Name: הדמית Glioma ייזום In Vivo דרך חלון גולגולתי מלוטש ומחוזק-גולגולת דקה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-20T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 44 s
Description: למד הדמיה של התחלת גליומה מחוליות גליובלסטומה בודדות בעכברים חיים באמצעות חלון גולגולתי מלוטש ומחוזק. שיטה זו מאפשרת מעקב יומיומי בהדמיית שני פוטונים על אינטראקציות בין תאי גליומה לתאי אנדותל.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת על ידי ג&#39;קסון מעבדת מרכז סרטן פיילוט גרנט ומיין קרן הסרטן.

1. פרוטוקול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדם עכבר עם קטמין וxylazine במינון של קטמין מ&quot;ג 0.1 ו 0.01 מ&quot;ג של xylazine ל1 גרם של משקל גוף. Carprofen (0.005 מ&quot;ג לכל 1 גרם של משקל גוף) משמש לשיכוך כאבים והוא מנוהל לפני ניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל הכלים כירורגיים, כולל מקדח השיניים, הוא קיטור המעוקר ב חיטוי. אם ניתוחים יצוו הם שיש לבצע, את הטיפים של מכשירי ניתוח חייבים להיות מחדש מעוקרים עם חרוז זכוכית מעקר (מדע פיין כלי FST 250) לפני כל ניתוח שלאחר מכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהעכבר הגיע מטוס כירורגית של הרדמה, שהוערך על ידי העדר תגובה לקמצוץ בוהן, היא ממוקמת על צמר גפן ואז הממוקם על משטח מחומם כדי לשמור על טמפרטורת גוף של ~ 37 ° C. עומק ההרדמה מנוטר לעתים קרובות במהלך הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פרווה הוסרה מהראש הגבה באזור משולש כ ~ 3 מ&quot;מ זנב לnares והארכת caudally לספירהrvical חוליות. משחה לרפואת עיניים מוחלת על עיניים כדי להגן עליהם מהתייבשות וגירוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העכבר ממוקם בrecumbancy גחון ולחטא את העור עם יוד ניתוחית, 70% אתנול, ומטליות סטריליות. דש 0.8 x 1.0 סנטימטר של עור המכסה את ההיבט הגבי של העצמות הקדמיות והקודקודית של הגולגולת מוסר באמצעות מספריים עדינים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משכך כאבים מקומי, 0.5% לידוקאין, מיושם באופן מקומי לקרום העצם ואת הרקמות שנחשפו בשולי הפצע. קרום העצם הוסר על ידי גירוד את הגולגולת בעדינות עם להב סכין חיתוך; זה יעזור דבק cyanoacrylate לדבוק עצם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אזור קליפת המוח של עניין מתואר בגולגולת עם טוש. השטח של עניין לא צריך להיות ממוקם מעל תפרים בגולגולת, כדי למנוע ניזק לכלי שיט גדולים שבבסיס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שכבה דקה של דבק cyanoacrylate מוחלת על שולי הפצע, כדי למנוע החלחול של נוזלי serosanguinous, ולמעט בגולגולתהאזור של עניין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלט שיני אור פעיל משמש בפרוטוקול שלנו לאיטום הגולגולת. לפני היישום של בטון שיניים, כל הגולגולת החשופה למעט השטח המיועד לדילול מטופל עם פריימרים וכתוצאה מכך עם הסוכן המליט מערכת מלט שיני אור הופעל. ברגע שהחומר הקושר מיובש, מלט שיני אור המופעל מיושם על מנת לכסות את הגולגולת. כדי לייצב את הראש של העכבר לניתוח והדמיה שלאחר מכן, אגוז hex סטרילי # 00-90 מוטבע בבטון בשיניים במרחק מהאזור לדילול. השימוש במלט שיני אור פעיל מאפשר לנו להכין את הגולגולת ללא צורך למהר לסיים את כל ההליך. לאחר הכנת מלט השיניים בגולגולת הושלמה, מלט השיניים נרפא עם אור הנראה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מלט השיניים הוא נרפא, בעל כיסוי ראש ממכשיר stereotactic הוא רכוב לאגוז hex על ראש העכבר באמצעות # 00-90 בורג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Drאופ של בטמפרטורת חדר, 0.9% סליין סטרילי מוחל על אזור הגולגולת לדילול. בעזרת stereomicroscope, מייקרו-תרגיל במהירות גבוהה משמש כדי לדלל אזור עגול של הגולגולת (בדרך כלל 4-5 ~ מ&quot;מ קוטר) מעל האזור של עניין. קידוחים והיישום של מי מלח לאזור הקדח מבוצעים לסירוגין במהלך הליך הדילול, כדי למנוע פגיעת תרמית ברקמת המוח הבסיסית. מלוח סופג חום וגם עוזר לרכך את העצם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גולגולת העכבר מורכבת משתי שכבות דקות של עצם קומפקטי, רבדת שכבה עבה של עצם ספוגי. השכבה החיצונית של עצם הקומפקטי ביותר של העצם הספוגי יוסרה באמצעות המקדח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי שרוב העצם הספוגי מוסר, החללים שנותרו בתוך העצם הספוגי ניתן לראות תחת מיקרוסקופ לנתח, המציין כי קידוח מתקרב לשכבת העצם הקומפקטית הפנימית. בשלב זה, עובי גולגולת עדיין צריך להיות יותר מ 50 מיקרומטר. גולגולת צריך להיות דלילהמשיך בזהירות כדי לקבל דקה מאוד (~ 20 מיקרומטר) וחלק הכנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע העובי הרצוי של גולגולת מושג (~ 20 מיקרומטר), שהגולגולת לוטשה ראשון באמצעות שוט סיליקון בהזמנה אישית עם יהלום דבק (6-15 מיקרומטר) לכ 10 דקות. ליטוש יהלומי הדבק משרת שתי מטרות. ראשית, זה עוד יותר מדלל את הגולגולת בלי הפעלת לחץ על הגולגולת הדקה יותר, ובכך למנוע ניזק מקרי לרקמת המוח הבסיסית. שנית, הוא משמש כצעד ראשוני לליטוש הגולגולת דללה לפני פח התחמוצת הפרטנית משמשת לליטוש גולגולת נוספת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר ליטוש יהלומי הדבק, הגולגולת הדקה יותר מלוטשת עם תחמוצת בדיל לכ 10 דקות. ברגע שהגולגולת היא מלוטשת, תחמוצת הבדיל הוא הסמיק משם עם מי מלח עד שהגולגולת דללה מופיעה נקיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב זה, אם החלון גולגולתי הוא לשמש לאורך in vivo הדמיה, אזור הגולגולת הדקה ניקה הוא מיובש. טיפה קטנה של ברורדבק cyanoacrylate מוחל לאטום את החלון גולגולתי. השכבה של דבק cyanoacrylate בין הגולגולת הדקה יותר וcoverslip צריכה להיות דקה ככל האפשר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הזרקה היא שיש לבצע לאחר יצירת חלון גולגולתי נמלים, בשלב זה, מחט מזרק 26-מד משמשת ליצירת פתח קטן בצד אחד של חלון, המצוחצח וגולגולת דקה. פתיחה זו משמשת להזרקת תאי GBM. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כוס טפטפה סטרילית עם קצה הפתיחה כ 50 מיקרומטר בקוטר הוא משך באמצעות חולץ פיפטה. פיפטה זה ישמש להזרקת תאי GBM, והוא הועמס על micromanipulator. פיפטה נטענת בזווית של 30 מעלות, כך שאתר הזרקת תאי GBM יהיה רחוק מאתר ההדמיה הסופי. קצה פיפטה יוסר תחת מיקרוסקופ נתיחה. השעית תא GBM היא החזית שנטענה לתוך פיפטה ידי שאיבה באמצעות משאבת מזרק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הזרקת פיפטה טעונה עם תאי GBM, העכבר יועבר חזרה תחת המיקרוסקופ האלקטרוני. פיפטה ההזרקה יורדת לכיוון הפתח הקטן בחלון גולגולתי ולבסוף הוכנסה לתוך המוח דרך הפתח באמצעות micromanipulator. μl 1 מתוך השעית תא GBM מוזרק לתוך 100-200 מיקרומטר המוח ממשטח המוח (מהירות: 0.1 μl / דקות, משך: 10 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגולגולת היא מיובשת, טיפה קטנה של דבק cyanoacrylate ברור מוחלת על הגולגולת המיובשת, וחתיכה בגודל 3-# 1 מ&quot;מ coverslip היא דבקה אזור הגולגולת הדקה ומלוטש. הרווח בין coverslip ומלט שיניים סמוך הוא חתום עם דבק cyanoacrylate. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר ניתוח, העכבר מוזרק מתחת לעור עם מי מלח חם סטרילי 1 מ&quot;ל ומסופק עם חום משלים כדי לשמור על טמפרטורת גוף עד שהתאושש לגמרי מההרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור הדמיה, עכברים מורדמים עם קטמין וxylazine במינון של קטמין מ&quot;ג 0.1 ו 0.01 מ&quot;ג של xylazine ל1 גרם של משקל גוף. עכברים משותקים באמצעות מסגרת stereotactic מותאמת אישיתמתחת למיקרוסקופ. אם חוזר על עצמו בגוף חי הדמיה מתבצע על בסיס יומי, isofluorane יהיה אפשרות טובה יותר, כמו עכברים להראות סימנים של תלות בשימוש חוזר ונשנה של קטמין. </li></ol> 2. נציג תוצאות ניתוח חלון גולגולתי מוצלח יציאות מאפשר החלון גולגולתי להישאר ברור במשך שבועות עד חודשים. איור 1 מציג את כלי הדם מתחת לחלון גולגולתי יציאות ראה בעיני רווחו באמצעות אור backscattered. תמונות vasculature אלו שמשו כאתרים לאיתור אזורי המוח הזהה להדמיה חוזרת ונשנית. כדי להמחיש את שני התאים אנדותל כלי הדם ותאי GBM, חצה את B6.Cg-Tg (Tek-cre) 1Ywa / י העכבר, שתוויות בתאי אנדותל כלי דם עם B6.Cg-GT (רוזה) 26Sor tm9 (CAG-tdTomato ) Hze / י עכבר, ועכברים שנוצרו עם תאי אנדותל כלי דם שכותרתו עם tdTomato החלבון פלואורסצנטי האדום. לאחר מכן בצענו את הליך craniotomy יציאות במייל אלהלסה&quot;נ, והזריק GFP שכותרתו תאי GBM לתוך המוח שלהם דרך פתח קטן בצד של חלון גולגולתי. לאחר מכן בצענו in vivo הדמית שני פוטוני longitudinally על העכברים שהוזרקו. גל עירור הליזר נקבע על 910 ננומטר, אשר גרם לעירור של שני GFP וtdTomato. שני פוטוני ההדמיה בוצעה במיקרוסקופ שהותקן שני פוטוני ליזר סריקה עם שני גלאים ליכולת האיתור סימולטני ירוקה / אדום פלואורסצנטי. איור 2 מראה בדוגמא vivo של ייזום גליומה מתאי GBM הזריקו ליד כלי הדם. יציאות החלון גולגולתי הוא גם בחירה מצוינת עבור זמן לשגות כרוני בתחום הדמית vivo. איור 3 מציג מכתים GFAP של חלקים בקליפת מוח מעכבר ללא ניתוח יציאות, עכבר 7 ימים לאחר ניתוח יציאות, ועכבר 7 ימים לאחר ניתוח ויציאות הזרקת תמיסת מלח. זה ברור מהתמונות שהעכבר ללא ניתוח והעכבר עם porניתוח TS אין לי דבק, ואילו לאחר הזרקה מי מלח, דבק נצפה ברקמת המוח של העכבר, בשל פיפטה חדירה וזריקה של תמיסת מלח במוח. תוצאה זו מדגימה דבקה שאינה מתרחשת מתחת לחלון גולגולתי היציאות, מתן אימות עצמאית שיציאות חלון גולגולתי שתואר כאן אינן מובילה לדבקות שמזוהה בדרך כלל עם &quot;גולגולת פתוחה&quot; חלון גולגולתי כרוני. איור 4 מראה ברזולוציה גבוהה הדמיה של קוצים הדנדריטים מאותה העכבר ביום של ניתוח (יום 0) ו 32 ימים לאחר יצירת חלון היציאות (יום 32), הוכחה כי חלון היציאות הוא גם בחירה מצוינת עבור רזולוציה גבוהה in vivo ההדמיה. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/4201/4201fig1.jpg" /> איור 1. יזואליזציה של כלי דם מתחת לחלון מלוטש ומחוזק דלל גולגולת גולגולת באמצעות אור backscattered. ימים לא מייצגים<html> הוא מספר הימים לאחר ניתוח; תמונות צולם החל מיום הניתוח באופן מיידי לאחר השלים הזרקת תאי GBM. בר סולם:. 0.5 מ&quot;מ <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4201/4201fig1large.jpg" target="_blank">לחץ כאן לצפייה בדמות גדולה.</a> <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/4201/4201fig2.jpg" /> איור 2. ויזואליזציה של תאים מוזרקים GBM ומערכת כלי דם בגוף חי. עכברים שנשאו הן Tek-Cre וROSA26 CAG-tdTomato שמשו להזרקת תאי GBM. תאי אנדותל כלי דם תויגו עם tdTomato (אדום), ותאי GBM תויגו עם GFP (ירוק). תמונות נרכשו החל 24 שעות לאחר הזרקת תאי GBM. סכום כולל של 10-12 שדות סמוכים של נוף נלקחו ונאספו סמוך זה לזה, עם תאי GBM הזריקו זוהו במרכז השדה הכולל, כדי לייצר את התמונות הסופיות. ימים מייצגים את מספר הימים לאחר ניתוח. סרגל קנה מידה: 100 מיקרומטר.href = &quot;https://www.jove.com/files/ftp_upload/4201/4201fig2large.jpg&quot; target = &quot;_blank&quot;&gt; לחץ כאן לצפייה בדמות גדולה. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/4201/4201fig3.jpg" /> איור 3. דבק אינו מתרחש לאחר ניתוח חלון יציאות גולגולת. פנלים עליונים: סעיף עטרת עכבר מוח בהגדלה נמוכה. פנל שמאלי: עכבר ללא כל ניתוח חלון גולגולתי; אין הפעלת GFAP נצפה ברקמת המוח. פנל תיכון: עכבר עם חלון גולגולתי יציאות שנוצרו בצד הימני של המוח, אף הפעלת GFAP נצפה ברקמת המוח. לוח ימני: עכבר עם חלון יציאות גולגולת והזרקה מי מלח מהצד של חלון היציאות. הפעלת GFAP הוא ציין בצד של חלון היציאות, אבל לא בצד של רקמת מוח השלמה. סרגל קנה מידה: 1 מ&quot;מ. פנל תחתון: תמונות גבוה יותר כוח של רקמות מוח באזורים שהוזכרו בקופסה הלבנה של תמונות העליונות בלוח. סרגל קנה מידה: 100 מיקרומטר. <ahref = &quot;https://www.jove.com/files/ftp_upload/4201/4201fig3large.jpg&quot; target = &quot;_blank&quot;&gt; לחץ כאן לצפייה בדמות גדולה. <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/4201/4201fig4.jpg" /> איור 4. הדמיה של קוצים הדנדריטים מ- 1 עכברי YFPH ברזולוציה גבוהה. תמונות נרכשו ביום ניתוח יציאות, ו32 ימים לאחר ניתוח יציאות. ניכר מהתמונות שרוב הקוצים מציגים ביום 0 הם 32 ימים לאחר ניתוח נראים בבירור יציאות. סרגל קנה מידה: 2 מיקרומטר.

<ol><li>Paulino, A. C., Teh, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+brain+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Treatment of brain tumors.</a> N. Engl. J. Med. 352, 2350-2353 (2005).</li>
<li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma.</a> N. Engl. J. Med. 352, 987-996 (2005).</li>
<li>Singh, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+human+brain+tumour+initiating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identification of human brain tumour initiating cells.</a> Nature. 432, 396-401 (2004).</li>
<li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hallmarks+of+cancer%3A+the+next+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144, 646-674 (2011).</li>
<li>Cheng, L., Bao, S., Rich, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+therapeutic+implications+of+cancer+stem+cells+in+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Potential therapeutic implications of cancer stem cells in glioblastoma.</a> Biochem. Pharmacol. 80, 654-665 (2010).</li>
<li>Cheng, L., Ramesh, A. V., Flesken-Nikitin, A., Choi, J., Nikitin, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+for+cancer+stem+cell+research%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Mouse models for cancer stem cell research.</a> Toxicol. Pathol. 38, 62-71 (2010).</li>
<li>Dirks, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+tumor+stem+cells%3A+the+cancer+stem+cell+hypothesis+writ+large%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Brain tumor stem cells: the cancer stem cell hypothesis writ large.</a> Mol. Oncol. 4, 420-430 (2010).</li>
<li>Ebben, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cancer+stem+cell+paradigm%3A+a+new+understanding+of+tumor+development+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin.+Ther.+Targets%22%5BJournal%5D)">The cancer stem cell paradigm: a new understanding of tumor development and treatment.</a> Expert Opin. Ther. Targets. 14, 621-632 (2010).</li>
<li>Germano, I., Swiss, V., Casaccia, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+brain+tumors%2C+neural+stem+cell%2C+and+brain+tumor+cancer+cells%3A+where+is+the+link%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Primary brain tumors, neural stem cell, and brain tumor cancer cells: where is the link.</a> Neuropharmacology. 58, 903-910 (2010).</li>
<li>Park, D. M., Rich, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+glioma+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cells%22%5BJournal%5D)">Biology of glioma cancer stem cells.</a> Mol. Cells. 28, 7-12 (2009).</li>
<li>Bao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell-like+glioma+cells+promote+tumor+angiogenesis+through+vascular+endothelial+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Stem cell-like glioma cells promote tumor angiogenesis through vascular endothelial growth factor.</a> Cancer Res. 66, 7843-7848 (2006).</li>
<li>Calabrese, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+perivascular+niche+for+brain+tumor+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">A perivascular niche for brain tumor stem cells.</a> Cancer Cell. 11, 69-82 (2007).</li>
<li>Barami, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+of+neural+stem+cells+with+their+vascular+niche%3A+implications+in+the+malignant+progression+of+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Relationship of neural stem cells with their vascular niche: implications in the malignant progression of gliomas.</a> J. Clin. Neurosci. 15, 1193-1197 (2008).</li>
<li>Gilbertson, R. J., Rich, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+a+tumour%27s+bed%3A+glioblastoma+stem+cells+and+the+vascular+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Making a tumour's bed: glioblastoma stem cells and the vascular niche.</a> Nat. Rev. Cancer. 7, 733-736 (2007).</li>
<li>Cho, R. W., Clarke, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Genet.+Dev%22%5BJournal%5D)">Recent advances in cancer stem cells.</a> Curr. Opin. Genet. Dev. 18, 48-53 (2008).</li>
<li>Drew, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+optical+access+through+a+polished+and+reinforced+thinned+skull%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Chronic optical access through a polished and reinforced thinned skull.</a> Nat. Methods. 7, 981-984 (2010).</li>
</ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

המפתח לחלון גולגולתי מוצלח יציאות הוא דליל וליטוש. אמנם דליל הראשוני יכול להתבצע במהירות, יש להקפיד על מנת להבטיח הומוגנית הדילול של הגולגולת על פני שטח גדול. אנחנו בדרך כלל למרוח שכבה דקה של מלח לגולגולת, ולאחר מכן לעבור גולגולת דקה אחת בכל פעם, כך שתמיסת המלח מתאדה זמן קצר לאחר microdrill עברה מעל הגולגולת פעם אחת. זה מאפשר לנו לאט אבל homogenously נוסף דק הגולגולת. יד יציבה מתחת למיקרוסקופ היא גם מפתח. ברגע גולגולת דלילה-מתקרב העובי הרצוי, אנחנו בדרך כלל להשתמש ביהלומים להדביק ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות (אופציונלי) </td></tr><tr><td> DMEM/F12 (1:1) עם פירובט נתרן </td><td> Thermo Sci Hyclone </td><td> SH3026101 </td><td></td></tr><tr><td> B-27 תוסף חינם סרום (50x) </td><td> Invitrogen </td><td> 17504-044 </td><td></td></tr><tr><td> GlutaMax-1 מוסף </td><td> Invitrogen </td><td> 35050061 </td><td></td></tr><tr><td> פתרון לפניצילין סטרפטומיצין </td><td> Thermo Sci Hyclone </td><td> SV30010 </td><td></td></tr><tr><td> בינוני ניתוק תא Accutase אנזים </td><td> eBiosciences </td><td> 00-4555-56 </td><td></td></tr><tr><td> T25 צלוחיות-אוורור כובע ירוק </td><td> Sarstedt </td><td> 83.1810.502 </td><td></td></tr><tr><td> 70% אלכוהול </td><td> LAHS JAX </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 10% povidone-יוד פתרון מקומי </td><td> LAHS JAX </td><td></td><td></td></tr><tr><td> קטמין הידרוכלוריד </td><td> אספקת לבריאות בעלי החיים באטלר </td><td> NDC # 11695-0550-1 </td><td></td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> Akorn, Inc </td><td> נדא # 139-236 </td><td></td></tr><tr><td> Carprofen </td><td> LAHS JAX </td><td></td><td></td></tr><tr><td> משחה לרפואת עיניים </td><td> מוצרי Dechra הווטרינריים </td><td> 17033-211-38 </td><td></td></tr><tr><td> 0.5% לידוקאין הידרוכלוריד </td><td> ריג&#39;נט, Inc </td><td> NDC 0517-0625-25 </td><td></td></tr><tr><td> דבק cyanoacrylate </td><td> הנקל קורפ </td><td> 46551 </td><td></td></tr><tr><td> מטליות סטריליות </td><td> הפישר סיינטיפיק </td><td> 23-400-114 </td><td></td></tr><tr><td> להדביק יהלומים </td><td> אספקת יישומון </td><td> BBE60 </td><td></td></tr><tr><td> תחמוצת בדיל </td><td> LORTONE, Inc </td><td> 591-038 </td><td></td></tr><tr><td> ליינר ונד 2V </td><td> Kuraray רפואי בע&quot;מ </td><td> 1921-KA </td><td></td></tr><tr><td> Clearfil AP-X </td><td> Kuraray רפואי בע&quot;מ </td><td> 1721-KA </td><td></td></tr><tr><td> מלוח </td><td> LAHS JAX </td><td></td><td></td></tr><tr><td> כיסוי זכוכית </td><td> וורנר מכשירים </td><td> 64-0720 </td><td></td></tr><tr><td> אגוזי Hex </td><td> חלקים קטנים, Inc </td><td> HNX-0090-C </td><td></td></tr><tr><td> משאבת מזרק </td><td> Syringepump.com </td><td> NE-1000 </td><td></td></tr><tr><td> מערכת ההדמיה שני פוטונים </td><td> מובנה מותאם אישית (כל מערכת המסחרית הייתעבודה) </td><td></td><td></td></tr></table>

הדמית glioma ייזום<em&gt; in vivo</em&gt; דרך חלון גולגולתי מלוטש ומחוזק-גולגולת דקה

Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

Glioma הוא אחת הצורות הקטלניות ביותר של הסרטן אנושי. הטיפול היעיל ביותר לגליומה מועד ניתוח ואחריו קרינת הטיפול מציע למטופלים רק יתרונות צנועים, כמו רוב החולים אינם שורד יותר מחמש שנים לאחר אבחון בשל 1,2 ההישנות גליומה. הגילוי של תאי גזע סרטני בגידולים במוח אדם טומן בחובו הבטחה לבעל השפעה עצומה על פיתוח אסטרטגיות טיפוליות חדשניות לגליומה 3. תאי גזע סרטני מוגדרים על ידי היכולת שלהם הוא לעצמי לחדש ולבדל, ונחשבים לתאים היחידים בגידול שיש להם את היכולת ליזום גידולים חדשים 4. ההקרנות הבאות glioma ההישנות היא חשבה שהוא נובע מהתנגדות של תאי גזע glioma (GSCs) לטיפול 5-10. בחי, GSCs מוצגים להתגורר בנישת perivascular שהיא חשוב לשמירה על מאפייני גזעם תאים כמו 11-14 . מרכז לאורגניאספקת מפעלי של נישת GSC הן תאי אנדותל כלי דם 12. ראיות מצביעות על כך שקיימים GSCs והאינטראקציה שלהם עם תאי אנדותל כלי הדם חשובים להתפתחות גידולים, ולזהות GSCs והאינטראקציה שלהם עם תאי האנדותל כמטרות טיפוליות חשובות עבור גליומה. הנוכחות של GSCs נקבעה באופן ניסיוני על ידי היכולת שלהם ליזום גידולים חדשים על 15 השתלת orthotopic. זו מושגת בדרך כלל על ידי הזרקת מספר מסוים של תאי GBM שבודדו מגידולים אנושיים לתוך מוחם של עכברים קשות חיסוניים לקויים, או של תאי GBM עכבר למוחם של עכברים מארחים congenic. מבחנים לצמיחת גידול לאחר מכן, בוצעו לאחר זמן מספיק כדי לאפשר GSCs בין תאי GBM הזריקו להצמיח גידולים-בדרך כלל כמה שבועות או חודשים חדשים. לפיכך, מבחנים קיימים אינם מאפשרים בחינה של התהליך הפתולוגי החשוב של חניכת גידול מGSCs הבודד in vivo. כתוצאה מכך, החיוניnsights לתפקידים הספציפיים של GSCs והאינטראקציה שלהם עם תאי אנדותל כלי דם בשלבים המוקדמים של ייזום גידול חסר. תובנה אלה הן קריטיות לפיתוח אסטרטגיות טיפוליות חדשניות לגליומה, ותהיינה לה השלכות רבות למניעת הישנות גליומה בחולים. כאן יש להתאים את יציאות הליך חלון גולגולתי 16 ו in vivo שני הפוטונים מיקרוסקופיה כדי לאפשר הדמיה של חניכה מתאי גידול GBM הזריקו במוח של עכבר חי. הטכניקה שלנו תסלול את הדרך למאמצים עתידיים על מנת להבהיר את מנגנוני האיתות העיקריים בין GSCs ותאי אנדותל כלי דם במהלך חניכת גליומה.

על ידי שילוב של-גולגולת דקה מלוטשת ומחוזקת (יציאות) גולגולתי חלון והזרקת גליובלסטומה (GBM) תא, אנו יכולים לצפות בייזום וצמיחה מתאים מוזרקים GBM במוח של עכבר חי longitudinally גליומה.

הדמית Glioma ייזום<em&gt; In Vivo</em&gt; דרך חלון גולגולתי מלוטש ומחוזק-גולגולת דקה

גליומה היא אחת הצורות הקטלניות ביותר של סרטן בבני אדם. הטיפול היעיל ביותר בגליומה עד כה – ניתוח ולאחריו טיפול בקרינה – מציע...

המטרה הכללית של הליך זה היא להמחיש את השלבים הראשוניים של התפתחות גליומה מתאי גליובלסטומה בודדים שהוזרקו in vivo. זאת על ידי דילול ראשוני של אזור בגולגולת העכבר לעובי המתאים למטרות דימות in vivo. לאחר מכן, אזור הגולגולת המדולל עובר ליטוש.לאחר מכן, תאי גליובלסטומה המסומנים ב-GFP מוזרקים למוח העכבר וחלון הגולגולת נאטם לצורך דימוי in vivo. לבסוף, תאי הגליובלסטומה המוזרקים מדוממים מדי יום כדי להמחיש את תחילת התפתחות הגליומה מתאי גליובלסטומה מוזרקים in vivo. בסופו של דבר, ניתן לקבל תוצאות המראות התפתחות של גליומה in vivo מהזרקה בודדת של תאי גליובלסטומה ואת הקשר שלהם לתאי אנדותל וסקולריים באמצעות מיקרוסקופיית דו-פוטון דו-צבעית in vivo.שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום תאי הגזע של הסרטן, כגון התפקיד הקריטי של האינטראקציה בין תאי גזע של גליומה לתאי אנדותל וסקולריים והיווצרות גליומה in vivo, תוך הדגמה שפרוצדורת הניתוח תתבצע תחת ניהולו של lapier מ-JAK Surgical Services ובמעבדתי. כדי להתכונן לניתוח, יש לבצע סטריליזציה באמצעות אוטוקלב (עיקור בקיטור) לכל כלי הניתוח, כולל מקדחת השיניים, לאחר שהעכבר הורדם באמצעות ketamine ו-xylazine וניתנו לו משככי כאבים. יש לבדוק את עומק ההרדמה על ידי ביצוע צביטה בבהונות באמצעות מכשיר גילוח חשמלי קטן. יש להסיר את הפרווה מהחלק הגבי של הראש באזור משו

imaging-glioma-initiation-vivo-through-polished-reinforced-thin-skull

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

ההשתלה תוך גולגולתי של תאים לתוך GL261 C57BL / 6 עכברים מייצרת gliomas ממאיר לשחזר רבים מסימני ההיכר של multiforme glioblastoma האדם. השתמשנו GL261 התאים ביציבות להביע בלוציפראז כדי לאפשר לנו...

השרשה תוך גולגולתי עם 3D לאחר In vivo Bioluminescent הדמיה של gliomas Murine

אנו מציגים שיטה ליצירת חלון הדמיה בגולגולת העכבר החובקת מילימטרים והוא יציב במשך חודשים ללא דלקת של המוח. שיטה זו גם מתאים מחקרים ארוכי טווח של זרימת דם, דינמיקה סלולריים, ותא / מבנה כלי הדם באמצעות שני פוטונים במיקרוסקופ.

מלוטשת מחוזק דליל, הגולגולת חלון הדמיה לטווח ארוך של מוח עכבר

סרטון זה מציג הליך כירורגי להשתלת חלון גולגולתי במודל עכבר לגישה אופטית יציבה לאזורים שונים במוח.

השתלת חלון הדמיה גולגולתי במודל עכבר: הליך כירורגי להשתלת כיסויים מבוססי זכוכית לגישה אופטית יציבה לאזורים במוח מורין

אנו מציגים שיטה ליצירת חלון גולגולת דללה קליפת מוח (TSCW) במודל של עכברים...

טכניקת חלון קליפת מוח, גולגולת דקה יותר עבור<em&gt; In Vivo</em&gt; טומוגרפיה קוהרנטיות אופטית הדמיה

רומן ברזולוציה גבוהה<em&gt; בvivo</em&gt; טכניקת הדמיה כדי לחקור את התגובה דינמית של מבנים תוך גולגולתי לצמיחה גידול וTherapeutics

הקמנו מודל גליובלסטומה orthotopic קליפת המוח בעכברים לשני הפוטונים במיקרוסקופ intravital שמשחזר אילוצי biophysical בדרך כלל במשחק במהלך הצמיחה של הגידול. חלון זכוכית כרוני החלפת הגולגולת מעל לגידול מאפשר המעקב של התקדמות הגידול לאורך זמן על ידי שני פוטונים במיקרוסקופ.

Glioblastoma עכבר דגם orthotopic שמירה על אילוצי המוח של רקמת ריאה, פיסיים ומתאים לשני פוטונים במיקרוסקופ Intravital

כאן אנו מתארים שיטה עבור ברזולוציה גבוהה בזמן הדמיה multiphoton של תאים סרטניים במוח לפני ואחרי התערבות כירורגית פולשנית (למשל, ביופסיה) בתוך חיה חיה אותו. שיטה זו מאפשרת ללמוד את ההשפעה של אלה הליכים כירורגי פולשנית על תאים סרטניים ' נדידה, פולשנית, והתנהגות מתרבים ברמת תא בודד.

האורך הדמיה של התנהגות המוח תאים סרטניים בתגובה ביופסיה פולשנית כירורגית

פרוטוקול זה מתאר טכניקת השרשה כרונית חלון הגולגולת שניתן להשתמש בהם עבור הדמיה האורך של מבנים נוירווליו-כלי דם, אינטראקציות, ותפקוד בתנאים בריאים ונגועים. היא משמשת כחלופה משלימה לגישת הדימות הtranscranial, שבזמן הרצוי לעתים קרובות, יש כמה מגבלות קריטיות.

מיפוי המוח מדויק לבצע חוזרות ונשנות של הדמיה Vivo של נוירודינמיקה החיסונית בעכברים

מוצג כאן פרוטוקול להשתלת חלון גולגולתי כרוני להדמיה אורכית של תאי מוח בעכברים ערים ומרוסנים ראש.

השתלת חלון גולגולת להדמיה חוזרת ונשנית In Vivo בעכברים ערים

מחקר זה מדגים העברה של פגיעה מוחית טראומטית חוזרת ונשנית לעכברים והשתלה סימולטנית של חלון גולגולתי לצורך הדמיה תוך-חיונית עוקבת של EGFP המתבטא בנוירונים באמצעות מיקרוסקופ של שני פוטונים.

הדמיה תוך חיונית של ביטוי חלבון פלואורסצנטי בעכברים עם פגיעה מוחית טראומטית בגולגולת סגורה וחלון גולגולת באמצעות מיקרוסקופ דו-פוטוני

אנו מציגים גישה חדשנית למיקרוסקופ דו-פוטוני של העברת הגידול של ננו-חלקיקי תחמוצת ברזל עם תווית פלואורסצנטית לגליובלסטומה במודל עכבר.

מיקרוסקופיה תוך-חיונית דו-פוטונית של גליובלסטומה במודל מורין

למד הדמיה של התחלת גליומה מחוליות גליובלסטומה בודדות בעכברים חיים באמצעות חלון גולגולתי מלוטש ומחוזק. שיטה זו מאפשרת מעקב יומיומי בהדמיית שני פוטונים על אינטראקציות בין תאי גליומה לתאי אנדותל.

הדמית Glioma ייזום

גלה סרטונים נוספים