מודל עכבר orthotopic של קרצינומה של בלוטת התריס אנפלסטית

המטרה הכוללת של הליך זה היא להדגים מיקום כירורגי של אנאפלסטי אנושי, קרצינומה של בלוטת התריס או תאי TC לתוך בלוטת התריס על מנת ליצור מודל עכבר קסנוגרפט אורתוטופי. זה מושג על ידי תרבית וקציר תאי TC. לאחר הכנת העכבר לניתוח, יש לחשוף את בלוטת התריס בשני חתכים אורכיים רצופים בצוואר ולהזריק את תאי ה-TC באיטיות לבלוטת התריס הימנית.

השלב האחרון הוא לסגור את החתכים בתפרים ולאפשר לעכבר להתאושש. בסופו של דבר, בדיקה היסטולוגית של דגימות מרקמות שנכרתו משמשת להצגת צמיחה ופלישה של גידול במגוון תנאים. היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות כגון השתלת קסנוגרפט תת עורית, הוא שהשתלה אורתוטופית מציבה תאי TC בנישה הביולוגית שלהם ומשכפלת מקרוב את התקדמות המחלה והפתולוגיה כפי שהיא מתרחשת בבני אדם.

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח כגון קביעת המנגנונים הביולוגיים של אגרסיביות סרטן בלוטת התריס. התחל הליך זה על ידי תרבית קו תאי A TC אנושי TJ 11 T בשש צלחות תרבית באר באמצעות מדיה משלימה RPMI 1640 יום אחד לפני קציר התאים כאשר התאים הם 70 עד 80% הפשרה משולבת, 0.01 מיליליטר של ג'ל גדול בארבע מעלות צלזיוס. קצור את התאים באמצעות טריפסין לאחר שהפכו ל-80 עד 90% לאחר שהתאים נקטפו, שאב את המדיה והשהה מחדש את התאים בשני מיליליטר של RPMI 1640 Media בתוספת עבור כל שש צלחת באר שנקטפה.

לאחר מכן, קבע את צפיפות התאים על ידי ערבוב תרחיף התאים אחד לאחד עם 0.4% צבע כחול טריאם קבע את צפיפות התאים באמצעות מונה תאים אוטומטי TC 10. חשב את נפח תרחיף התא הדרוש להזרקת 500,000 תאים לעכבר. ודא שיש תאים מתאימים זמינים להשתלה על ידי חישוב כפול ממספר השתלים המתוכננים.

העבירו את הנפח הנדרש של תרחיף התאים לצינור חרוטי של 15 מיליליטר. הצנטריפוגה הבאה ב -200 גרם למשך ארבע דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן שאפו את המדיה והשעו מחדש תאים ב-100 מיליון תאים למיליליטר במדיה משלימה RPMI 1640.

לאחר מכן, העבירו תאים לצינור של 1.6 מיליליטר. יש להוסיף נפח אחד של ג'ל מאטרי ולערבב בעדינות על ידי פיפטינג איטי פנימה והחוצה. הניחו את תרחיף התאים על קרח עד שיהיה צורך בו.

ראשית, יש לעקר את אזור הניתוח, הכולל את היקף החיתוך והאזור שמסביב על ידי ניגוב כל המשטחים באתנול 70%. לאחר מכן הכינו את אזור ההתאוששות על ידי הדלקת מנורות חימום והנחת רפידות סטריליות. הרדמו את העכבר והכינו אותו לניתוח על ידי גילוח אזור הצוואר של העכבר מקו הלסת לחלק העליון של עצם החזה והחוצה לכל זרוע.

לאחר מכן, הברג את אזור הניתוח שלוש פעמים על ידי החלפת ריבועי גאו ספוגים בכלורהקסידין ואתנול לסירוגין. ואז פעם אחרונה עם גזה ספוגה בבטדין. כמו כן, יש למרוח בעדינות משחת עיניים כדי למנוע התייבשות בעיניים.

בשלב זה, בדוק את רפלקס הדוושה כדי לוודא שהעכבר מורדם כראוי. לאחר מכן הנח את שכבת הגב של העכבר על מחסום שדה סטרילי חד פעמי. מתחת לטווח הניתוח, אבטח את העכבר במקומו בעזרת סרט בד.

לאחר מכן, שפשפו היטב את הידיים והציפורניים ולבשו כפפות כירורגיות סטריליות בצורה סטרילית, פתחו את חבילת הניתוחים וסדרו מכשירים. לבסוף, הניחו וילון סטרילי על העכבר, והשאירו רק את אתר הניתוח חשוף. התחל בביצוע חתך אורכי של סנטימטר עד 1.5 סנטימטר לאורך קו האמצע של הגרון באמצעות אזמל חד פעמי סטרילי.

אל תסטה מקו האמצע מכיוון שהדבר יגדיל את הסיכוי לחתך או ניתוק עורקים גדולים. בצע חתך שני בשרירי הרצועה המקיפים את קנה הנשימה. לאחר מכן משוך את הצד הימני של השריר החתוך הצידה, וחשוף את בלוטת התריס הימנית.

בקש מעוזר למסור את המזרק. הזריק אותו לאט לבלוטת התריס הימנית באמצעות מזרק אינסולין 31. לאחר מכן הסר בעדינות את תפר המחט יחד עם שכבת השריר עם חומר תפירה מונופילמנט ניילון שישה באמצעות סגנון תפירה מופרע.

לבסוף, תפר את העור באותו אופן לאחר הניתוח. יש למרוח שכבה של משחה אנטיביוטית משולשת ישירות על מקום החתך. אפשר לעכבר להתאושש בשכיבה הגבית מתחת למנורה.

ברגע שהעכבר יכול להשיג שכיבה חזה ללא סיוע, ניתן להחזיר אותו עם עכברים אחרים בכלוב שלו. בדוק את מקום החתך ואת הבריאות הכללית של העכבר מדי יום במשך שבוע לאחר הניתוח. לאחר מכן בדוק את זה פעם בשבוע.

אם בכל עת העכבר מראה סימנים של ירידה בבריאותו, יש להמית אותו ולאסוף את רקמותיו. לאחר שהעכברים הגיעו לנקודת זמן שנקבעה מראש לאחר הניתוח, יש להרדים עם קטמין וקסילזין ולהחדיר את החיה באיחור עם חיץ, ולאחר מכן קיבוע, ואז לקצור את הרקמות ולעבד אותן להיסטולוגיה. בלוטת התריס וקנה הנשימה מחיית ביקורת שלא הוזרקה מוצגים כאן עם זקיקי צביעת המטין ואאוזין מציגים קשר הדוק אך רופף ויש להם מורפולוגיה עגולה בעיקרה.

לעומת זאת, עכברים המקבלים זריקה אורתוטופית של 500,000 תאי TC A מראים חדירה משמעותית של תאים סרטניים לבלוטת התריס עד ארבעה שבועות לאחר ההזרקה. אופי התאים הפולשים מראה תאים אופייניים בצורת ציר ותאים בגודל בינוני עד ענק עם ציטופלזמה אאוזינופילית וגרעינים גדולים. בשל גודלה הקטן של בלוטת התריס והשימוש במתן הזרקה, עלולות להיווצר תוצאות לא מכוונות כגון התפתחות גוש גידול מחוץ לבלוטת התריס, אך לא מקיף אותה.

זאת בשל חדירת מחט דרך בלוטת התריס כאשר תאים נפלטים מדי פעם, עכברים המציגים ללא גידול גידול, הן מבחינה גסה והן מבחינה היסטולוגית מתגלים כפי שמוצג כאן. היעדר התפתחות גידול הניתנת לזיהוי נגרם על ידי הוצאת תרחיף התאים מאתר ההזרקה לרקמות וחללים שכנים לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך 20 דקות. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד ליצור מודל אורתוטופי משלך לקרצינומה אנאפלסטית של בלוטת התריס.

על ידי גישה כירורגית לבלוטת התריס והזרקת תאי C מתורבתים.