Name: הקפאת ES תאים אנושיים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-10-12T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min
Description: למד פרוטוקול הקפאה יעיל לתאי גזע עובריים אנושיים (HuES) לשימור ארוך טווח. השיטה שומרת על חיוניות התאים ועל יכולת ההתמיינות שלהם לאחר הפשרה למחקר עתידי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות בריאה, אקספוננציאלית הרחבת נשטף עם PBS להסיר התקשורת שיורי שיכול אחרת להרוות את התגובה טריפסין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חימם 0.05% טריפסין-EDTA הוא הוסיף אז כדי לכסות את תאים, הצלחת מותר דגירה של עד 5 דקות בטמפרטורת החדר. במהלך הזמן הזה התאים ניתן לראות עיגול, ומושבות מרימים את פני הצלחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Pipetting חזר עדין יסיר מושבות תאים מפני השטח צלחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים Trypsinized ממוקמים צינור חרוטי סטנדרטי המכיל מראש חימם התקשורת הס תא להרוות טריפסין הנותרים, וסובב אז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים הם resuspended התקשורת צמיחה בריכוז של כמיליון תאים למ&quot;ל אחד בתקשורת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי התאים resuspended כראוי, קרים כקרח מדיה מקפיא נוסף בהיקף זהה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המתלים Cell מעורבבים היטב, aliquoted לתוך צלוחיות מקפיא, ואיפשר לאט לקפוא-80C מעל 24 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים קפואים יכול מכן מועבר בשלב אדים של חנקן נוזלי לצורך אחסון לטווח ארוך, או להישאר כ -80 שישה חודשים. </li></ol><p style=";text-align:right;direction:rtl"> הערה: כזה aliquot קפוא בריכוז של 106 תאים / מ&quot;ל ​​מספיקה כדי להחיות תרבות על צלחת 10 ס&quot;מ. </p>

<ol>
	<li>Cowan, C. A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+Embryonic+Stem+Cells+from+Human+Blastocysts.">Derivation of Embryonic Stem Cells from Human Blastocysts.</a> , 1650-1656 (2004).</li></ol>

<p style=";text-align:right;direction:rtl"> הטכניקה אנו מתארים עבור קווי גוונים תא הקפאה עובד היטב עבור אחסון יעיל להחיות גוונים שורות תאים וכן כל תא יונקים של עניין. הקפאת חלק קטן של תאים במעבר זה הוא שיקול חשוב בעת עבודה עם שורות הס התא, כמו הפרעות קריוטיפ יכול להתעורר תאים חריגים יכולים במהירות להשתלט על הקו. לפיכך, לאחר קפוא מפצלת במעבר בכל בנוסף הבנקים הגדולים על קטעים מסוימים רצוי מאוד. </p>

<table><tbody><tr><td>תווך HuES</td><td>תווך</td><td></td><td></td><td>לנפח כולל של 651.5 mL, הוסף: 500 mL KO-DMEM + 6.5 mL PenStrep + 6.5 mL L-Glut + 6.5 mL NEAA 6.5 mL + beta-mercapt&amp;#8211;thanol 0.6 &amp;micro;L (מלאי של 14.3 M) + 65 mL Serum Replacement + 65 mL Plasmanate + 0.65 mL bFGF2 (ריכוז סופי של ~10 ng/mL)</td></tr><tr><td>תווך הקפאה</td><td>תווך</td><td></td><td></td><td>80% FCS (סרום עגל עוברי) + 20% DMSO (דימתיל סולפוקסיד). מאוחסן ב-4 &amp;deg;C.</td></tr></tbody></table>

הקפאת es תאים אנושיים

Freezing Human ES Cells

<p class="jove_content">כאן אנו מדגימים כיצד במעבדה שלנו קופא גוונים האדם עובריים קווי גזע. תרבות בריאה, אקספוננציאלית הרחבת נשטף עם PBS להסיר התקשורת שיורי שיכול אחרת להרוות את התגובה טריפסין. חימם 0.05% טריפסין-EDTA הוא הוסיף אז כדי לכסות את תאים, הצלחת מותר דגירה של עד 5 דקות בטמפרטורת החדר. במהלך הזמן הזה התאים ניתן לראות עיגול, ומושבות מרימים את פני הצלחת. Pipetting חזר עדין יסיר מושבות תאים מפני השטח צלחת. תאים Trypsinized ממוקמים צינור חרוטי סטנדרטי המכיל מראש חימם התקשורת הס תא להרוות טריפסין הנותרים, וסובב אז. תאים הם resuspended התקשורת צמיחה בריכוז של כמיליון תאים למ&quot;ל אחד בתקשורת, ריכוז כזה שאף אחד aliquot קפוא מספיקה כדי להחיות תרבות על צלחת 10 ס&quot;מ. אחרי התאים resuspended כראוי, קרים כקרח התקשורת מקפיא נוסף בהיקף זהה. המתלים Cell מעורבבים היטב, aliquoted לתוך צלוחיות מקפיא, ואיפשר לאט לקפוא-80C מעל 24 שעות. תאים קפואים יכול מכן מועבר בשלב אדים של חנקן נוזלי לצורך אחסון לטווח ארוך, או להישאר כ -80 שישה חודשים.</p>

<p class="jove_content">כאן אנו מדגימים כיצד במעבדה שלנו קופא גוונים האדם עובריים קווי גזע.</p>

הקפאת ES תאים אנושיים

כאן אנו מדגימים כיצד המעבדה שלנו מקפיאה קווי תאי גזע עובריים אנושיים מסוג HuES. תרבית בריאה הנמצאת בשלב התרחבות מעריכית נשטפת ב-PBS כדי להסיר...

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

כאן אנו מדגימים כיצד במעבדה שלנו מתחיל גוונים תא גזע עובריים אנושיים תרבות קו ממלאי קפוא.

ES תאים אנושיים: תרבות החל מ תאים קפואים

בתאי יונקים Cultured נמצאים בשימוש נרחב במחקרים בביולוגיה של התא. וידאו זה מתאר את הכישורים הבסיסיים הנדרשים להקפיא ולאחסן תאים כיצד לשחזר מניות קפוא.

הקפאה, הפשרה, ותאי אריזות התחבורה

ההבחנה בין ESC עולה בקנה אחד עם תא מסוג שינויים ספציפיים במבנה ובהרכב של הכרומטין. זיהוי של שינויים אלה מספק תובנות רבות ערך את המנגנונים שמגדירים stemcellness והתמיינות תאים. הכרומטין immunoprecipitation (שבב) מייצגת שיטת ערך לנתח את המנגנונים המולקולריים שבבסיס תא גזע בידול.

הכרומטין immunoprecipitation מן בתאי גזע עובריים אנושיים

מאז ג'יימס תומסון ואח' פיתח טכניקה בשנת 1998 לבודד ולגדל הס בתרבות, הקפאת תאים לשימוש מאוחר יותר, מפשיר והרחבת תאים ממלאי קפוא הפכו נהלים חשוב לבצע בתרבות הס שגרה התא. מכיוון שתאי הס רגישים מאוד הלחצים של מקפיא הפשרה, טיפול מיוחד חייב לנקוט. כאן אנו וידגים עבור מפשיר במהירות תאים הס ממניות חנקן נוזלי, ציפוי אותם על תאים עובריים של עכבר מזין, ולאט לאט הקפאת אותם לצורך אחסון לטווח ארוך.

מקפיא הפשרה בתאי גזע עובריים אנושיים

אנו מתארים פרוטוקול לבידוד ותרבית תאי אפיתל מי שפיר אנושיים (hAECs) באמצעות ריאגנטים ללא מוצרים מן החי בהתאם להנחיות הנוכחיות של תנאי ייצור נאותים (cGMP).

בידוד, Cryopreservation ותרבות של תאי אפיתל amnion אדם ליישומים קליניים

עריכת גנום של תאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים (hPSCs) יכולה להיעשות במהירות וביעילות. מוצג כאן הליך ניסיוני חזק להנדסה גנטית של hPSCs כפי שמודגם על ידי עריכת מיקום נמל המבטחים AAVS1 כדי לבטא EGFP ולהציג עמידות לאנטיביוטיקה.

הקמת שורות תאי גזע pluripotent האדם בעריכה-הגנום: ממיקוד לבידוד

הרחבת תאי אפיתל ושט ילדים אנושיים ניצול תכנות מחדש מותנה מספקת חוקרים עם אוכלוסיית חולים ספציפיים של תאים שיכולים להיות מנוצלת עבור הנדסת בונת ושט להשתלה אוטולוגית לטיפול פגמים או פציעה ומגיש כמאגר מבחני מיון טיפוליים.

תכנות מחדש מותנה של תאי אפיתל ושט האדם Pediatric לשימוש בהנדסת רקמות וחקירת מחלות

פרוטוקול מוצג להכין hydrogels אסיד פוליוויניל אלכוהול-co-itaconic עם נוקשות בדרגות שונות, אשר היו הושתל עם ובלי oligopeptides, לחקור את השפעת הנוקשות של biomaterials על בידול והתפשטות תאי גזע. הנוקשות של hydrogels היה בשליטת הזמן crosslinking.

התרבות תאי גזע Pluripotent אנושי על פוליויניל אלכוהול-Co-Itaconic Hydrogels חומצה עם קשיות שונות בתנאים קסנו-חופשית

פרוטוקול זה מפרט שיטה מותאמת להפקה, הרחבה והקפאה של תאי אנדותל מיקרו-וסקולריים במוח המתקבלים על ידי הבחנה בין תאי גזע פלוריפוטנטיים הנגרמים על ידי בני אדם, ולחקור תכונות מחסום מוח בדם במודל אקס ויוו.

נגזרת, התרחבות, קריומורציה ואפיון של תאי אנדותל מיקרו-וסקולריים במוח מתאי גזע פלוריפוטנטיים הנגרמים על ידי בני אדם

כאן אנו מראים כיצד להשתמש במכשיר הקפאת הכריך להקפאה מהירה של דגימות ביולוגיות, כולל חיידקים, שמרים, תאים בתרבית, תאים מבודדים, רקמות בעלי חיים ובני אדם, ווירוסים. אנו גם מראים כיצד להכין דגימות לחתך אולטרה-דק לאחר הקפאה מהירה.

הקפאה מהירה באמצעות מכשיר הקפאת כריך לשימור אולטרה-מבני טוב של דגימות ביולוגיות במיקרוסקופיית אלקטרונים

מחקר זה מספק פרוטוקול מפורט לשימור קריוגני יעיל של תאי אפיתל פיגמנט ברשתית שמקורם בתאי גזע אנושיים.

שימור בהקפאה של תאי אפיתל פיגמנט ברשתית שמקורם בתאי גזע עובריים אנושיים בשלב האופטימלי

למד פרוטוקול הקפאה יעיל לתאי גזע עובריים אנושיים (HuES) לשימור ארוך טווח. השיטה שומרת על חיוניות התאים ועל יכולת ההתמיינות שלהם לאחר הפשרה למחקר עתידי.

הקפאת ES תאים אנושיים

גלה סרטונים נוספים