בדיקה קלינית הסרת חוט השדרה במודל של עכברים של טרשת לרוחב amyotrophic (ALS)

במודל של עכברים של טרשת לרוחב amyotrophic (ALS) נבחן קלינית התנהגותית. כתנאי ניתוח immunohistological נלווה להכנת חוט השדרה מתואר בפירוט.

שלום, שמי לאר טרנר. אני פוסט-דוקטורנטית במחלקה לנוירולוגיה באוניברסיטת אינגהם, גרמניה. היי, שמי לין גונדה.

אני סטודנט לרפואה ואני עושה את עבודת התזה שלי במעבדה זו. היום אנו הולכים להראות לכם את הבדיקות הקליניות של SODG 93, מודל טחב של טרשת צידית אטרופית. יתר על כן, נדגים את בדיקת התפקוד המוטורי עם מה שנקרא בדיקת רוטור ובנוסף, בדיקת תפקוד מוטורי נוספת עם אחיזת החוט התלויה על מנת לבצע ניתוח לוגי חיסוני.

לאחר בדיקה תפקודית של עכברי ה-a, הליך הכרחי מורכב מהסרת חוט השדרה, עצב ה-STIC ושריר הגסטרוק. אנו רוצים להראות את ההליך הכירורגי הזה בפירוט ולהציג כמה ממצאים לוגיים חיסוניים למופת בסוף. אוקיי, אבל עכשיו בואו נתחיל קודם כל עם הבדיקות הקליניות.

זהו MOE מסוג פרא הנע בחופשיות שאינו מראה תסמינים קליניים כמו רעד שרירים או פרסית במערכת הסיווג הקלינית שלנו. זה יהיה ציון ארבע. זהו A LS moe טרנסגני.

בשלב מוקדם של המחלה, הוא מציג רעד חמור של גף הין הימני המסווג אותו כציון 3 E. הפרעות ההליכה החמורות מסווג בעל חיים זה כציון שתיים. גרירה של לפחות גפה אחורית אחת מסווגת כציון קליני אחד במבחן חוט תלייה, מוערך חוזק צלעות שרירי גולמי. כל עכבר מונח על חוט CustomMade והופך בזהירות מעל הכפתור המכוסה בקש.

לאחר אימון במשך שלוש פעמים רצופות של לפחות 180 שניות, נמדד זמן ההשהיה לנפילות. לכל עכבר ניתנים עד שלושה ניסיונות להחזיק את המכסה ההפוך למשך 180 שניות לכל היותר, והתקופה הארוכה ביותר נרשמת בהשוואה לעכבר מסוג חוט לבן בצד ימין. העכבר הטרנסגני הפלאק משמאל חלש מאוד ונופל מהמכסה לפני שהוא מגיע למקסימום.

מנגנון מוט הרוטור משמש למדידת קואורדינציה מוטורית, שיווי משקל ויכולת למידה מוטורית. ביצועים טובים דורשים צו גבוה של קואורדינציה מוטורית חושית. הוא מורכב מציר מסתובב הנשלט על ידי מחשב, מונע על ידי מנוע, וחמישה נתיבים לחמישה מ'.

תקלות של העכברים מתגלות אוטומטית על ידי לחץ על צלחת הפלסטיק התחתונה. לאחר אימון במשך שלוש פעמים רצופות של לפחות 180 שניות במהירות קבועה של 15 סיבובים לדקה, נמדד הזמן שבו בעל חיים יכול להישאר על הריקבון המסתובב. כל בעל חיים עובר שלושה ניסויים ונרשם זמן ההשהיה הארוך ביותר ללא נפילה.

הטחב הפראי הבריא בצד שמאל רץ ללא קושי על מוט הרוטור. לעומת זאת, ל-a s mo הטרנסגני בצד ימין יש בעיות חמורות אפילו להישאר על מוט הרוטור ומחליק לאחר זמן מה שנצפה מאחור. אתה רואה את קשיי הריצה החמורים של העכבר האחורי השמאלי.

בהשוואה לעכבר הברז הבריא, הוא אינו מסוגל לעמוד בקצב של מהירות מוט הרוטור ואינו יכול לדחוף כלפי מעלה עם גפיים HIN. על מנת לבצע ניתוח אימונוכימי של חוט השדרה, יש להקריב את בעלי החיים. חשוב מאוד להקפיד תמיד על ההנחיות המקומיות לביצוע נכון של ניסויים בבעלי חיים.

בהקשר זה, בסקירה פשוטה מאוד זו של עמוד החוליה והרקמות הסובבות אותו, מתוארים המבנים האנטומיים העיקריים. נניח את החיה על צד הגחון שלה ונתחיל להכין את השרירים מהשקית הגבית. לאחר הסרת רקמת השריר, ניגש לעמוד החוליה התוחם את חוט השדרה.

לאחר הקרבת החיה והחדרה בתמיסה המכילה גובה פרפורם, ניתן להסיר את חוט השדרה. החיה מונחת על שולחן ניתוחים והגפיים המלאות מקובעות בצדדים ומסדרים לחשוף את החלק האחורי של העכבר. החיה נרטבת כדי לשטח את מעיל השיער ולהקל על חתך העור הבא.

לשם כך משתמשים באזמל חד. הקפידו למתוח את העור לשני הצדדים. כדי להקל על חיתוך שריר הרגליים יכין.

יש לחתוך גם את עורם. לאחר השלמת חתך העור, הוא נמשך בעדינות הצידה. עם זוג פינצטה שהסירו את שרירי הרגליים ואת העצב הסיאטי, אנו ממשיכים להתקרב לחוט השדרה ומניחים את החיה על שולחן ניתוחים חדש.

כעת קל לזהות את צוואר הגולגולת, השרירים ועמוד השדרה. לאחר שזיהיתי את כל המבנים הללו, קל להמשיך לשלב הבא. יש להסיר את שרירי הצוואר והרצועה הטבעית.

היזהר לא לחתוך עמוק מדי ולהוביל את עמוד השדרה בשלב הבא, השרירים הפרה-חולייתיים מוסרים לחלוטין כדי לחשוף את עמוד השדרה החוליות. על מנת לגשת לעמוד השדרה, יש לבצע מספר אקטומיות.

אנו מתחילים מהחלק הצווארי של עמוד החוליות, כולל המפרק העורפי האטלנטי. כדי לבצע את כריתת הלמינקטומיה, עלינו לחתוך את קשת החוליות בכדי שנוכל להסיר את כל תהליכי החוליות מגוף החוליות. כפי שהוסבר קודם, כריתת הלמינקטומיה מתחילה בחיתוך קשתות החוליות.

ואז ניתן למשוך את הליינה. שוב, הקפד לא לפגוע בחוט השדרה מכיוון שיש להסיר הרבה יותר ראלים. זה די מועיל להשתמש במספריים זוויתיים ולכלול מספר קשתות חוליות משני הצדדים בכל פעם.

לאחר מכן משוך את תהליכי הגב כדי להסיר לחלוטין את הלאמין החולייתי ואת התקריב. אתם רואים שצריך להכניס את זוג המספריים בזהירות לרוחב בצד תעלת עמוד השדרה. יש להסיר חלקים רוחביים שנותרו בעמוד השדרה כדי להקל על הסרה מלאה מאוחר יותר של חוט השדרה.

נקודת ציון אנטומית של חוט השדרה היא מה שנקרא esencia צוואר הרחם והמותני. לאחר שסיימתם את האקטומיות של חוט השדרה כולו, וודאו כי אתם עוברים גם את כל שורשי הגחון של חוט השדרה ומשחררים אותו מהחומר הדור של קרומי המוח. לאחר מכן, חוט השדרה הצווארי נחתך.

גולגולת והסרתו מתחילה שוב. גע בחוט השדרה בזהירות רבה כדי לא לפגוע ברקמה זו, מכיוון שהדבר עלול לגרום למגבלות חמורות לניתוח אימונוכימי מאוחר יותר. הסרת חוט השדרה נמשכת עוד ברמת בית החזה וממשיכה לחלק המותני.

לבסוף הוא נחתך שוב, הפעם בצד של סוסי החבל. עכשיו אנחנו יכולים לשחרר אותו לחלוטין. כאן אתם רואים את חוט השדרה ממוקם ממש ליד מיקומו המקורי בעמודת ה-RAL.

בסופו של דבר, הוא ממוקם בתמיסת קיבוע פוסט של Paraform Hyde. כדוגמה קלאסית לניתוח אימונוהיסטוכימי של חוט השדרה, ניתן ליישם נוגדן המזהה כולין, אצטיל טרנספראז כדי לזהות נוירונים מוטוריים בקרן הקדמית של חוט השדרה. כאן אתם רואים מספר רב של נוירונים מוטוריים בחיית בר בריאה.

לעומת זאת, חיית ה-LS הטרנסגנית בשלב הסופי מציגה מספר קטן בהרבה של נוירונים מוטוריים בקרן הקדמית. צפייה במאמר וידאו זה, היית צריך ללמוד את הבדיקה הקלינית הבסיסית של SODG 93. מודל עכבר של טרשת צידית אטרופית.

הודגמו שני מבחני התנהגות מוטורית: מבחן הרוטור ומבחן החוט התלוי. הם מספקים אפשרות טובה להעריך תפקוד מוטורי בסיסי. הם קלים לביצוע, רגישים באיתור גירעון מוטורי וחסכוניים בזמן.

החלק העיקרי של סרטון זה מורכב מהדגמה של טכניקת ההכנה של חוט השדרה. ניתן כמובן ליישם זאת על כל מודל אחר של מחלת עכברים והוא צעד חיוני לניתוח אימונוכימי מאוחר יותר של פתולוגיה של מחלה בחוט השדרה. תודה שצפית.

אנו מקווים שמאמר וידאו זה יעזור לניסויים העתידיים שלך.