Name: הכנת תאים דנדריטים גידול Antigen טעון בוגרים לחיסוניים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-01T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 40 s
Description: למד הכנת תאים דנדריטים מונוציטים בוגרים טעוני אנטיגן לחיסוניות נגד סרטן באמצעות GM-CSF ו-IL-4. שיטה זו מאפשרת ייצור תאים אוטולוגיים באיכות קלינית לטיפול אימונותרפי מותאם אישית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות לאנדרס סלזר (Oncovir, Inc) על המתנה של פולי-ICLC.

1. בידוד וCryopreservation של PBMCs 4 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסביבה נקי מחיידקי ספייק אחת מיציאות הגישה בתיק leukapheresis באמצעות מערך העברת פלזמה. באמצעות מזרק 60 מ&quot;ל, להעביר leukapheresis מתקבל מחולים לתוך בקבוק 500 מ&quot;ל סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם את עוצמת קול של leukapheresis ל2x נפחו המקורי תוך שימוש בטמפרטורת החדר RPMI. מערבבים היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לערבב בעדינות את בקבוק Ficoll-Paque PLUS. הוסף PLUS 12 מיליליטר Ficoll-Paque לתוך צינור סטרילי 50 מיליליטר חרוטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות שכבה 30 מ&quot;ל של מוצר leukapheresis המדולל לכל צינור 50 מיליליטר סטרילי חרוטי המכיל Ficoll. היזהר שלא להפריע לממשק שבין Ficoll והשעית תא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבי 1.3 ו -1.4 עד שכל leukapheresis כבר שכבתית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה צינורות חרוטי 50 מ&quot;ל ב 1000 × גרם במשך 20 דקות בטמפרטורת חדר, ללא בלם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקצור את השכבה העכורה של PBMCs זהירות מצינור אחד וtransfeR לצינורות 50 מ&quot;ל סטרילי החדש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף RPMI על צינור אחד לנפח סופי של 50 מ&quot;ל. מערבבים בעדינות על ידי היפוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה התאים ב 500 × גרם במשך 10 דקות ב 4 ° C עם בלם מלא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את supernatants מצינור אחד. Resuspend את כדורי תא מצינור אחד ולהוסיף RPMI לנפח סופי של 50 מ&quot;ל. מערבבים בעדינות על ידי היפוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה התאים ב 500 × גרם במשך 6 דקות ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את supernatants מצינור אחד. Resuspend ובריכת יחד את השעיות התא לתוך צינור אחד 50 מיליליטר חרוטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תביא את הנפח של PBMCs אספו עד 50 מ&quot;ל עם יותר RPMI. מערבבים בעדינות על ידי היפוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה התאים ב 300 × גרם במשך 6 דקות ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את supernatant. Resuspend התא גלולה ב 50 מ&quot;ל RPMI. מערבבים בעדינות כדי להבטיח השעיה תא אחידה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספור את מספר התאים ולקבוע כדאיות תא. לחשב את המספר הכולל של תאי קיימא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה התאים ב 300× גרם במשך 6 דקות ב 4 ° C. הכן את התקשורת המקפיא. תקשורת הקפאה מורכבת של 10% sulfoxide דימתיל (DMSO; Miltenyi BIOTEC) באדם א.ב. סרום (העמק ביו רפואית). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את supernatant. Resuspend התאים בריכוז סופי של 2 x 10 8 תאים / מ&quot;ל בתקשורת קרה וקפואה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך 1 aliquots מ&quot;ל ב1.8 cryovials מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את cryovials למקפיא מבוקר השיעור ולהתחיל את ריצת ההקפאה, 1 תכנית. בסוף הריצה, להעביר את cryovials הקפוא מייד לשלב אדים מהמקפיא החנקן הנוזלי. </li></ol> 2. 0 יום: התמיינות של תאי דנדריטים ממונוציטים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 30 מ&quot;ל של RPMI / 1% פלזמה אוטולוגית לצינור סטרילי 50 מיליליטר חרוטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> aliquots ההפשרה של PBMCs הוקפא על ידי תסיסה עדינה באמבט המים 37 מעלות צלזיוס. כשהפשיר לחלוטין, להעביר את התוכן של הבקבוקונים לצינור סטרילי 50 מיליליטר חרוטי. מערבבים היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה התאים במשך 6 דקותב500 × גרם בטמפרטורת חדר. הסר את supernatant ו resuspend תאי pelleted בנפח קטן של RPMI / 1% פלזמה אוטולוגית. ואז להוסיף עוד RPMI / 1% פלזמה אוטולוגית לנפח סופי של 50 מ&quot;ל. מערבבים היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה התאים שוב במשך 6 דקות ב 500 × גרם בטמפרטורת חדר. לשאוב supernatant ו resuspend את הכדור ב 50 מ&quot;ל RPMI / 1% פלזמה אוטולוגית. מערבבים היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספור את מספר התאים ולקבוע כדאיות תא. לחשב את המספר הכולל של תאי קיימא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צלחת 1.40 x 10 8 תאים ב40 מ&quot;ל של RPMI / 1% פלזמה אוטולוגית על EasyFlask 225 ס&quot;מ 2. חזור על פעולה עד שמצופים כל התאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה EasyFlasks השטוחות בצד שלה - 1 שעת 2 ב 37 מעלות צלזיוס בתרבית רקמת חממה המכילה 5% CO 2 כדי לאפשר את מונוציטים לדבוק בבקבוק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר הדגירה תושלם, להסיר EasyFlask מהחממה ולשטוף פעמיים כדי להסיר את התאים שאינם חסיד USIמיליליטר ng 30 מתוך prewarmed RPMI. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר לשטוף את השני, להוסיף 40 מ&quot;ל של RPMI / 1% פלזמה אוטולוגית עם 400-1,000 IU / מ&quot;ל IL-4 ו100-1,000 IU / מיליליטר GM-CSF 5-8. לפרוטוקול זה, אנו משתמשים 400 IU / מיליליטר IL-4 ו 100 IU / מיליליטר GM-CSF. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה EasyFlasks עבור 2 ימים על 37 מעלות צלזיוס בתרבית רקמת החממה המכילה 5% CO 2. </li></ol> 3. יום 2: האכלה של תאים דנדריטים עם IL-4 ו-GM-CSF <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 4 מ&quot;ל של RPMI / 1% פלזמה אוטולוגית עם 400-1,000 IU / מ&quot;ל ​​IL-4 ו100-1,000 IU / מ&quot;ל ​​GM-CSF לכל EasyFlask. מערבבים על ידי מתערבל ומתנדנד על צידו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה EasyFlasks לעוד 3 ימים (עד יום 5) על 37 מעלות צלזיוס בתרבית רקמת החממה המכילה 5% CO 2. </li></ol> 4. יום 5: קצירה של תאי דנדריטים לא בוגרים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקצור את התרבויות על ידי נמרצות מתערבל את צלוחיות ועל ידי pipetting למעלה ולמטה כדי resuspend תאים שאינם חסיד וחסידים רופף. העברתאים שנקטפו לצינורות חדשים 50 מ&quot;ל החרוטים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה הצינורות ב 500 × גרם במשך 6 דקות בטמפרטורת חדר. הסר את supernatants ו resuspend התא גלולה ב 50 מ&quot;ל RPMI / 1% פלזמה אוטולוגית. מערבבים היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספור את מספר התאים ולקבוע כדאיות תא. לחשב את המספר הכולל של תאי קיימא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה הצינורות ב 500 × גרם במשך 6 דקות בטמפרטורת חדר. פלייט 1-2 x 10 6 תאים לכל גם ב3 מ&quot;ל RPMI / 1% פלזמה אוטולוגית עם 400 IU / מ&quot;ל IL-4 ו 100 IU / מיליליטר GM-CSF בצלחות תרבית רקמת 6 גם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה הצלחות על 37 מעלות צלזיוס בתרבית רקמת חממה המכילה 5% CO 2 למשך הלילה. </li></ol> 5. יום 6: התבגרות וטוען Antigen של תאים דנדריטים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 10 מיקרוגרם / מיליליטר KLH עד 1/3 מהבארות בתרבות הצלחות 6 גם. לערבל את הצלחות לתערובת. KLH הוא הוסיף רק עד 1/3 מהבארות בגלל KLH משמש לחיסון DC הראשון בלבד. קון חיסוני DC לאחרTain רק פפטידים אנטיגן הסרטניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יכול להיות מגורה DCs להתבגר באמצעות גירויים שונים. הגירויים ההתבגרות הנפוצים ביותר שבו נעשה שימוש במחקרים קליניים כבר קוקטייל של ציטוקינים (IL-1 β, TNFα, ו-IL-6) וE2 פרוסטגלנדין (PGE 2) 9,10. לאחרונה, השימוש בחיוג כמו קולט (TLR) אגוניסטים צבר פופולריות 11,12. בפרוטוקול זה, להוסיף 2 מ&quot;ג / carboxymethylcellulose חומצה פולי-L-ליזין Polyinosinic-Polycytidylic מ&quot;ל (פולי-ICLC) לבארות ומערבבים היטב. Poly-ICLC הוא הניסוח קליני כיתה של פולי-IC שהוא התייצב עם פולי-L-*-ליזין וcarboxymethylcellulose (מיוצר על ידי Oncovir, Inc). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 100 מיקרוגרם / אנטיגנים פפטידים ארוכים מ&quot;ל (NY-ESO-1 ו / או Melan-A/MART-1) לבארות המיועדות שלהם, כל אחד מקבל רק פפטיד יחיד למניעת הצטלבות תחרות 13 כן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה הצלחות על 37 מעלות צלזיוס בתרבית רקמת חממה המכילה 5% CO &lt;תת&gt; 2 O / נ </li></ol> 6. יום 7: Cryopreservation של תאי דנדריטים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את הפתרון מקפיא DC באמצעות הפלזמה אוטולוגית ו10% DMSO. צנטריפוגה הפתרון מקפיא DC ב 2000 × גרם במשך 20 דקות ב 4 ° C כדי להסיר חומר חלקיקים כל. העבר את supernatant לצינור חדש שכותרת מ&quot;ל 15 חרוטי. חנות ב 4 מעלות צלזיוס עד לשימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר הדגירה הלילה הוא סיים, קציר ובריכת את כל הבארות המכילות DCs פעם עם פפטידים לתוך צינורות חרוטי 50 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה הצינורות ב 500 × גרם במשך 6 דקות. הסר את supernatants. Resuspend התא גלולה ב 5 מ&quot;ל של RPMI / 1% פלזמה אוטולוגית. תביא את הנפח הכולל של עד 50 מ&quot;ל עם RPMI / 1% פלזמה אוטולוגית. מערבבים היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספור את מספר התאים ולקבוע כדאיות תא. חישוב מספר כולל של תאי קיימא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה הצינורות ב 500 × גרם במשך 6 דקות בטמפ &#39;החדר. הסר את supernatants וresuspend כל גלולה ב 5 מ&quot;ל SteriLe 0.9% NaCl, USP והעברה לצינורות חדש 15 מ&quot;ל החרוטים. להביא כל השעיה תא 14 מ&quot;ל עם סטרילי יותר 0.9% NaCl, USP. כובע ומערבב על ידי היפוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על השלב קודם פעמיים. לאחר צנטריפוגה האחרונה, להסיר את supernatants, מקבל קרוב ככל האפשר לכדורי התא מבלי להפריע את כדורים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend את כדורי תא הקפאה בפתרון DC ב4 - 20 x 10 6 תאים / מ&quot;ל ומיליליטר aliquot 1 לכל בקבוקון cryotube 1.8 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש מבוקר שיעור המקפיא, תכנית 1, להקפיא במורד aliquots של חיסוני DC ולהעביר מייד לשלב האדים של מקפיא חנקן נוזלי לאחסון לטווח ארוך. </li></ol> 7. בדיקת שחרור הרבה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל מנה של חיסון DC חייבת להיות מוערכת ועומדות בקריטריונים לשחרור הרבה ספציפיים (טבלת 1) לפני שהוא שוחרר להזרקה לחולים שהשתתפו במחקר, בדרך כלל 5 עד 6 שבועות לאחר הכנת חיסון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדאיות:להעריך את הכדאיות של חיסון DC באמצעות מונה תא אוטומטי. מפרט הכדאיות המקובל המינימום הוא&gt; 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהות: להעריך את זהותו של DCs הבוגר (CD11c + CD14-CD83 +) על ידי cytometry הזרימה. אחוז + תאי CD11c צריך להיות&gt; 50%. אחוז CD11c + ו CD14 + התאים צריך להיות &lt;30% ואחוז CD11c +, CD14-, וCD83 + תאים צריכים להיות&gt; 50%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עקרות: מבחן חיסון DC לנוכחות של חיידקים אנאירוביים ואירוביים ופטריות על ידי תרבות הישירה וכתמי גרם. להעריך את קיומו של Mycoplasma באמצעות מערכת תרבות ישירה ו assay מכתים fluorochrome DNA עם שורת תאי מחוון. לבדיקות אלה, סט המפרט המינימאלי הוא שאין צמיחה נצפתה מכל התרבויות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רעלן פנימי: הערכת תוכן רעלן פנימי באמצעות assay LAL chromogenic הקינטית קינטי-QCL וזה חייב להיות &lt;50 איחוד אירופי / מ&quot;ל על מנת לעמוד בקריטריונים המינימאליים. </li><lאני&gt; תפקיד: להעריך את תפקוד DC בתגובת הלימפוציטים מעורב על ידי דגירה עם תאי T אלוגנאית. הנוכחות של התפשטות לעומת DCs unstimulated מדווחת (איור 3). </li></ol>

<ol><li>Lesterhuis, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cell+vaccines+in+melanoma%3A+from+promise+to+proof%5BTitle%5D)+AND+%22Crit.+Rev.+Oncol.+Hematol%22%5BJournal%5D)">Dendritic cell vaccines in melanoma: from promise to proof.</a> Crit. Rev. Oncol. Hematol. 66, 118-134 (2008).</li>
<li>Sabado, R. L., Bhardwaj, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directing+dendritic+cell+immunotherapy+towards+successful+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Immunotherapy%22%5BJournal%5D)">Directing dendritic cell immunotherapy towards successful cancer treatment.</a> Immunotherapy. 2, 37-56 (2010).</li>
<li>Schumacher, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Keyhole+limpet+hemocyanin+%28KLH%29+conjugate+vaccines+as+novel+therapeutic+tools+in+malignant+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cancer.+Res.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Keyhole limpet hemocyanin (KLH) conjugate vaccines as novel therapeutic tools in malignant disorders.</a> J. Cancer. Res. Clin. Oncol. 127, Suppl 2. 1-2 (2001).</li>
<li>Jaatinen, T., Laine, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+mononuclear+cells+from+human+cord+blood+by+Ficoll-Paque+density+gradient%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Stem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation of mononuclear cells from human cord blood by Ficoll-Paque density gradient.</a> Curr. Protoc. Stem Cell Biol. Chapter 2, Unit 2A 1(2007).</li>
<li>Eichler, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicenter+study+on+in+vitro+characterization+of+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Multicenter study on in vitro characterization of dendritic cells.</a> Cytotherapy. 10, 21-29 (2008).</li>
<li>Feuerstein, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+the+production+of+cryopreserved+aliquots+of+antigen-preloaded%2C+mature+dendritic+cells+ready+for+clinical+use%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">A method for the production of cryopreserved aliquots of antigen-preloaded, mature dendritic cells ready for clinical use.</a> J. Immunol. Methods. 245, 15-29 (2000).</li>
<li>O'Neill, D., Bhardwaj, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+autologous+peptide-+and+protein-pulsed+dendritic+cells+for+patient-specific+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">Generation of autologous peptide- and protein-pulsed dendritic cells for patient-specific immunotherapy.</a> Methods Mol. Med. 109, 97-112 (2005).</li>
<li>de Vries, I. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypical+and+functional+characterization+of+clinical+grade+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunother%22%5BJournal%5D)">Phenotypical and functional characterization of clinical grade dendritic cells.</a> J. Immunother. 25, 429-438 (2002).</li>
<li>Jonuleit, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pro-inflammatory+cytokines+and+prostaglandins+induce+maturation+of+potent+immunostimulatory+dendritic+cells+under+fetal+calf+serum-free+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Pro-inflammatory cytokines and prostaglandins induce maturation of potent immunostimulatory dendritic cells under fetal calf serum-free conditions.</a> Eur. J. Immunol. 27, 3135-3142 (1997).</li>
<li>Lee, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+clinical+grade+cocktail+of+cytokines+and+PGE2+results+in+uniform+maturation+of+human+monocyte-derived+dendritic+cells%3A+implications+for+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">A clinical grade cocktail of cytokines and PGE2 results in uniform maturation of human monocyte-derived dendritic cells: implications for immunotherapy.</a> Vaccine. 20, Suppl 4. A8-A22 (2002).</li>
<li>Bhardwaj, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Harnessing+the+immune+system+to+treat+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Harnessing the immune system to treat cancer.</a> J. Clin. Invest. 117, 1130-1136 (2007).</li>
<li>Gnjatic, S., Sawhney, N. B., Bhardwaj, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor+agonists%3A+are+they+good+adjuvants%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+J%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor agonists: are they good adjuvants?</a> Cancer J. 16, 382-391 (2010).</li>
<li>Kedl, R. M., Kappler, J. W., Marrack, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epitope+dominance%2C+competition+and+T+cell+affinity+maturation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Epitope dominance, competition and T cell affinity maturation.</a> Curr. Opin. Immunol. 15, 120-127 (2003).</li>
<li>Bogunovic, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR4+engagement+during+TLR3-induced+proinflammatory+signaling+in+dendritic+cells+promotes+IL-10-mediated+suppression+of+antitumor+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">TLR4 engagement during TLR3-induced proinflammatory signaling in dendritic cells promotes IL-10-mediated suppression of antitumor immunity.</a> Cancer Research. 71, 5467-5476 (2011).</li>
<li>Verdijk, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyriboinosinic+polyribocytidylic+acid+%28poly%28I%3AC%29%29+induces+stable+maturation+of+functionally+active+human+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Polyriboinosinic polyribocytidylic acid (poly(I:C)) induces stable maturation of functionally active human dendritic cells.</a> J. Immunol. 163, 57-61 (1999).</li>
<li>Rouas, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poly%28I%3AC%29+used+for+human+dendritic+cell+maturation+preserves+their+ability+to+secondarily+secrete+bioactive+IL-12%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Poly(I:C) used for human dendritic cell maturation preserves their ability to secondarily secrete bioactive IL-12.</a> Int. Immunol. 16, 767-773 (2004).</li>
<li>Jongmans, W., Tiemessen, D. M., van Vlodrop, I. J., Mulders, P. F., Oosterwijk, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Th1-polarizing+capacity+of+clinical-grade+dendritic+cells+is+triggered+by+Ribomunyl+but+is+compromised+by+PGE2%3A+the+importance+of+maturation+cocktails%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunother%22%5BJournal%5D)">Th1-polarizing capacity of clinical-grade dendritic cells is triggered by Ribomunyl but is compromised by PGE2: the importance of maturation cocktails.</a> J. Immunother. 28, 480-487 (2005).</li>
<li>Krause, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostaglandin+E2+is+a+key+factor+for+monocyte-derived+dendritic+cell+maturation%3A+enhanced+T+cell+stimulatory+capacity+despite+IDO%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Leukoc.+Biol%22%5BJournal%5D)">Prostaglandin E2 is a key factor for monocyte-derived dendritic cell maturation: enhanced T cell stimulatory capacity despite IDO.</a> J. Leukoc. Biol. 82, 1106-1114 (2007).</li>
<li>Morelli, A. E., Thomson, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cells+under+the+spell+of+prostaglandins%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunol%22%5BJournal%5D)">Dendritic cells under the spell of prostaglandins.</a> Trends Immunol. 24, 108-111 (2003).</li>
<li>Adams, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cell+%28DC%29+based+therapy+for+cervical+cancer%3A+use+of+DC+pulsed+with+tumour+lysate+and+matured+with+a+novel+synthetic+clinically+non-toxic+double+stranded+RNA+analogue+poly+%5BI%5D%3Apoly+%5BC%2812%29U%5D+%28Ampligen+R%29%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Dendritic cell (DC) based therapy for cervical cancer: use of DC pulsed with tumour lysate and matured with a novel synthetic clinically non-toxic double stranded RNA analogue poly [I]:poly [C(12)U] (Ampligen R).</a> Vaccine. 21 (12), 787-790 (2003).</li>
<li>Colombo, M. P., Trinchieri, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-12+in+anti-tumor+immunity+and+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine+Growth+Factor+Rev%22%5BJournal%5D)">Interleukin-12 in anti-tumor immunity and immunotherapy.</a> Cytokine Growth Factor Rev. 13, 155-168 (2002).</li>
<li>Mayordomo, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow-derived+dendritic+cells+pulsed+with+synthetic+tumour+peptides+elicit+protective+and+therapeutic+antitumour+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Bone marrow-derived dendritic cells pulsed with synthetic tumour peptides elicit protective and therapeutic antitumour immunity.</a> Nat Med. 1, 1297-1302 (1995).</li>
<li>Dhodapkar, M. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+generation+of+broad+T-cell+immunity+in+humans+after+a+single+injection+of+mature+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Rapid generation of broad T-cell immunity in humans after a single injection of mature dendritic cells.</a> J. Clin. Invest. 104, 173-180 (1999).</li>
<li>Schuler-Thurner, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+induction+of+tumor-specific+type+1+T+helper+cells+in+metastatic+melanoma+patients+by+vaccination+with+mature%2C+cryopreserved%2C+peptide-loaded+monocyte-derived+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Rapid induction of tumor-specific type 1 T helper cells in metastatic melanoma patients by vaccination with mature, cryopreserved, peptide-loaded monocyte-derived dendritic cells.</a> J. Exp. Med. 195, 1279-1288 (2002).</li>
</ol>

החוקרים קיבלת תמיכה כספית מהפעולות הבאות: NIH (AI061684, AI071078, AI044628, וK08 AI084578 (מילר)), ביל ומלינדה גייטס קרן, קרן הצדקה של דוריס דיוק, לחקר סרטן במכון, למחקר לופוס ברית, ואמרלד קרן. נינה Bhardwaj הוא coinventor על פטנטים הקשורים להכנה ושימוש בתאים דנדריטים לתפעל חסינות. יש החוקרים אין השתייכות רלוונטיות אחרות או מעורבות כספית עם כל ארגון או ישות עם אינטרס כלכלי בסכסוך כספי או עם העניין או חומרי הנושא נדון בכתב היד מלבד אלה פורסמו.

השלב I ו-II של ניסויים קליניים DCs מונוציטים הנגזרות הראו כי הם לעורר תגובות חיסוניות בחולים עם זאת הצלחה קלינית הייתה מוגבלת 1. זה עשוי להיות בחלקו בשל חוסר הסכמה על איך ליצור את DCs האופטימלי לשימוש immunotherapeutic גידול. אמנם יש דרכים רבות כדי ליצור DCs הקליני בדרגה, בשיטות אלה משתנים במונחים של השימוש בציטוקינים המשמשים כדי להבדיל את מונוציטים, גירויים המשמשים כדי לגרום להבשלה, ושיטות לטעינת אנטיגן. נוסחה ליצירה את DCs האופטימלי עדיין להיות מוגדרת 2. </...

<table><tbody><tr><td>RPMI-1640 בינוני עם L-גלוטמין</td><td>BioWhittaker</td><td>12-702F</td><td></td></tr><tr><td>1M HEPES תמיסת מלח חוצצת</td><td>BioWhittaker</td><td>17-737E</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת מלח חוצצת פוספט (PBS)</td><td>BioWhittaker</td><td>17-516F</td><td></td></tr><tr><td>אלבומין אנושי, תמיסה 25% USP</td><td>Aventis Behring</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ficoll-Hypaque PREMIUM</td><td>GE Healthcare</td><td>17-5442-03</td><td></td></tr><tr><td>Human AB סרום</td><td>עמק ביו-רפואי</td><td>HP1022</td><td></td></tr> מי <tr><td>מלח סטריליים USP</td><td>Hospira</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CryoMACS DMSO </td><td>Miltenyi Biotec</td><td>170-076-303</td><td></td></tr><tr><td>Leukine GM-CSF, 0.5 מ"ג/מ"ל</td><td>ברלקס</td><td>A02266</td><td></td></tr><tr><td>MACS GMP IL-4</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>170-076-101</td><td></td></tr><tr><td>הילטונול, Poly-ICLC, 2 מ"ג/מ"ל</td><td>אונקוביר</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>VACMUNE KLH</td><td>Biosyn</td><td></td><td></td></tr><tr><td>225 ס"מ רבוע EasyFlasks</td><td>Nalgene Nunc</td><td>159934</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 6 בארות צלחות תרבית רקמות</td><td>Becton Dickinson</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>בקבוקוני CryoTube 1.8 מ"ל</td><td>Nalgene Nunc</td><td>377267</td><td></td></tr><tr><td>מקפיא קצב מבוקר</td><td>Thermo</td><td>CryoMed</td><td></td></tr></tbody></table>

הכנת תאים דנדריטים גידול antigen טעון בוגרים לחיסוניים

Preparation of Tumor Antigen-loaded Mature Dendritic Cells for Immunotherapy

בעוד שמחקרים קליניים הוכיחו שהחיסונים DC אנטיגן טעונים בטוחים ומבטיחים לטיפול בגידולים 1, היעילות הקלינית שלהם עדיין לא הוקמה. השיטה המתוארת להלן, ערוכה בהתאם לתהליך ייצור טוב (GMP) הנחיות, היא אופטימיזציה של שיטת הכנת vivo לשעבר הנפוצה ביותר ליצירת מספר רב של מחקרים קליניים לDCs 2. השיטה שלנו מנצלת את TLR הסינטטי 3 אגוניסט carboxymethylcellulose חומצה פולי-L-ליזין Polyinosinic-Polycytidylic (פולי-ICLC) כדי לעורר את DCS. המחקר הקודם שלנו הוקם שפולי-ICLC הוא גירוי התבגרות הפרט החזק ביותר לDCs אדם כפי שהוערך על ידי גברת ביטוי של CD83 וCD86, אינדוקציה של interleukin-12 (IL-12), גורם נמק גידול (TNF), אינטרפרון גאמא-Induced חלבון 10 (IP-10), 1 interleukmin (IL-1), וסוג שהאינטרפרונים (IFN), והמינימאלי אינטרלוקין 10 (IL-10) ייצור. </p&gt; DCs הם מובחנים מתאי קפואים דם היקפי (mononuclear PBMCs) המתקבלים על ידי leukapheresis. PBMCs מבודד על ידי צנטריפוגה שיפוע Ficoll וקפוא בaliquots. ביום 1, PBMCs הם הפשירו ומצופה על צלוחיות תרבית רקמה כדי לבחור למונוציטים שנצמדים למשטחי הפלסטיק לאחר דגירה 1-2 שעות על 37 מעלות צלזיוס בתרבית רקמת החממה. לאחר דגירה, הלימפוציטים הם לשטוף ומונוציטים חסיד בתרבית במשך 5 ימים בנוכחות של interleukin-4 (IL-4) וגורם מגרה מקרופאג&#39;ים מושבה granulocyte (GM-CSF) כדי לבדל לDCs בשלה. ביום 6, DCS בשלה הם פעמו עם חלבון hemocyanin עלוקת חור המנעול (KLH) המשמש כבקרה לאיכות של החיסון ועלולים להגביר את התגובה החיסונית של החיסון 3. את DCs מומרצים להבשיל, עמוס אנטיגנים פפטיד, וטופחו במשך הלילה. ביום 7, התאים נשטפים, וקפוא ב1 aliquots מ&quot;ל המכיל4 - 20 x 10 6 תאים באמצעות מקפיא מבוקר שיעור. בדיקות שחרורו הרבה לקבוצות של DCs מבוצעת וחייבות לעמוד במפרט מינימאליים לפני שהם מוזרקים לחולים.

בין 10 ל - 20% של PBMCs מתחיל להתמיין DCs בסוף תקופת התרבות. DCs בוגרת הן CD11c +, CD14-, CD83 +, CD40 +, וCCR7 + (איור 1). הם מבטאים רמות גבוהות של MHC כיתה אני ומולקולות השנייה ואת מולקולות costimulatory CD80 ו CD86. Poly-ICLC גם מושרה רמות נמוכות יותר של PDL-1, בהשוואה לאגוניסטים TLR האחרים 14. בנוסף, סכומים אלה Poly-IC-הבשיל DCs מפרישים הגדולים של IL-12 (איור 2 ו15,16) ולגרום להתפשטות של תאי T אלוגנאית (איור 3).</...

השיטה הנפוצה ביותר להפקת כמויות גדולות של תאים דנדריטים אוטולוגי (DCS) לשימוש באימונותרפיה גידול מתוארת. השיטה משתמשת IL-4 ו-GM-CSF להבדיל מDCs מונוציטים. את DCs הבוסר הוא גירוי לבוגרת ולאחר מכן נטען עם אנטיגנים לפני שהם מוזרקים חזרה לחולה.

הכנת תאים דנדריטים גידול Antigen טעון בוגרים לחיסוניים

While clinical studies have established that antigen-loaded DC vaccines are safe and promising therapy for tumors 1, their clinical efficacy remains to be ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא להדגים את הכנתם של תאים דנדריטיים בדרגה קלינית עבור אימונותרפיה. דבר זה מושג תחילה על ידי הקפאת תאים מונונוקלאריים של דם פריפריאלי (pbmc) שבודדו באמצעות לוקאפרזה. בשלב השני, המנות ההקפאה של ה-pbmc מופשרות והמונוציטים מובחנים לתאים דנדריטיים בנוכחות G-M-C-S-F ו-IL-4 למשך חמישה ימים.בשלב הבא, קוצרים את התאים הדנדריטיים, מחשבים אותם עם פפטידים, ומבצעים הבשלה למשך לילה באמצעות האגוניסט של TLR 3, poly ICLC. בשלב הסופי, קוצרים את התאים הדנדריטיים הבשלים ומקפיאים אותם במנות (aliquots). ניתן להפשיר מנות קפואות אלו של תאים דנדריטיים בשלים, להעבירן למזרקים ולהזריקן בחזרה למטופלים כחלק מהטיפול האימונותרפי שלהם.את הפרוצדורה יעגילו sedia ו-farra Hassan, שניהם טכנאי מחקר במעבדתי. באמצעות סט להעברת פלזמה, התחילו בהזרקה אספטית לאחד מנקודות הגישה בשק הלוקאפרוזיס. לאחר מכן, השתמשו במזרק של 60 milliliter כדי להעביר את הלוקאפרוזיס לבקבוק סטרילי של 500 milliliter. לאחר מכן, באמצעות RPMI בטמפרטורת החדר, התאימו את נפח הלוקאפרוזיס למכפלה של פעמיים מהנפח המקורי וערבבו היטב. לאחר ערבוב עדין של בקבוק fial pack plus, הוסיפו 12 milliliters מהתמיסה לשפופרות קוניות סטריליות של 50 milliliter, ולאחר מכן שכבדו בזהירות 30 milliliters של תוצר הלוקאפרוזיס המדולל לתוך כל שפופרת של fial.הקפידו לא להפריע לממשק שבין ה-FI call לתליה התאית. סובב את המבחנות בצנטריפוגה למשך 20 דקות ב-1000 GS ובטמפרטורת החדר ללא הפסקה (no break). לאחר מכן, אספו בזהירות את השכבה העכורה של ה-pbmc מכל מבחנה והעבירו אותה למבחנות סטריליות חדשות של 50 milliliter.בשלב הבא, הוסיפו RPMI לכל מבחנה עד לנפח סופי של 50 milliliters, ולאחר מכן ערבבו בעדינות את תרחיפי התאים על ידי הפיכה. לאחר סבב צנטריפוגה של התאים למשך 10 דקות ב-500 Gs ובטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס, הסירו את העלייה מכל מבחנה והשעיו מחדש את משקעי התאים מכל מבחנה ב-RPMI עד לנפח סופי של 50 milliliters. לאחר ערבוב עדין של המבחנות על ידי הפיכה, קבעו את מספר התאים ואת חיוניותם.בשלב הבא, סבב את התאים בצנטריפוגה והשהה מחדש את המשקע במדיום הקפאה שהוכן טרי בריכוז סופי של 2 × 10⁸ תאים למילליליטר. העבר 1 mL של תמיסת התאים למבחנות הקפאה (cryo vials) בנפח של 1.8 mL. לאחר מכן, העבר את מבחנות ההקפאה למקפיא בקצב מבוקר והפעל את תהליך ההקפאה. עם סיום התהליך, העבר את מבחנות ההקפאה הקפואות באופן מיידי לשלב האדים של מקפיא חנקן נוזלי.ביום למחרת, הפשיתו את המכסות של ה-p BMCs הקפואים באמבט מים בטמפרטורה של 37 °C תוך כדי ערבוב עדין. לאחר הפשרה מלאה, העבירו את תכולת המבחנות לשפופרות קוניות סטריליות בנפח 50 milliliter המכילות 30 milliliters של RPMI ופלזמה אוטולוגית. סבבו את התאים בצנטריפוגה. השביו בזהירות את משקע התאים בנפח קטן של RPMI בתוספת פלזמה אוטולוגית.לאחר מכן, הוסיפו RPMI נוסף בתוספת פלזמה אוטולוגית עד לנפח סופי של 50 milliliters. לאחר ערבוב יסודי של התליות, זרעו 1.4 times 10 to the eight תאים ב-40 milliliters של RPMI בתוספת פלזמה אוטולוגית אל תוך Easy flask של 225 centimeter squared. דגרו את ה-easy flask כשהוא מונח שטוח על צדו למשך שעה עד שעתיים ב-37 degrees Celsius באינקובטור לתרביות רקמה המכיל 5%carbon dioxide, כדי לאפשר למונוציטים להיצמד לבקבוק. בסיום הדגירה, שטפו את ה-easy flask פעמיים עם 30 milliliters של RPMI שחומם מראש כדי להסיר את התאים שאינם נצמדים.לאחר השטיפה השנייה, הוסף לתאים 40 milliliters של RPMI בתוספת פלזמה אוטולוגית עם IL-4 ו-G-M-CSF, ולאחר מכן הדגר את בקבוק ה-EASI למשך יומיים בטמפרטורה של 37 °C וב-5% carbon dioxide. חמישה ימים מאוחר יותר, סחרר את הבקבוקים בעוצמה ובצע פיפטינג (pipet up and down) כדי לתלות מחדש את התאים. העבר את התאים הלא-נ adherent ואת התאים בעלי ההיצמדות הרפויה אל מבחנות קוניות חדשות של 50 milliliters.לאחר סבב צנטריפוגה להורדת התאים, נשעה את משקעי התאים ב-50 milliliters של RPMI בתוספת פלסמה אוטולוגית. לאחר ערבוב ושטיפה של תלולות התאים, נזרע 1-2 × 10⁶ תאים למבב ב-3 milliliters של RPMI בתוספת פלסמה אוטולוגית עם IL-4 ו-GM-CSF בצלחות תרבית רקמה בעלות 6 מבבבים, ולאחר מכן נדגרו את הצלחות ב-37 °C באינקובטור לתרבית רקמה המכיל 5% carbon dioxide למשך לילה. למחרת, נוסיף 10 µg/mL של KLH לשליש מהמבבבים בצלחות התרבית בעלות 6 המבבבים, ונערבב את הצלחות באמצעות סיבוב.לאחר מכן, הוסיפו לבארות 2 µg/mL של poly ICLC וערבבו היטב. בשלב הבא, הוסיפו 100 µg/mL של אנטיגנים פפטידיים ארוכים לבארות הייעודיות להם, כאשר כל באר מקבלת פפטיד אחד בלבד כדי למנוע תחרות צולבת. לאחר מכן, דגרו את הפלטות למשך לילה בטמפרטורה של 37 °C באינקובטור לתרביות רקמה המכיל 5% CO2. ביום השביעי, קצרו ואספו למכל משותף את כל הבארות המכילות תאי דנדריטיים.ביום השישי, בצעו פולס עם הפפטידים בתוך מבחנות קוניות חדשות של 50 מיליליטר. לאחר סבב צנטריפוגה להסמכת התאים, השביו את משקעי התאים שנשאבו בחמישה מיליליטר של RPMI בתוספת פלזמה אוטולוגית, ולאחר מכן השלימו את הנפח הכולל ל-50 מיליליטר באמצעות RPMI בתוספת פלזמה אוטולוגית וערבבו את תגסוסי התאים ביסודיות. לאחר חישוב המספר הכולל של תאים חיוניים, צנטריפוגו את המבחנות, השביו כל משקע בחמישה מיליליטר של נתרן כלורי סטרילי ולאחר מכן רחצו כל תגסוס תאים פעמיים נוספות ב-14 מיליליטר של נתרן כלורי סטרילי.לאחר כל שטיפה, ערבבו את המבחנות לאחר השטיפה השנייה. השהו מחדש את משקעי התאים בתמיסת הקפאה לתאים דנדריטיים בריכוז של 4 עד 20 × 10⁶ תאים למילליליטר, וחלקו מנה של 1 מיליליטר מכל תרחיף תאים למבחנות הקפאה (cryo tube vials) בנפח 1.8 מיליליטר. לבסוף, השתמשו במקפיא בקצב קירור מבוקר (controlled rate freezer) להקפאת המנות של חיסוני התאים הדנדריטיים, והעבירו את המנות מיד לשלב האדים של מקפיא חנקן נוזלי לאחסון לטווח ארוך.בין 10% ל-20% מה-p BMCs ההתחלתיים מבדלים לתאי דנדריטיים בסוף תקופת התרבית. הבשלת התאים הדנדריטיים בתגובה ל-poly ICLC, המיוצגת על ידי הקווים המודגשים, הוערכה על סמך ביטוי של CD 83, CD 40 ו-CCR seven, והושוותה לתאים דנדריטיים לא מעוררים המיוצגים על ידי הגוונים האפורים כפי שמוצג בגרפים של עמודי גרף אלה; תאים דנדריטיים שהבשילו באמצעות poly IIC בניסוי זה, אשר הובדלו משלושה תורמים בריאים, מפרישים כמויות גדולות של IL six, IL eight, IL 12 ו-TNF alpha. תאים אלו, שהבשילו באמצעות poly ICLC, משרים גם פרוליפרציה של תאי T אלוגנאיים כפי שמעיד ביטוי של CFSE, וכן ייצור של interferon gamma לאחר התפתחותם.טכניקה זו סללה את הדרך עבור חוקרים בתחום האימונולוגיה לבחון את השימוש בתאים דנדריטיים עבור אימונותרפיה בסרטן ובמחלות זיהומיות.

preparation-tumor-antigen-loaded-mature-dendritic-cells-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

וידאו זה מדגים את נוהל המבדילים תאים דנדריטים מיאלואידית ממח העצם העכבר. בידוד של השוקה העכבר הירך, ועיבוד של מח העצם הם הפגינו. תמונות הוכחת מורפולוגיה תא לפני ואחרי בידול, דמויות המתארות פנוטיפ התא IL-12 בייצור התבגרות הבאות באמצעות CPG מוצגים.

התרבות של תאים דנדריטים מיאלואידית מ מבשרי מח עצם

מצגת Antigen באיברים הלימפה משני על ידי התאים הדנדריטים הוא קריטי עבור ייזום של תא T בתיווך תגובה חיסונית אדפטיבית. כאן אנו מדגימים את התרבות של מוח העצם נגזר תאים דנדריטים Murine, הפעלה, וסימון עבור הדמיה 2-פוטון.

הדור של מח עצם נגזר תאים דנדריטים Murine לשימוש 2-פוטון הדמיה

מוערך במארחים חיסוניים סינגניים, תא גזע סרטני (CSC) מבוסס תאים דנדריטיים (DC) החיסון הפגין חסינות antitumor גבוהה משמעותית מאשר חיסונים DC מסורתיים פעמו עם תאים סרטניים בתפזורת הטרוגנית.

יצירת חיסון חדשני לתאים דנדריטיים באמצעות מלנומה ותאי גזע סרטניים קשקשיים

ניתן להתמיין באופן סלקטיבי לתאים דנדריטיים טולרוגניים או בוגרים כדי לווסת את האיזון בין חסינות לסבילות. עבודה זו מציגה אמצעי ליצירת תאים דנדריטיים לא בשלים שמקורם במונוציטים (moDCs), moDCs טולרוגניים ובוגרים במבחנה הנבדלים זה מזה בפנוטיפים מטבוליים.

הדור של בוגר, בוגרת Tolerogenic דנדריטים תאים, עם שינוי פנוטיפים מטבולית

נגזר מונוציט DC (MoDC) יכול לחוש כמויות זעירות של מולקולות הקשורות סכנה, ולכן טענתי בקלות. אנו מספקים פרוטוקול מפורט בידודו של MoDC של דם וגידולים שלהם הפעלה עם מכלולים חיסוניים תוך הדגשת מפתח הזהירות הנחשבות על-מנת למנוע הפעלה מוקדמת שלהם.

בידוד פרוטוקול של העכבר נגזר מונוציט תאים דנדריטים והפעלה שלהם עוקבות במבחנה עם מכלולים חיסוניים הגידול

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לפתח, איפיון תאים דנדריטים tolerogenic (TolDCs), להעריך את השירות immunotherapeutic שלהם.

פיתוח ואפיון פונקציונאלי של תאים דנדריטים מאתר Tolerogenic

התקן (TI) המכשיר או הלוח הקשורים הפרוטוקולים פותחו כדי לשכפל את התכונות העיקריות של כימותרפיה לחילוץ (ECP), בהגדרה ניסיונית, המאפשר ייצור של המופעל מבחינה פיזיולוגית, הדנדריטים הניתנים להפעלה תאים (DCs) עבור חיסוני סרטן.

הפרוטוקול הרומן ליצירת תאי הדנדריטים הפיזיוגניים האימונולוגיים

כאן אנו מציגים שיטה חסכונית ויעילה לבודד וליצור תאים דנדריטיים שמקורם במח עצם בטוהר גבוה מעכברים לאחר 7 ימים של תרבית עם 10 ננוגרם/מ"ל GM-CSF/IL-4.

פרוטוקול חסכוני ויעיל לבידוד וגידול תאים דנדריטיים שמקורם במח העצם מעכברים

הפרוטוקול מציג מודל אימונותרפיה לסרטן באמצעות חיסון מבוסס תאים עם מלנומה B16-F10 המבטאת Flt3L. פרוטוקול זה מדגים את ההליכים, כולל הכנת תאי גידול בתרבית, השתלת גידול, הקרנת תאים, מדידת צמיחת הגידול, בידוד תאי חיסון תוך-גופיים וניתוח ציטומטריה של זרימה.

מודל אימונותרפיה ניסיוני למלנומה באמצעות חיסון לגידול עם ציטוקין המטופויאטי

מוצג פרוטוקול ייחודי ומקיף ליצירת תאים דנדריטיים אנושיים שמקורם במונוציטים אנושיים (mo-DCs) מתאי דם חד-גרעיניים היקפיים מבודדים (PBMCs) באמצעות טיפול בסיאלידאז. יתר על כן, מתוארות שיטות להערכת האפיון הפנוטיפי והפונקציונלי של mo-DCs ולהעריך כיצד טיפול בסיאלידאז משפר את רמת ההתבגרות של mo-DCs.

יצירת תאים דנדריטיים שמקורם במונוציטים עם פנוטיפים סיליליים שונים

פרוטוקול זה מתאר תכנות מחדש in vivo של תאי סרטן עכבר לתאים דמויי דנדריטי מסוג 1 בתוך מיקרו-סביבת הגידול באמצעות ביטוי מאולץ של גורמי השעתוק PU.1, IRF8 ו-BATF3.

תכנות מחדש של תאי גידול לתאים דמויי תאים דנדריטיים קונבנציונליים מסוג 1

למד הכנת תאים דנדריטים מונוציטים בוגרים טעוני אנטיגן לחיסוניות נגד סרטן באמצעות GM-CSF ו-IL-4. שיטה זו מאפשרת ייצור תאים אוטולוגיים באיכות קלינית לטיפול אימונותרפי מותאם אישית.

הכנת תאים דנדריטים גידול Antigen טעון בוגרים לחיסוניים

גלה סרטונים נוספים