Name: שינויים בפרופיל זרחון קולטן טירוזין קינאז באמצעות מערכי נוגדנים - פרסומת (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-09-27T11:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 16 s
Description: למדו לנתח שינויים בזרחון קולטני טירוזין קינאז בקווי תאים סרטניים באמצעות מערכי Human Phospho-RTK. שיטה זו מאפשרת מעקב בו-זמני אחר פעילות RTK והערכת יעילות מעכבי אותות ממוקדים במחקר סרטן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> עבודה זו מומנה על ידי R &amp; D Systems, Inc </p>

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> אדם phospho-RTK הוא חלופה חסכונית ומהירה לשיטות מסורתיות כגון immunoprecipitation (IP) המערבי לשינויי הקרנה בזירחון RTK. באמצעות שיטה זו, הרמות היחסיות של 42-RTKs phospho הוקרנו בו זמנית באמצעות מדגם יחיד של מד&quot;א-MB-453 או lysate התא קאטו III. בנוסף, בדיקת מערך זה נדרשה 2.5 שעות של ידות בזמן, מה שהופך שיטה זו הרבה יותר זמן יעיל יותר מאשר ביצוע מערבונים-IP מרובים. על ידי העסקת שיטת זיהוי chemiluminescence, אין ציוד מיוחד מעבר למה שמשמש בדרך כלל כדי לאסוף נתונים מערביים היה נדרש. מערכים הם רגישים ויכולים לשמש להשוואת שינויים בזירחון שנגרמו על ידי שני יגנד וטיפול מעכב. שיטה זו גם מאפשרת הערכה של הסלקטיביות מעכבת RTKs מחוץ ליעד. להיטים חיוביים עשויים להיות מוערכים נוסף באמצעות בדיקה כמותית כגון ELISA. </p><p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> יעילות להעסיק מערכים למסך לשינוייםבזירחון, כמה הנחיות ניסיוניות מרכזיות צריכות להיות אחריו. ראשית, צריכים לכלול ניסויי דגימות בקרה מתאימות. לדוגמה, בניסויים אלו ההשפעה של מעכבים על מד&quot;א-MB-453 או קאטו III lysates נמדדה על דוגמאות lysate שהוכנו באותו היום. נתוני מערך יחידים שנאספו באותו הניסוי יש לנתח כדי למזער שינויים באות בשל הבדלים בטיפול מדגם, זמן דגירה, טכניקת pipet, או טכניקת שטיפה. עוצמת אות השוואה בין שני analytes באותו הקרום אינה מומלצת, שכן ללכוד נוגדנים לא נבחרו לזיקות מקבילות. </p>

<table><tbody><tr><td><a href="http://www.rndsystems.com/product_results.aspx?k=ary001" target="_blank">Human Phospho-RTK Array Kit</a>&lt;</td><td>a href="http://www.rndsystems.com/product_results.aspx?k=ary001" target="_blank"&gt;<img src="/img/new_window.png"> R&amp; D Sytems</td><td>ARY001</td><td></td></tr><tr><td>Aprotinin</td><td>Sigma</td><td>A6279</td><td></td></tr><tr><td>Leupeptin</td><td>Tocris</td><td>1167</td><td></td></tr><tr><td>Pepstatin A</td><td>Tocris</td><td>1190</td><td></td></tr><tr>תאי <td></td><td></td><td></td><td>MDA-MB-453</td></tr><tr><td>תאי</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Kato III<a href="http://www.rndsystems.com/product_results.aspx?k=396-hb" target="_blank">רקומביננטי אנושי NRG1-beta 1/HRG1-beta 1 EGF Domain</a></td><td>R&amp; D Systems</td><td>396-HB-050</td><td></td></tr><tr><td><a href="http://www.rndsystems.com/product_results.aspx?k=232-fa" target="_blank">חומצי FGF אנושי רקומביננטי (aa 16-155)</a></td><td>R&amp; D Systems</td><td>232-FA-025</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Sigma</td><td>H4784</td><td></td></tr><tr><td>HDS 029</td><td>Tocris</td><td>2646</td><td></td></tr><tr><td>PD 153035</td><td>Tocris</td><td>1037</td><td></td></tr><tr><td>PD 158780</td><td>Tocris</td><td>2615</td><td></td></tr><tr><td>PD 173074</td><td>Tocris</td><td>3044</td><td></td></tr><tr><td>PD 161570</td><td>Tocris</td><td>3724</td><td></td></tr><tr><td>PD 166285</td><td>בדיקת Tocris</td><td>3785</td><td></td></tr><tr><td>BCA</td><td>Pierce</td><td>23225</td><td></td></tr><tr><td>מי מלח פוספט-מאגר (PBS)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>פיפטות וקצות</td><td></td><td></td><td></td>פיפטות</tr><tr><td>כפפות</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מים</td><td></td><td></td><td></td>נטולי יונים או מזוקקים</tr><tr><td>פינצטה</td><td></td><td></td><td></td>עם קצה שטוח</tr><tr><td>פלטפורמת נדנדה שייקר</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מיקרוצנטריפוגה</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מיכלי פלסטיק עם קיבולת להכיל 50 מ"ל</td><td></td><td></td><td>לשטיפת מערכים</td></tr><tr><td>מגן יריעות שקוף מפלסטיק</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ניילון</td><td></td><td></td><td></td>פלסטיק</tr><tr><td>מגבוני</td><td></td><td></td><td></td>מעבדה סופג</tr><tr><td>מגבות</td><td></td><td></td> <td>נייר</td></tr><tr>קלטת <td></td><td></td><td></td><td>אוטורדיוגרפיה</td></tr><tr><td>מפתח</td><td></td><td></td><td></td>סרטים</tr><tr><td>קודאק ביומקס סרט אור</td><td>Carestream Health</td><td>178 8207</td><td></td></tr><tr><td>מפתח</td><td></td><td></td><td></td>סרטים</tr><tr><td>תחנת תמונה 4000MM PRO</td><td>Carestream Health</td><td></td><td>ניתן להשתמש בצילום כימילומינסנציה תואם לאיסוף נתונים מערביים במקום סרט וסרט מפתח.</td></tr><tr><td>סורק Epson Perfection</td><td>Scanner Epson</td><td>V750 PRO</td><td>סורק שטוח עם מתאם שקיפות המסוגל למצב שידור</td></tr><tr><td>תוכנת ניתוח תמונה</td><td>GE, WesternVision, BioRad, Adobe, NIH, Protein Simple וכו' ImageQuant</td><td></td><td>, ArrayVision, Western Vision, Quantity One, Photoshop, ImageJ, AlphaView או תוכנית תואמת אחרת</td></tr><tr><td>Microsoft Excel</td><td>Microsoft</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מחשב המסוגל להריץ תוכנת ניתוח תמונות ו- Microsoft Excel.</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

שינויים בפרופיל זרחון קולטן טירוזין קינאז באמצעות מערכי נוגדנים - פרסומת

Profiling Changes in Receptor Tyrosine Kinase Phosphorylation using Antibody Arrays - ADVERTISEMENT

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> Dysregulation של קינאז ביטוי הקולטן טירוזין (RTK) וזירחון לעתים קרובות קשור בהתפתחות וההתפשטות גרורתית של תאים סרטניים. מאמץ משמעותי <sup>1-3</sup> כבר התמקד בפיתוח מעכבים למקד RTKs הספציפי ולקטוע את מעברי אותות החריגים הקשורות למדינות מחלה . <sup>4-7</sup> מטרת המחקר הייתה למדוד את ההשפעות של מספר נבחר של מעכבים על זירחון RTK. מחקר זה השתמש במערך phospho-RTK האנושי, שהוא immunoassay כריך מבוסס קרום לפקח עליות או ירידות בזירחון לRTKs רב בו זמנית בדגימה אחת. בבדיקה זו, שתי RTKs phosphorylated וunphosphorylated להציג במדגם lysate נתפסו על ידי נוגדנים בדידים המודפסים בשני עותקים על פני קרום ניטרוצלולוזה הגודל של שקופיות מיקרוסקופ. לאחר שטיפה, המערכים מודגרת עם peroxidase אנטי phospho-טירוזין-חזרת (HRP),שכריכים עם RTKs phosphorylated נתפס על המערך. בעקבות צעד לשטוף 2, המערכים מודגרת עם ריאגנטים chemiluminescent. אות שנוצרה בכל מקום מערך היא ביחס ישר לכמות של phospho-חלבון הקשורה בכל נוגדן ללכוד. בניסויים אלה, מערכים שמשו למדידת עלייה בזירחון בעקבות גירוי יגנד של תאים או קרצינומה של קיבת קאטו III סרטן מד&quot;א-MB-453 או שד, כמו גם לאפיין ירידות בזירחון קשורים בטיפול בתאים עם מעכבים סלקטיביים כלפי ErbB או בני משפחת R FGF. </p>

<p class="jove_content">מערכי נוגדני Profiler Proteome הם דרך נוחה ויעילת עלות למסך לשינויים בקולטן טירוזין קינאז (RTK) זירחון בלי לבצע immunoprecipitation רב (IP) מערבונים. מערך RTK אנוש ARY001 מאפשר מדידה האיכותית של RTKs המרובה בדגימה אחת באמצעות זיהוי chemiluminescence.</p>

The dysregulation of receptor tyrosine kinase (RTK) expression and phosphorylation is frequently associated with the development and metastatic spread of ...

profiling-changes-receptor-tyrosine-kinase-phosphorylation-using

Without Section

ההיבטים הטכניים של ביצוע שפתיים (מערכות immunoprecipitation בלוציפראז) מתוארים. הגישה הכללית כרוכה לבטא גנים chimeric קידוד אנטיגנים התמזגו Renilla בלוציפראז (משטרת אלסטר) בתאי יונקים. גולמי משטרת אלסטר-אנטיגן תמציות מוכנים אז, ללא טיהור, המועסקים מבחני immunoprecipitation לכמת נוגדנים.

נוגדן פרופיל על ידי מערכות immunoprecipitation בלוציפראז (שפתיים)

המערבי סופג היא שיטה אנליטית לשמש כדי לזהות חלבונים ספציפיים בדגימה נתון homogenate רקמה או לחלץ.

המערבי סופג: הכנת המדגם איתור

מוטציות בקולטן kisspeptin (KISS1R) קשורים עם הפרעות הרבייה אצל חולים. כאן אנו מתארים כיצד להציג מוטציות עניין ברצף GC-עשיר של KISS1R כמו גם השימוש בונה KISS1R לאפיין את מסלול הפירוק של הקולטן על ידי immunoprecipitation ומערב...

Mutagenesis וניתוח של מוטציות גנטיות ברצף KISS1 GC-עשיר קולטן לזהות בני אדם עם הפרעות פוריות

סריג מבוססי הכתבים משמשים יותר ויותר לעקוב אחר פעילות קינאז ו phosphatase בתאים חיים. כאן אנו מתארים שיטה כיצד להשתמש סריג מבוססי עיתונאים כדי להעריך את מחזור התא תלויות שינויים זירחון היעד.

ניטור פעילות קינאז ו phosphatase דרך מחזור התא על ידי Ratiometric סריג

קינאז leucine חזור ריץ' 2 הוא קינאז multidomain גדול, מוטציות שהן הגורם הגנטי השכיח ביותר של מחלת פרקינסון. ניתוח של פעילות קינאז של החלבון הזה הוכיחה להיות כלי חיוני בהבנת הביולוגיה תפקוד של חלבון זה. במאמר...

Assaying פעילות קינאז של LRRK2<em> במבחנה</em

השיטה של ​​שימוש מצב מוצק nanopores לפקח על הלא ספציפית ספיחה של חלבונים על פני השטח אורגניים מתואר. השיטה משתמשת בעיקרון דופק-התנגדות, ומאפשר ספיחה להיות נחקר בזמן אמת והן ברמת מולקולה בודדת. בגלל תהליך ספיחה של חלבון יחיד רחוק שיווי משקל, אנו מציעים את העסקתם של מערכים מקבילים של nanopores סינתטי, מה שמאפשר לקביעת כמותית של קצב מסדר ראשון נראית לעין תגובה קבועה של חלבון ספיחה, כמו גם את לאנגמיור ספיחה מתמדת.

חלבון ניטור ספיחה עם מצב מוצק nanopores

אנו מציגים assay תפוקה גבוהה תזרים cytometric כדי לקבוע את פעילות phagocytic של אנטיגן ספציפי של נוגדנים דגימות קליניות, ניצול פלורסנט אנטיגן מצופים חרוזים קו תא monocytic לבטא קולטנים מרובים Fc-מתן השימוש הקולטן קביעות פעילות phagocytic בבית סטנדרטי אופנה לשחזור עבור כל אנטיגן של עניין.

קביעת פעילות Phagocytic דוגמאות של נוגדן קלינית

שפע של קולטני הנוירוטרנסמיטר אשכולות על סינפסות מאוד משפיע כוח סינפטי. שיטה זו מכמת קולטני הנוירוטרנסמיטר fluorescently שכותרתו בשלושה ממדים עם רזולוציה אחת סינפסה...

כימות אוטומטי של הקרינה סינפטית<em&gt; ג elegans</em

אנו מתארים assay תא בודד תפוקה גבוהה למדוד cytotoxicity של תאי T כאשר דגר עם תאי המטרה סרטניים. שיטה זו מעסיקה, מערך אלסטומרי צפוף של תת nanoliter בארות (~ 100.000 / מערך בארות) מרחבית להגביל את תאי T ותאי מטרה ביחסים מוגדרים ומצמידה למיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי לפקח נטייה-היעד פעיל ואפופטוזיס שלאחר מכן.

Assay כמותית תפוקה גבוהה מתא בודד Cytotoxicity לתאי T

פתחנו ומאומתים מערך טביעת רגל הקטנה של chemostats מיניאטורי שנבנה מחלקים בקלות רבה זמינים עבור עלות נמוכה. תוצאות התפתחות פיסיולוגיות וניסוייות היו דומות לchemostats נפח הגדול יותר. מערך ministat מספק פלטפורמה קומפקטית, זולה ונגישה לניסויים מסורתיים chemostat, גנומיקה תפקודית, ויישומי הקרנה כימית.

עיצוב ושימוש במערכי Chemostat Multiplexed

למדו לנתח שינויים בזרחון קולטני טירוזין קינאז בקווי תאים סרטניים באמצעות מערכי Human Phospho-RTK. שיטה זו מאפשרת מעקב בו-זמני אחר פעילות RTK והערכת יעילות מעכבי אותות ממוקדים במחקר סרטן.

שינויים בפרופיל זרחון קולטן טירוזין קינאז באמצעות מערכי נוגדנים - פרסומת

גלה סרטונים נוספים