הערכה תפקודית של תנועתיות מעיים ודלקת דופן מעי במכרסמים: ניתוח בדגם סטנדרטי של מניפולצית מעיים

המטרה הכוללת של הניסויים הבאים היא לבצע מניפולציה במעי כדי לחקור את ההתפתחות והפירוק של האילאוס לאחר הניתוח במודל מכרסמים, זה מושג על ידי מניפולציה סטנדרטית של המעי הדק בין שני אפליקטורים כותנה לחים. לאחר מכן, מנותחים מעבר במערכת העיכול והמעי הגס כדי למדוד תנועתיות לאחר הניתוח. לאחר מכן מבוצעת אנליזה היסטוכימית ותרבית איברים של שרירי המעי הדק, החיצוני או ME כדי לבחון את רמות הדלקת.

מתקבלות תוצאות המראות חדירה חזקה של גרנולוציטים נויטרופילים ל-me וייצור עודף של תחמוצת החנקן בתרביות me וכתוצאה מכך עיכובים בזמני המעבר במערכת העיכול ובמעי הגס. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח הנוגעות להתפתחות ופתרון של איליו לאחר הניתוח, ובחקירת טיפול מונע או טיפול פוטנציאלי, מדגים את ההליך מריו לואיסון, טכנאי מהמעבדה שלנו לאחר מתן 0.8 עד 1% איזופלורן בחמצן לעכבר זכר. הניחו את החיה במצב שכיבה והשתמשו בנייר דבק כדי לתקן את הגפיים.

השתמש בגירוי כאב קל כדי לבדוק הרגעה עמוקה. לאחר מכן בצע לפרוטומיה חציונית באורך שני סנטימטרים. לאחר מכן, הכניסו שני מחזירים סטריליים כדי לשמור על הבטן פתוחה והעבירו בזהירות את המעי הדק שמאלה והניחו אותו על גזה כותנה רטובה.

בעזרת שני אפליקטורים מכותנה לחה, פנו את תכולת הלומינל של כל המעי הדק על ידי גלגול בו זמנית של האפליקטורים מהפורי אל הצקום. החזירו את המעי לחלל הצפק מבלי להתפתל כדי למנוע איסכמיה או חסימה מכנית או, והשתמשו בשתי שכבות של תפרים רציפים של 5.0 פוליאמיד שאינם נספגים. סגור את חתך הבטן.

הניחו את החיה מתחת למנורת חימום ועקבו אחריה עד שתתאושש מההרדמה. לאחר מכן החזירו את העכבר לכלוב שלו ואפשרו לו גישה למזון ולמים. למחרת.

לאחר הרדמה מלאה של העכבר, האריכו בזהירות את ראשו והשתמשו במלקחיים קהים כדי לשלוף את הלשון, מלאו מזרק של מיליליטר אחד בלפחות 100 מיקרוליטר פלואורסצאין המסומן דקסטרן. חבר אותו לצנתר עורקי והכנס בזהירות את הקטטר כצינור קיבה לקיבה. הזריק במהירות 100 מיקרוליטר של דקסטרן FITC והסר את הקטטר.

אפשר לבעל החיים לחזור להכרה והמתן 90 דקות. לאחר 90 הדקות, המתת חסד של העכבר והסר את כל מערכת העיכול מהקיבה ועד פי הטבעת. הניחו את המעי על כרית פוליסטירן והימנעו ממתיחה.

לאחר מכן, מדוד את כל אורך המעי הדק והמעי הגס. השתמש בקנולות כדי להצמיד את המעי לכרית הפוליסטירן. חלקו את המעי הדק ל-10 מקטעים שווים ואת המעי הגס לשלושה מקטעים שווים.

לאחר מעבר המעי במצבי הצעדה, שטפו את החלקים פעם אחת עם מיליליטר אחד של הלי קרבס, חיץ ביקרבונט או KHB. העבירו את החלקים לשני צינורות מיליליטר רצופים ומערבולת צנטריפוגה נמרצת של הבדיקות. לאחר מכן העבירו את הסופרנט לצינורות נקיים וממוספרים של 1.5 מיליליטר.

יש לאחסן בארבע מעלות צלזיוס בחושך עד לניתוח. הפיפטה הבאה. שכפל מאה מיקרוליטר של כל סופרנטנט לתוך צלחת באר שחורה של 96 והשתמש בקורא פלואורסצנטי כדי לקרוא את הצלחת כדי לבדוק את זמן המעבר של המעי הגס לאחר הרדמה שבועית של החיה.

בדוק היטב את סבלנות המעי הגס על ידי החדרת פיסטולה. בדוק דרך פי הטבעת לתוך המעי הגס באמצעות הבדיקה. הכנס כדור זכוכית של שני מילימטרים, שלושה סנטימטרים לתוך המעי הגס, והסר את הבדיקה.

הפעל מיד טיימר. הנח את העכבר בכלוב שקוף ופקח עליו למשך הזמן שלוקח לכדור להפריש. לניתוח היסטוכימי של דגימות אמצע טואל.

לאחר חיתוך מקטעי רקמה מהמעי וטבילתם ב-KHB קר בכלי מלא סיליקון, השתמש במחטי חרקים כדי להצמיד את המזנטריה למנה. חותכים את הקטעים לאורך הגבול המזנטרי שלו ומותחים את הרקמה ל -120% מאורכה ורוחבה. אבטח את הרקמה בעזרת מחטים החל מהמזנטריה. מכנית.

הפרד את השרירים החיצוניים או אותי מרירית הטוניקה. תקן והכתים את הדגימות על פי החלק הכתוב של פרוטוקול זה לתרבית. האני.

24 שעות לאחר הליך מניפולציה במעי, כרתו את כל המעי הדק והניחו אותו בקור, KHB המכיל פניצילין, G וסטרפטומיצין. חותכים את המעיים לאורכים של שלושה סנטימטרים ומצמידים כל קטע כלפי מטה על צלחת זכוכית מצופה סיליקון בעזרת מספריים עדינים. הסר את המזנטריה והחלק את המעי על מחט מהנהנת בעזרת מלקחיים חדים.

חתכו בעדינות את האותי והשתמשו באפליקטור כותנה לח. הפשיטו אותו מהתת-רירית והניחו אותו בקור, KHB פלוס Ps.לאחר מכן, חתכו את רצועות ה-ME לחתיכות באורך של שניים עד ארבעה מילימטרים ודגרו אותו ב-KHB קר כקרח בתוספת PS למשך 30 דקות. שטיפת הדגימה מספר פעמים.

לאחר מכן העבירו כ-50 עד 60 מיליגרם ממני לצלחת סטרילית של 24 בארות המכילה 500 מיקרוליטר DMEM. דגרו על הרקמה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% CO2 למשך 24 שעות. אוספים את הסופרנטנט והצנטריפוגה ב-1000 RCF למשך חמש דקות.

לאחר מכן הצמד, הקפיאו אותו בחנקן נוזלי למדידות ציטוקינים או תחמוצת החנקן. לבסוף, בעזרת כתם נייר נקי, יבש את רקמת השריר למשך 30 שניות ולאחר מכן שקול אותה. הפרמטר החשוב ביותר להערכת חומרת האילאוס לאחר הניתוח הוא בדיקת מעבר במערכת העיכול או GIT in vivo.

איור זה מדגים התפלגות אופיינית של דקסטרן FITC לאורך מערכת העיכול בבקרות לא מטופלות ובעכברים שעברו מניפולציה במעי 24 שעות לאחר הניתוח. כפי שמוצג כאן, בעלי חיים שעברו ניתוח דמה הראו GIT תקין עם מרכז גיאומטרי מחושב בצקום. בעוד ש-Im הוביל לעיכוב משמעותי ב-GIT בג'ג'ונום הפרוקסימלי, בניתוח תנועתיות המעי הגס באמצעות כדור זכוכית, עכברים שעברו ניתוח דמה הפרישו את הכדור תוך 48 עד 200 שניות, ו-Im האריך את זמן ההפרשה ל-470 עד 775 שניות כדי למדוד דלקת.

בתוך ME רמות הלויקוציטים נותחו באמצעות כימיה היסטו או אימונוהיסטוכימיה כפי שניתן לראות כאן. מעט נויטרופילים פולימורפו-גרעיניים נצפו בעכברי ביקורת, עם זאת, אני חושב שהמעי הדק הוביל לחדירה החזקה שלהם. מתווכים דלקתיים רבים המשוחררים מהתאים קשים לזיהוי ברקמה.

תרביות איברים של ליזטים מאפשרות זיהוי של סמנים דלקתיים בתרבית. Supernatant, מתווך מייצג ב-POI הוא תחמוצת החנקן, או לא, שהוא נוירוטרנסמיטר מעכב עיקרי במערכת העיכול. הנתון הזה מראה שלא ניתן היה לזהות אצלי שום דבר.

נצפו תרבית איברים, סופרנטנטים של בקרה, בעלי חיים בעכברים המופעלים בדמה, רמות nno בסיסיות. עם זאת, תרביות של עכברים שעברו מניפולציה במעי מייצרות הרבה יותר nno לאחר דגירה של 24 שעות לאחר שליטה. טכניקה זו של מניפולציה במעי יכולה להיעשות תוך 15 דקות אם היא מבוצעת כראוי.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לגרום לאילאוס לאחר הניתוח בעכברים וכיצד לנתח את חומרתו.