שימוש בעכבר האנושי של BLT כמודל לתאי גזע מבוסס Gene Therapy גידול

הדור והאפיון של תאי T ספציפיים סרטניים באמצעות עכבריים מתואר כאן. רקמה הרתי אדם ותאי גזע hematopoietic מהונדס גנטי אדם מושתלת לעכברי מדוכאי חיסון. התוצאה הוא הכינון מחדש של מערכת חיסון אנושית מהונדסת מאפשרת בבדיקת vivo של תגובות חיסוניות אנטי סרטניות.

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא לייצר עכברים הנושאים מערכת חיסון אנושית מהונדסת. זה מושג תחילה על ידי הכנת העכבר לניתוח ולאחר מכן העמסת הטרוקר בחתיכת תימוס בשלב השני. מטריג'ל מעורבב עם תאים שליליים CD 34 וחיוביים ל-CD 34, ולאחר מכן מוסיפים את התערובת לטרוקר.

לאחר מכן, מבני המטריג'ל מושתלים מתחת לקפסולת הכליה. בסופו של דבר, ניתן לנטר את דחיית גידולי המטרה על ידי תאי CD 8 T מהונדסים גנטית על ידי הדמיה חיה של חיות מחמד ומדידות גידול פיזיות. היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות מת' קיימות כמו מודלים של נוירונים מלאים, הוא ששיטה זו מאפשרת לחקור התפתחות תאי גזע אנושיים מהונדסים גנטית בתוך התימוס האנושי ולאחר מכן בדיקת יעילות in vivo של שושלות נגזרות המדגימות את ההליך יהיו שלושה טכנאים מהמעבדות שלנו, גרגורי בריסטול, ברנרד לוין, ושון קים.

בתרשים סכמטי זה, מתואר מודל ה-BLT המותאם ששימש במחקרים אלה ליצירת עכברים כימריים הנושאים מארט, תאי T ספציפיים אחד. השתל משוחזר מתאי CD 34 מתמרים ולא מתמרים שבודדו מכבד עוברי אוטולוגי. חלק קטן מהתאים המומרים מוקפא ומוזרק לעכברים המוקרנים ארבעה עד שישה שבועות לאחר מכן.

בסרטון זה, השתלת המבנה החי מודגמת לאחר שבעלי החיים הפכו איטיים מההרדמה. התחל בגילוח הצד השמאלי של כל עכבר מהמותן ועד הכתף בין מרכז הגב לבטן. לאחר רישום המשקל של כל בעל חיים, אגרוף את אוזניהם למספור ותת עורית, הזריק 0.3 מיליליטר קרפרופן לכל אחת מהכתפיים שלהם.

לאחר מכן הניחו את העכברים על צדם הימני עם הפנים שמאלה. כעת שטפו את הטרוקר של מחט שתל סרטן בגודל 16 עם קצה קובץ עגול עם PBS. בעזרת זוג מלקחיים לאף מחט, הוסף חתיכת תימוס לצלחת PBS ולאחר מכן החזק את הטרוקר אופקי עם המוט.

ממש בתוך הקצה שואבים את הרקמה. החלקת הטרוקר מתחת לקפסולת הכליה והזרקת הרקמה היא אחד ההיבטים המאתגרים ביותר בהליך זה. לאחר מכן, בקש עוזר.

השתמש בפיפטה תזוזה חיובית של eend orph כדי לערבב חמישה מיקרוליטרים של מטריג'ל קר לתוך צינור אחד של תאים תוך ערבוב עדין. שמירה על הטרוקר אופקי. משוך לאט לאחור את המוט בזמן שהעוזר מפזר את ג'ל המטרי.

מערבבים לתוך הטרוקר עבור כל עכבר. ראשית, ספוג את העור החשוף של החיה עם בטדין ולאחר מכן נגב אותו עם מגבון איזופרופנול. פעמיים קובעים את הכתם הכהה ביותר מתחת לעור, המציין את מיקום הטחול.

הכליה נמצאת כחמישה מילימטר גב לטחול באמצעות מלקחיים קהים כדי להרים את העור מעל הכליה. בצע חתך באורך של כ -15 מילימטרים בעור במקביל לטחול. בצע חתך דומה בשכבת שריר הצפק שמתחת.

אצל גברים, הכליה צריכה להיות גלויה ישירות. כל שעליך לעשות הוא ללחוץ על הבטן כדי להוציא אותה החוצה. שמירה על לחץ על הבטן ביד שמאל כדי לשמור על הכליה חשופה אצל נקבות, השתמש תחילה בהמוסטט כדי להרים את השחלה ולאחר מכן גרור החוצה את הכליה כדי לעזור לשמור על האיבר מחוץ לגוף.

תלוש חור קטן בקצה האחורי של קפסולת הכליה ואז החלק את הטרוקר לתוך החור הזה ולאורך הכליה עד שפתח הטרוקר מכוסה לחלוטין על ידי קפסולת הכליה. לאחר מכן בעזרת האצבע הקטנה של יד ימין, הזריקו את הרקמה. כעת השתמש בהמוסטט הסגור כדי לדחוף בעדינות את הכליה בחזרה למקומה.

קשרו תפר אחד בצפק עם קשת כפולה, סחטו את העור כלפי מעלה כמו ארנק, ואז הכניסו אותו לשני קליפסים לפצעים. לבסוף, הניחו טיפה של PBS על כל עין והניחו את העכבר על צדו בכלוב על גבי מצעים כלשהם. אחרי שתשתלו את כל העכברים באותו אופן, ודאו שהחיות חזרו לשכב על הבטן לפני שעזבו אותן.

איור ראשון זה מציג תמונה מייצגת של השתל החי THI בעכברים מואנשים. באיור זה מודגמת ההתפתחות התקינה של רקמת התימוס והתפלגות הרקמה הפיזיולוגית של CD 4 ו-CD 8 חיובי T אנושי. לאחר הבנייה מחדש, בעלי החיים נושאים מערכת חיסון אנושית עם התפלגות תקינה של תאי T חיוביים CD ארבע ו-CD שמונה.

כאן מוצגת תמונה מייצגת של עכבר הנושא גידול מלנומה. האזורים האפורים מציינים את תמונת סריקת ה-CT. האזורים הצבעוניים מצביעים על הפעילות המטבולית של הגידול כפי שזוהתה בסריקת ה-PET.

סריקת ה-CT לבדה בניסוי זה הצביעה על מסת גידול גדולה באזור שצוין על ידי העיגול הלבן. עם זאת, כפי שממחישה הדמיית PET in vivo, אזור זה מורכב בעיקר מרקמה נמקית וצלקת, מה שמדגיש את התועלת של הדמיית PET כדרך רגישה ומדויקת יותר להעריך רגרסיה ופינוי של הגידול. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע בדיקות אחרות כגון תאי T, פנוטיפ והפעלה ex vivo כדי לענות על שאלות הרלוונטיות לתפקוד תאי T.