקלות לשלב הבא. יש להסיר את שרירי הצוואר ואת רצועת ה-nu.היזהרו לא לחתוך עמוק מדי ולהוביל לעמוד השדרה. בשלב הבא, השרירים הפרה-ורטברליים (paravertebral) מוסרים לחלוטין כדי לחשוף את עמוד השדרה. כדי לגשת לעמוד השדרה, יש לבצע מספר כריתות.אנו מתחילים מהחלק הצווארי של עמוד השדרה, כולל המפרק האטלנטו-אוקסיפיטלי. כדי לבצע את הלמינקטומיה, עלינו לחתוך את הקשת הוורטברלית כדי שנוכל להסיר את כל הזקיפות מהגוף הוורטברלי. כפי שהוסבר קודם לכן, הלמינקטומיה מתחילה בחיתוך של הקשתות הוורטברליות.לאחר מכן ניתן להסיר את ה-laina. שוב, יש להיזהר לא לפגוע בחוט השדרה שכן יש להסיר רבויות נוספות של ral. השימוש במספריים זוויתיים ובביצוע חתכים במספר קשתות חולייים משני הצדדים בו-זמנית הוא מועיל מאוד.לאחר מכן, משוך את הזקיפים הגביים (dorsal processes) כדי להסיר לחלוטין את למינות החוליה (vertebral lamine) כפי שניתן לראות בתקריב. שים לב כי יש להחדיר את המספריים בזהירות בחלק הלטרלי ביותר של תעלת השדרה. יש להסיר את החלקים הלטרליים שנותרו של עמוד השדרה כדי להקל על הסרתו המלאה של חוט השדרה בשלב מאוחר יותר.נקודות ציון אנטומיות של חוט השדרה הן מה שנקרא הגבששים הצוואריים והמותניים. לאחר סיום הכריתה של חוט השדרה כולו, וודאו שאתם חותכים גם את כל השורשים הבטניים של חוט השדרה ומשחררים אותו מהקרום הקשיח של הקרומים העוטפים. לאחר מכן, חוט השדרה הצווארי נחתך.הסרה של חבל השדרה תחדש מהכיוון הקרניאלי. יש לגעת בחבל השדרה בזהירות רבה כדי לא לפגוע ברקמה, שכן הדבר עלול לגרום להגבלות חמורות בניתוח אימונוכימי מאוחר יותר. הסרת חבל השדרה תימשך הלאה ברמת החזה ותמשיך אל החלק הלומברי.כעת נבצע חיתוך נוסף בצד של ה-cauda equina. כעת אנו יכולים לשחרר אותה לחלוטין. כאן ניתן לראות את חוט השדרה מונח ממש לצד מיקומו המקורי בעמוד ה-RAL.בסופו של דבר, הדגימה מוכנסת לתמיסת קיבוע של Paraform Hyde. כדוגמה קלאסית לאנליזה אימונוהיסטוכימית של חוט השדרה, ניתן להשתמש בנוגדן המזהה choline acetyltransferase כדי לזהות נוירונים מוטוריים בקרן הקדמית של חוט השדרה. כאן ניתן לראות מספר רב של נוירונים מוטוריים בבעל wild type בריא.בניגוד לכך, חיה טרנסגנית עם ALS בשלב סופי מראה מספר קטן בהרבה של נוירונים מוטוריים בקרן הקדמית (Anterior horn). בצפייה במאמר הווידאו זה, הייתם אמורים ללמוד את הבדיקה הקלינית הבסיסית של דגם העכבר SOD1-G93 לטרשת צדית שרירית.שתי בדיקות התנהגות מוטורית הודגמו: מבחן הרוטור ומבחן תליית התיל. בדיקות אלו מספקות אפשרות טובה להערכת תפקוד מוטורי בסיסי. הן קלות לביצוע, רגישות לגילוי ליקויים מוטוריים ויעילות מבחינת זמן.החלק המרכזי של סרטון זה מורכב מהדגמה של טכניקת ההכנה של חוט השדרה. ניתן, כמובן, ליישם טכניקה זו על כל מודל מחלה אחר בעכברים, והיא מהווה שלב חיוני לצורך ניתוח אימונוכימי מאוחר יותר של הפתולוגיה של המחלה בחוט השדרה. תודה שצפיתם.אנו מקווים שמאמר וידאו זה יסייע לכם בניסויים העתידיים שלכם.

clinical-testing-spinal-cord-removal-mouse-model-for-amyotrophic

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

השתלת מבשר עצבית היא אסטרטגיה מבטיח הגנה ו / או החלפת אבוד / נוירונים מתפקדת צוואר הרחם מנוע הסרעפת של פגיעה בחוט השדרה (SCI) לבין הנוירון המוטורי הפרעה, amyotrophic laterals טרשת (ALS). אנו מספקים פרוטוקול למסירה התא בחוט השדרה הצווארי קרן הגחון במודלים של מכרסמים ALS ו SCI.

Intraspinal השתלת תאים עבור מיקוד הורן הגחון צוואר הרחם ב טרשת לרוחב amyotrophic וקורד טראומטית פגיעה בעמוד השדרה

מקור:Pourshafie, N., et al. אספקה מערכתית של מיקרו-רנ"א באמצעות סרוטיפ 9 של נגיף רקומביננטי הקשור לאדנו, לטיפול במחלות עצב-שריר במכרסמים. J. Vis. Exp. (2018).בסרטון זה, ניוון שרירים בעמוד השדרה והבולבר או עכבר המושפע מ-SBMA עובר הזרקת וריד זנב של וקטורים רקומביננטיים AAV (וקטורים הקשורים לאדנו) הנושאים פלסמיד המקודד מיקרו-RNA טיפולי. הווקטור מייצר מיקרו-RNA שנקשר למוטציה AR (קולטן אנדרוגן)-mRNA (חומצה ריבונוקלאית שליח), מה שמפעיל את פירוקו. זה מפחית הצטברות חלבון רעיל ועוזר לשפר את התפקוד...

הזרקת וקטורים רקומביננטיים הקשורים לאדנו במודל עכבר ניוון שרירים בעמוד השדרה והבולברי

פרוטוקול וידאו זה מתאר שיטה רגישה, אמינה ומהירה להערכת הליקויים העצביים-שריריים במודל עכבר טרנסגני של טרשת אמיוטרופית צידית.

שיטת ניקוד מהירה פנוטיפי נוירולוגיות להערכת מחלת התקדמות בSOD1-G93A מודל העכבר של ALS

מאמר זה מתאר שיטה ליצירת פגיעת דחיסת חוט שדרה (SCI) הניתנת לשחזור בעכבר היילוד. המודל מספק פלטפורמה מועילה לחקר מנגנונים של פלסטיות אדפטיבית העומדים בבסיס התאוששות תפקודית ספונטנית.

חוט השדרה עכבר בילוד דגם פגיעה דחיסה

תיאר כאן היא מבוימת, התנהגות ההקרנה התנהגותית שניתן להשתמש בהם כדי המסך עבור תרכובות כי התערוכה יעילות vivo על התנהגויות מוטוריות קוגניטיבית ופונקציונלית מודלים עכבר מהונדס של עמילואידוזיס β ו tauopathy. שיטות אלה מותאמות לתצוגת תרכובות עבור פעילות במשימות זיכרון לטווח קצר ולזיכרון עבודה.

הערכה של חלופה ספונטנית, זיהוי אובייקטים רומנטי ו Clbing איברים מודלים עכבר מהונדס של Amyloid-β ו נוירופתולוגיה טאו

המדד של תסמונת גיאן הוא כלי שימושי כדי להעריך את העכבר דגמי הקשורים ניוון מוחיים אך לעתים קרובות הוא להחיל רק כדי לגרות בעצב הירך ב- hindlimbs. כאן, אנו מתארים שיטה למדידת השריר מורכבים פוטנציאל הפעולה (CMAP) ויוו בשרירי forelimb העכבר innervated על ידי מקלעת הזרוע.

אין ויוו מדידות אלקטרופיזיולוגיות של פוטנציאל הפעולה השריר מורכב מ Forelimbs העכבר דגמים של ניוון מוטורי נוירון

פרוטוקול זה מתאר כיצד ליצור כריתת למינקטוע מדויקת עבור אינדוקציה של פגיעה יציבה בחוט השדרה מסוג transection במודל העכבר, עם נזק משני מינימלי למחקר פגיעה בחוט השדרה.

אינדוקציה של פגיעה מלאה בחוט השדרה מסוג טרנס-פעולה בעכברים

מוצג כאן מכשיר חדשני אוטומטי לפגיעה בחוט השדרה עבור עכברים, שיכול לייצר במדויק מודלים של פגיעה בחוט השדרה בדרגות שונות.

משפיען אוטומטי למודל פגיעה מתמשכת בחוט השדרה בעכברים

הפרוטוקול הנוכחי מתאר פיתוח של מודל עכברי הניתן לשחזור של גליומה של חוט השדרה על ידי הזרקת תאי גידול לחלל הבין חולייתי, ומציע גישה יעילה יותר ופחות פולשנית למחקר ופיתוח טיפולי.

השתלה כירורגית של תאי גידול בחוט השדרה של עכברים

אטקסיות של פוליגלוטמין ספינוצרבלריות נגרמות על ידי התפשטות CAG המייצרת חלבונים המועדים להצטברות. פרוטוקול זה מתאר ייצור וקטורים, מסירה סטריאוטקסית וניתוח הכללות ואובדן סמנים נוירונים, ומספק פלטפורמה מבוקרת לחקר מנגנונים ולהערכת טיפולים ממוקדים למחלות ניווניות עצביות.

פתולוגיה סטריאטלית שנגרמה על ידי לנטריאלי כמודל פרה-קליני של אטקסיות תפינוצרבלריות פוליגלוטמין

מאמר זה מפרט את שיטות המתן התוך-אתקלית לטיפולים ממוקדים במערכת העצבים המרכזית בעכברים בוגרים, תוך התמקדות בדיוק בפרוטוקול ובאפשרות הזרקה חוזרת. הוא כולל ממצאים ממחקר אימות שבו אוליגונוקלאוטידים אנטיסנסיים הפחיתו ביטוי SOD1 מוטנטי בעכברי מודל SOD1-ALS, מה שתומך בתועלת הגישה במחקר פרה-קליני במחלות נוירודגנרטיביות.

הזרקה תוך-ראשית מותנית של SOD1-ASO למטרות מיקוד מדויק במערכת העצבים המרכזית (CNS) ויעילות חיזוי בעכברי ALS בני אדם עם SOD1-G93A

למדו הערכה קלינית והתנהגותית של מודל עכברים לטרשת לרוחב amyotrophic (ALS) באמצעות בדיקות מנוע כמו rotor ו-hanging wire. שיטה זו מאפשרת הכנה של חוט השדרה לניתוח אימונוהיסטולוגי ומספקת כלים חיוניים לחקר מנגנוני המחלה והתקדמותה.

בדיקה קלינית הסרת חוט השדרה במודל של עכברים של טרשת לרוחב amyotrophic (ALS)

גלה סרטונים נוספים