Name: בידוד של תאים מסוג CD4 + T מ בלוטות לימפה עכבר באמצעות טיהור Miltenyi MACS (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-11-01T00:34:55.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: למדו בידוד תאי CD4+ T מבלוטות לימפה עכבר באמצעות ערכת Miltenyi MACS. שיטת בחירה שלילית זו מספקת טוהר של 96% ומאפשרת מחקרים אימונולוגיים מתקדמים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

אנו מבקשים להודות רבקה Paquett להכנת חיץ MACS.

אנא קרא ופעל על פי פרוטוקול כלול בערכה Miltenyi או באופן מקוון <a href="http://www.miltenyibiotec.com/">http://www.miltenyibiotec.com/</a> .

<ol><li>Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+repertoire+scanning+is+promoted+by+dynamic+dendritic+cell+behavior+and+random+T+cell+motility+in+the+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 998-1003 (2004).</li>
<li>Matheu, M. P., Deane, J. A., Parker, I., Fruman, D. A., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Class+IA+phosphoinositide+3-kinase+modulates+basal+lymphocyte+motility+in+the+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Class IA phosphoinositide 3-kinase modulates basal lymphocyte motility in the lymph node.</a> J Immunol. 179, 2261-2269 (2007).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי אינטרסים להצהיר עליהם.

בידוד של תאים ממקור העיקרית היא צעד הכרחי פרוטוקולים מורכבים הרבה יותר. Miltenyi מציעה ערכות לבודד תאים ואורגניזמים מספר כולל בני אדם, שאינם בני אדם וקופים, חולדות, כפי המתואר כאן, בעכברים. הפרדה מגנטית חרוז מבוססי תאים מאפשר בחירה או חיובי (או דלדול התא), כמו גם סלקציה שלילית. הנה, אנחנו מדגימים סלקציה שלילית של CD4 יש נגעה או Na + עוזר ותאי T. שימוש זה הפרוטוקול הסטנדרטי שאנחנו בדרך כלל לטהר את התאים CD4 ≥ טהור 96% + / CD3 +. למרות שאנו לא להפגין ניתוח FACS וידאו בפרוטוקול זה, מומלץ מאוד לבדוק את טו...

<table><tbody><tr><td>MACS Buffer</td><td>ריאגנט</td><td>אף אחד</td><td>אף אחד</td><td>הכן לפי הנחיות Miltenyi.</td></tr><tr><td>CD4+ T cell Isolation Kit: Untouched Isolation</td><td>ריאגנט</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-860</td><td>לשימוש עם מערכת Miltenyi.</td></tr><tr><td>מלח פוספט רב-ערכי סטרילי (PBS)</td><td>ריאגנט</td><td></td><td></td><td>לשימוש בהכנת MACS buffer.</td></tr><tr><td>צלחת תרבית 35mm ללא טיפול TC של Corning</td><td>אחר</td><td>Corning</td><td>430588</td><td>משמשת להכנת תרחיף תאים בודדים.</td></tr><tr><td>מסנן תאים 70 מיקרון</td><td>כלי</td><td>BD Biosciences</td><td>352350</td><td>משמש להכנת תרחיף תאים בודדים.</td></tr><tr><td>מזרק 6 mL</td><td>כלי</td><td>Tyco Healthcare, Covidien</td><td>8881516051</td><td>משמש להכנת תרחיף תאים בודדים.</td></tr><tr><td>10x Dulbecco&amp;rsquo;s Phosphate Buffered Saline (DPBS)</td><td>ריאגנט</td><td>Invitrogen</td><td>14200-075</td><td>לשימוש בליזיס של RBC.</td></tr><tr><td>מים סטריליים</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W4502</td><td>לשימוש בליזיס של RBC.</td></tr></tbody></table>

בידוד של תאים מסוג cd4 + t מ בלוטות לימפה עכבר באמצעות טיהור miltenyi macs

Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification

בידוד של תאים ממקור העיקרית היא צעד הכרחי פרוטוקולים מורכבים הרבה יותר. Miltenyi מציעה ערכות לבודד תאים ואורגניזמים מספר כולל בני אדם, שאינם בני אדם וקופים, חולדות, כפי המתואר כאן, בעכברים. הפרדה מגנטית חרוז מבוססי תאים מאפשר בחירה או חיובי (או דלדול התא), כמו גם סלקציה שלילית. הנה, אנחנו מדגימים סלקציה שלילית של CD4 יש נגעה או Na + עוזר ותאי T. שימוש זה הפרוטוקול הסטנדרטי שאנחנו בדרך כלל לטהר את התאים CD4 ≥ טהור 96% + / CD3 +. פרוטוקול זה נמצא בשימוש בשילוב עם Dissection הפרוטוקול 2-Photon הדמיה של בלוטות לימפה הפריפריה עכברים שפורסם בגיליון 7 של יופיטר, לטיהור בתאי T סוגי תאים אחרים adoptively להעביר למטרות הדמיה. למרות שאנו לא להפגין ניתוח FACS וידאו בפרוטוקול זה, מומלץ מאוד לבדוק את טוהר הכולל של תאים בודדים באמצעות נוגדנים מתאימים באמצעות FACS. בנוסף, אנחנו מדגימים את השיטה הלא סטרילית של בידוד תא T. אם התאים סטרילי נחוצות עבור יישום מסוים של משתמש הקצה שלך, הקפד לעשות את כל ההליכים הפגינו למכסה המנוע בתרבית רקמה בתנאים סטריליים סטנדרטי. אנו מודים לך על צפייה ובהצלחה עם הניסויים שלך!

בידוד של לימפוציטים באמצעות MACS Miltenyi ערכת מהווה דרך אמינה לטהר תאים שלמים homogenates רקמת הלימפה. תאים מטוהרים באמצעות מערכת Miltenyi הם בדרך כלל ≥ 96% טהור. הנה, אנחנו מדגימים את הצעדים שננקטו כדי לבודד תאים מסוג CD4 + T, אחת ערכות רבים המוצעים על ידי Miltenyi.

בידוד של תאים מסוג CD4 + T מ בלוטות לימפה עכבר באמצעות טיהור Miltenyi MACS

בידוד תאים מהמקור הראשוני הוא שלב הכרחי בפרוטוקולים מורכבים רבים יותר. חברת Miltenyi מציעה ערכות לבידוד תאים ממספר...

זהו מגנט Max MIDI. כתוב עליו,זהירות שדות מגנטיים חזקים ביותר. שלום, אני מלאני מתיו מהמעבדה של מייק קולינס באוניברסיטת קליפורניה אירביין, המחלקה לפיזיולוגיה וביופיזיקה.היום נדגים הכנה של תאי T חיוביים ל-CD4 באמצעות סלקציה שלילית, תוך שימוש בערכות של Milton Biotechnology. כאן לפנינו ה-minimax וה-minimax magnets; ה-minimax משמש להפרדות גדולות יותר. ניתן להעביר עד 10⁹ תאים דרך עמודה המתאימה ל-minimax, בעוד שה-minimax magnets משמשים לנפחים קטנים בהרבה של תאים.לפיכך, בהתאם לשאלה אם אתם מבצעים הפרדה חיובית או שלילית, תסמנו את התאים באמצעות הנוגדן המתאים. על הנוגדים ישנם חלקיקים מגנטיים שייקשרו למגנט. במקרה של ברירה שלילית, התאים שאתם מעוניינים בהם יעברו דרך העמודה ותוכלו לאסוף את תמיסת השטיפה (eluent), שתכיל את התאים המבוקשים.עליי לציין שהטכניקות שאני מציג לכם הלילה אינן סטריליות. לכן, אם ברצונכם להשתמש בתאים אלו לתרבית תאים, עליכם לבצע הכל במכסה של תרביות רקמה עם מכשירים סטריליים. כך שעל אף שאני מציג לכם הכנה של תאי T חיוביים ל-CD4, רבות מהטכניקות הללו ישימות לטיהור של סוגי תאים אחרים באמצעות ערכות הביוטכנולוגיה של Miltenyi.בשלב זה, הסרתי את קשרי הלימפה מהעכבר, ואני מדגים לכם כיצד לעשות זאת בפירוט בגיליון שבעה של JoVE: הכנת קשרי לימפה עבור דימות בדו-פוטון. כעת אני הולך ל nghiס את קשרי הל

isolation-cd4-t-cells-from-mouse-lymph-nodes-using-miltenyi-macs

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

הכנה מטוהרים של ריאות תאים דנדריטים עכבר מתואר. דגש ספציפי ניתנת הבידוד של תת קונבנציונאלי תאים דנדריטים.

בידוד של ריאות תאים דנדריטים עכבר

סרטון זה מתאר העשרת תאי T מטחול העכבר על ידי ברירה שלילית באמצעות מפריד מגנטי. הטכניקה כוללת מיקוד התאים האחרים בדגימה לדלדול באמצעות נוגדנים או ליגנדים המכוונים נגד אנטיגנים ספציפיים של פני התא.

העשרת תאי T: טכניקה לבידוד תאי T מאוכלוסיית תאים מעורבת על ידי הפרדה מגנטית

סרטון זה מדגים פרוטוקול לבידוד מבוסס תיוג מגנטי של אוכלוסייה בריכוז נמוך של תאי T CD4+Vδ1+γδ מתאי דם חד-גרעיניים היקפיים אנושיים (PBMCs). באמצעות שילוב של נוגדנים מצומדים נגד Vδ1 FITC, מיקרו-חרוזים מגנטיים נגד FITC וחרוזים על-פאראמגנטיים מצופים נוגדנים נגד CD4, תאי T CD4+Vδ1+ יכולים להיות מטוהרים בהצלחה מאוכלוסיית PBMC.

בידוד סלקטיבי של תאי T CD4+ Vδ1+ γδ מתאי דם מונוגרעיניים היקפיים אנושיים

עם פונקציות מפעיל להבדיל מתת תא T אחר, תאי Th17 היו מעורבים באופן מרכזי באוטואימוניות דלקתיות. במבחנה פרוטוקול בידול Th17 זו מספק אמצעי כדי לקבוע אם לימפוציטים מסוג CD4 + T נאיביים יכולים להתמיין לתאי Th17, ולבחון את תפקידם באוטואימוניות ותגובת מארח נוסף.

בידוד ובידול של Th17 הנאיביים T מסוג CD4 לימפוציטים

פרוטוקול זה מפרט שיטה לבודד תאי המציגים אנטיגנים מבלוטת התימוס אנושית דרך שלבים שונים של עיכול אנזימטי של הרקמה ואחריו צנטריפוגה צפיפות של ההשעיה התא בודדת ומיון לבסוף מגנטי ו / או FACS של אוכלוסיות התאים של עניין.

בידוד של תאי מיאלואידית דנדריטים ותאי האפיתל מקורנית האדם

תאי T נאיביים CD4+ מקוטבים לתת-קבוצות שונות בהתאם לסביבה בזמן ההפעלה.  ניתן להשיג את ההתמיינות של תאי CD4+ T נאיביים לתת-קבוצות אפקטורים שונות במבחנה באמצעות הוספת גירויים של קולטני תאי T ואותות ציטוקינים ספציפיים.

העכבר נאיבי CD4<sup&gt; +</supו&gt; בידוד תא T<em&gt; במבחנה</em&gt; בידול לתוך תת תא T

תת-קבוצות תאים דנדריטיות נפרדות קיימות כאוכלוסיות נדירות באיברי לימפה, ולכן הן מאתגרות לבידוד במספרים ובטוהר מספיקים לניסויים אימונולוגיים. כאן אנו מתארים שיטת יעילות גבוהה ותפוקה גבוהה לבידוד של כל תת-הקבוצות העיקריות הידועות כיום של תאים דנדריטיים של טחול עכבר.

שיטת תשואה יעילה גבוהה עבור בידוד של תת תא העכבר דנדריטים

כאן נתאר פרוטוקול מפורט על הבידוד של לימפוציטים האתרים אינדוקטיבית כולל בלוטות לימפה mesenteric המנקזים ותיקונים של פייה רקמת הלימפה הקשורים הבטן, ואת האתרים אפקטור כולל את פרופריה. מוסקולריס ו אפיתל המעי של המערכת החיסונית קטנים במעיים.

לימפוציטים בידוד מן העכבר קטן המעי המערכת החיסונית

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לבודד תאים דנדריטים טחולים מאתר על ידי מיון מגנטי תא עוקבות המאמצת העברת לתוך תמים עכברים. המודל של תאים דנדריטים מופעל מלח גבוהה נבחר להסביר את ההליכים צעד אחר צעד של cytometry זרימה והעברת המאמצת.

בידוד והעברה המאמצת של מלח גבוהה מטופלים אנטיגן תאים דנדריטים

שני הפוטונים הדמיה חשף תנועתיות הלימפוציטים אינטראקציות הסלולר בתוך הצומת לימפה בתנאי הבסיס, במהלך תגובה חיסונית 1. הנה, אנחנו מדגימים העברת המאמצת של תאים T, בידוד של בלוטות הלימפה, ועל תנועתיות הדמיה של CD4 + T תאים בתוך הצומת לימפה explanted.

Dissection ו 2-Photon הדמיה של בלוטות לימפה הפריפריה עכברים

למדו בידוד תאי CD4+ T מבלוטות לימפה עכבר באמצעות ערכת Miltenyi MACS. שיטת בחירה שלילית זו מספקת טוהר של 96% ומאפשרת מחקרים אימונולוגיים מתקדמים.

בידוד של תאים מסוג CD4 + T מ בלוטות לימפה עכבר באמצעות טיהור Miltenyi MACS

גלה סרטונים נוספים