Name: מודל עכבר orthotopic של קרצינומה של בלוטת התריס אנפלסטית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-04-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: למד כיצד ליצור מודל אורתוטופי של קרצינומה אנפלסטית של בלוטת התריס בעכברים באמצעות השתלת תאים סרטניים אנושיים ישירות לבלוטת התריס. שיטה זו מאפשרת חקירה מדויקת של התקדמות המחלה ומנגנונים ביולוגיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות לבני זוג. Wenjun לי ודניאל קרייסל (בית הספר לרפואה של אוניברסיטת וושינגטון בסנט לואיס) על עזרתם באימון ניתוח. RYL נתמך על ידי המכון הלאומי לבריאות גרנט R01 DK068057 וקרן המחקר של נשיא אוניברסיטת סנט לואיס.

1. הכנת תא הערות: 1) מתכון מלא RPMI 1640 מבוסס תרבות תקשורת (500 מ&quot;ל) כולל 435 מ&quot;ל 1640 RPMI, 50 מיליליטר FBS מומת חום, 5 חומצות אמינו לא חיוני מ&quot;ל, פירובט נתרן 5 מ&quot;ל, 5 מיליליטר האנטיביוטיקה antimycotic, 2) מקום matrigel ב 4 ° C יום לפני קציר תא אחד. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שורת תאים האנושית ATC-11T THJ 8 גדלים ב6 צלחות תרבות היטב ונקטפו ברגע 80-90% ומחוברות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גלולה תאים על ידי צנטריפוגה ב XG 200 במשך 4 דקות בטמפרטורת חדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב תקשורת ותאי resuspend בתקשורת 1640 RPMI [צלחת גם 2 מ&quot;ל / 6]. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את נפח קטן של ההשעיה התא, להוסיף אותו לכרך אחד של 0.4% trypan כחול צבע ולקבוע צפיפות תאים באמצעות TC10 נגד תא אוטומטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חישוב נפח של השעיה תא צריכה לקבל 5 פי 10 5 תאים / עכבר x עכברי מספר הזרקה. </li></ol> הערה: כדי להבטיח שמודעה<html> להשוות את ההשעיה תא להזרקה, להכין תאים כאילו אתה הזרקה כפולה מספר העכברים (למשל, אם הזרקת 5 עכברים, ולאחר מכן להכין את ההשעיה תא כאילו היית הזרקת 10 עכברים). <ol start="6" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את הנפח דרוש של השעיה תא לתוך צינור חרוטי 15 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גלולה תאים על ידי צנטריפוגה ב XG 200 במשך 4 דקות בטמפרטורת חדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב תקשורת ותאי resuspend בתקשורת להשלים RPMI 1640. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת תאי צינור מ&quot;ל 1.6, להוסיף נפח של 1 matrigel ומערבבים בעדינות על ידי pipetting לאט פנימה והחוצה. </li></ol> הערה: כל עכבר יקבל 10 μl של קוקטייל ההשעיה / matrigel התא. מאז 5 x 10 5 תאים מרחפים בנפח 10 זריקות μl היו בשימוש בהצלחה בלימודי ATC orthotopic 9-10 הקודמים, השתמשנו בפרמטרים האלה בדוח זה. <ol start="10" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח השעיה תא על קרח עד מוכן לשימוש. </li></ol>_title &quot;&gt; 2. הכנת עכבר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את אזור הניתוח, הכולל את היקף הניתוחים ואזור שמסביב, על ידי ניגוב כל המשטחים עם 70% אתנול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל מנורות חימום / כריות שבו בעלי החיים יהיו מתאוששים מניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל 0.1 מ&quot;ל קטמין / xylazine (קוקטייל תרופות בהיקף של 9 קטמין מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​ו xylazine 1mg/ml) לintraperitoneally משקל הגוף גרם 10 באמצעות 1 מ&quot;ל, 27G ½ &quot;מזרק טוברקולין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכבר הכנה לניתוח: 1) לגלח את אזור צוואר של עכבר (מקו הלסת העליון של עצם חזה ולהחוצה לזרועות), 2) לשפשף אזור ניתוח שלוש פעמים עם ריבועי גזה ספוגים chorhexadine, 3) לשפשף סופי נעשה עם גזה ספוגה בטאדין, 4 ) בעדינות להחיל משחה העין כדי למנוע את העיניים מהתייבשות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדקו דוושת רפלקס כדי להבטיח עכבר מסומם במידה מספקת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח חיה שכיבה על גב מכשול שדה סטרילי הפנוי מתחת למשטח הביתור ולאבטח את החיה במקום עם סרט בד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ידי ו-F פילינגingernails ואז לשים את כפפות כירורגיות סטריליות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצורה סטרילית, ניתוח פתוח לארוז ולארגן את המכשירים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח וילון סטרילי על בעלי חיים, עוזב את האתר ניתוחי בלבד חשוף. </li></ol> 3. גישה ניתוחית לבלוטת התריס והזרקת תאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש סטרילי, אזמל חד פעמי, לעשות חתך אורכי 1 ל 1.5 ס&quot;מ לאורך קו האמצע של הגרון. </li></ol> הערה: סטייה מקו האמצע עמוק יותר מסבכת חיתוך כדי לגשת לקנה הנשימה. די חתך קו האמצע מדויק מאפשר לך להקניט ולחתוך את הרקמה הקרומית מחזיקה בלוטות רוק ימנית ושמאליות יחד ומפחית את הסיכוי לסחב או ניתוק עורקים גדולים. <ol start="2" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצוע חתך שני לתוך שרירי הרצועה המקיפים את קנה הנשימה ואז למשוך את הצד של השריר חרות הזכות לצד לחשוף את בלוטת התריס הימנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Hemostats יכול לשמש בשלב זה לקיים את שכבת השרירחלק לגישה קלה לבלוטת התריס (איור 1). </li></ol> הערה: לחלופין, אם הליך מבוצע על ידי שני אנשי צוות הכירורגי, שכבת השריר ניתן פשוט התאפקה עם מלקחיים תוך מזרק מוכן להזרקה הוא להתמנות למנתח על ידי צוות הסיוע. <ol start="4" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לאט להזריק 10 μl של השעיה תא לתוך בלוטת התריס הנכונה באמצעות מזרק אינסולין 31G 5/16 &quot;ואז בעדינות להסיר את המחט. </li></ol> 4. סגירתו של אתר כירורגית ושחזור מאוס <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שכבת שריר תפר עם חומר 6.0 תפירה או באמצעות סגנון תפירה רציף או קטוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפר העור באותו אופן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למרוח שכבה של משחה אנטיביוטית משולשת ישירות מעל אתר חתך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר לבעלי חיים כדי לשחזר שכיבה על גב כרית חימום חם. ברגע שבעלי חיים יכולים להשיג עינת חזה ללא סיוע, ניתן למקם אותו בחזרה עם עכברים אחרים. </li></ol> &lt;כיתת p = &quot;jove_title&quot;&gt; 5. מעקב לאחר ניתוח ואיסוף רקמות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדקו את אתר חתך ועל בריאות כללית של החיה ביום למשך שבוע לאחר ניתוח, ולאחר מכן לבדוק פעם בשבוע. אם התפרים הם עדיין שלמים אחרי 14 ימים, שהם יוסרו. </li></ol> הערה: בעלי חיים מציגים סימנים של ירידה בבריאות (למשל אובדן משמעותי במשקל, שיער מוזנח, נשימה מאומצת) צריכים להיות מורדמים ורקמות שנאספו. <ol start="2" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שעכברים הגיעו לנקודה זמן שלאחר ניתוח שנקבעה מראש, לנהל קטמין / xylazine כמו לתאר לעיל כדי להרדים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Perfuse חיה intracardially וקציר בלוטת התריס / קנה הנשימה וברקמות אחרות של עניין (אינו מתוארת בפירוט כאן). </li></ol>

<ol><li>Bibby, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+models+of+cancer+for+preclinical+drug+evaluation%3A+advantages+and+disadvantages%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Orthotopic models of cancer for preclinical drug evaluation: advantages and disadvantages.</a> Eur. J. Cancer. 40, 852-857 (2004).</li>
<li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+metastatic+mouse+models+for+anticancer+drug+discovery+and+evaluation%3A+a+bridge+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+New+Drugs%22%5BJournal%5D)">Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic.</a> Invest. New Drugs. 17, 343-359 (1999).</li>
<li>Killion, J. J., Radinsky, R., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+models+are+necessary+to+predict+therapy+of+transplantable+tumors+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Rev%22%5BJournal%5D)">Orthotopic models are necessary to predict therapy of transplantable tumors in mice.</a> Cancer Metastasis Rev. 17, 279-284 (1998).</li>
<li>Kim, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+orthotopic+model+of+anaplastic+thyroid+carcinoma+in+athymic+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">An orthotopic model of anaplastic thyroid carcinoma in athymic nude mice.</a> Clin. Cancer Res. 11, 1713-1721 (2005).</li>
<li>Nucera, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+orthotopic+mouse+model+of+human+anaplastic+thyroid+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">A novel orthotopic mouse model of human anaplastic thyroid carcinoma.</a> Thyroid. 19, 1077-1084 (2009).</li>
<li>Todaro, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumorigenic+and+metastatic+activity+of+human+thyroid+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Tumorigenic and metastatic activity of human thyroid cancer stem cells.</a> Cancer Res. 70, 8874-8885 (2010).</li>
<li>Tran Cao, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+of+tumor+progression+in+a+fluorescent+orthotopic+mouse+model+of+thyroid+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Res%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging of tumor progression in a fluorescent orthotopic mouse model of thyroid cancer.</a> Anticancer Res. 30, 4415-4422 (2010).</li>
<li>Marlow, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detailed+molecular+fingerprinting+of+four+new+anaplastic+thyroid+carcinoma+cell+lines+and+their+use+for+verification+of+RhoB+as+a+molecular+therapeutic+target%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Detailed molecular fingerprinting of four new anaplastic thyroid carcinoma cell lines and their use for verification of RhoB as a molecular therapeutic target.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 95, 5338-5347 (2010).</li>
<li>Nehs, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Late+Intervention+with+anti-BRAF+%28V600E%29+therapy+induces+tumor+regression+in+an+orthotopic+mouse+model+of+human+anaplastic+thyroid+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Late Intervention with anti-BRAF (V600E) therapy induces tumor regression in an orthotopic mouse model of human anaplastic thyroid cancer.</a> Endocrinology. 153, 985-994 (2012).</li>
<li>Nucera, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+BRAFV600E+with+PLX4720+displays+potent+antimigratory+and+anti-invasive+activity+in+preclinical+models+of+human+thyroid+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncologist%22%5BJournal%5D)">Targeting BRAFV600E with PLX4720 displays potent antimigratory and anti-invasive activity in preclinical models of human thyroid cancer.</a> Oncologist. 16, 296-309 (2011).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

<html> במודל שלנו, בעלי החיים הדגימו גרורות בלוטת התריס גידולים ומחלות הקשורות מצוקה ותשישות כרונית בדרכי הנשימה על ידי 4 שבועות לאחר ההזרקה. כמו ברוב הדגמים אחרים orthotopic ניצול מסירת זריקות של השעיה תא, זריקה לתוך רקמות הסובבות וזליגה לאחר ההזרקה שמתפשטת מעבר ליעד אפשרי. עם זאת נאמר, לא ידוע אחד לזיהוי פוטנציאל המיוצר על ידי הליך זה הוא ההשפעה של חשיפה ליעד את גרורות שאינן קשורות למחלה או לסיבוכים. זוהי דאגה כללית עם רוב השתלות xenographic, ללא קשר למחלה נחקרת. עם זאת, השלכות לא מכוונות מגרורות עשויים להיות ממוזערת באופן משמעותי על ידי הבטחת כל השיפוע של קצה המחט חדרה את הקרום בנוחות כיסה את בלוטת התריס וגירוש ההשעיה הסלולרית לאט. אם דליפה הוא ציין במהלך או לאחר ההזרקה, בעלי החיים אלה עשויים להיות מושמטים מהמחקר. ילדה = &quot;jove_content&quot;&gt; זה חיוני כי בעלי החיים הם perfused לפני קצירת בלוטת התריס / קנה הנשימה וברקמות אחרות. היתרונות הם כפול, 1) תאי דם אדומים הם מטוהרים ולא יפריעו לי דגימות היסטולוגית ו -2) מורפולוגיה רקמות ויושרה נשמרות. יתר על כן, בלוטת התריס / קנה נשימה שיש לי resected או מסת tumorous המצורפת או קבור בתוכו יש לחתוך בצורה שניתן לזהות אתרים אנטומיים לפני שמוטבעים להכנה היסטולוגית. זה יפחית את הזמן באופן דרמטי הכנת דגימה. בדו&quot;ח זה אנו מתארים צמיחה מקומית ופלישה של גידול בבלוטת תריס מתקדם בעקבות הזרקת תאי orthotopic של ATC. ATC גרורות עשויות להיחקר על ידי ניתוח הכנות היסטולוגית של רקמות אחרות באמצעות כתמים היסטולוגית סטנדרטיים, כגון hematoxylin ו eosin, או על ידי ניצול אימונוהיסטוכימיה תא או סמנים רלוונטיים פתולוגיה. מערכת זו יכולה להיות מפותחת יותר על ידי Genetically שינוי תאי סרטן בבלוטת התריס עם כתבי הקרינה כך שהדמית חיה ניתן להשתמש כדי לפקח על גרורות ואת היעילות של טיפולים רפואיים.

<table><tbody><tr><td>RPMI 1640 מדיה לתרבית תאים</td><td>Mediatech</td><td>10-041-CV</td><td>מדיה ותוספים המשמשים תלויים בקו התאים</td></tr><tr><td>TC10 Automated Cell Counter</td><td>Bio-Rad</td><td>145-0001</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>354234</td><td></td></tr><tr><td>Graefe Forceps, משוננים; Slight Curve,</td> אזמל חד פעמי 4 אינץ' <td>Roboz</td><td>RS-5135</td><td></td></tr><tr><td>, מס' 15</td><td>Feather</td><td>2975#15</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק מחט Olsen Hegar - 4 &frac12; " עדין משונן</td><td>gSource</td><td>gS 21.5400</td><td></td></tr><tr><td>6-0 ניילון שחור מונופילמנט תפר</td><td>Surgical Specialties Corporation</td><td>1279B</td><td></td></tr><tr><td>כרית חימום, לשימוש חוזר, 8 אינץ' x 12 אינץ'</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>סרט בד, 1 אינץ' X 10 יארד</td><td>Medline</td><td>MIINON260101</td><td>לריסון עכבר מורדם</td></tr><tr><td>קוצץ בוטנים / גוזם</td><td>Wahl</td><td>8655</td><td>להסרת שיער מאתר הניתוח</td></tr><tr><td>ChlorHex-Q SCRUB 2%</td> <td>Penn Veterinary Supply</td><td>VED1222</td><td></td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Henry Schein Company</td><td>6906727</td><td></td></tr><tr><td>משחת עיניים Petrolatum</td><td>Dechra Veterinary Products</td><td>17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>2 x 2 גזה, 12 שכבות</td><td>באטלר אספקת בריאות בעלי חיים</td><td>6936</td><td></td></tr><tr><td>שדה סטרילי, מחסום, 18 אינץ' x 26"</td><td>Busse</td><td>696</td><td></td></tr><tr><td>וילונות (עטיפת CSR)</td><td>Cardinal Health</td><td>AT 21 412</td><td></td></tr><tr><td>27G &frac12; " מחט</td><td>בקטון, דיקינסון ושות</td>' <td>309623</td><td></td></tr><tr><td>31 גרם 5/16 אינץ' מחט</td><td>בקטון, דיקינסון ושות'</td><td>328438</td><td></td></tr><tr><td>קטמין (9 מ"ג/מ"ל) / קסילזין (1 מ"ג/מ"ל) משחה</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td></td><td></td><td></td><td>אנטיביוטית משולשת</td></tr></tbody></table>

מודל עכבר orthotopic של קרצינומה של בלוטת התריס אנפלסטית

An Orthotopic Mouse Model of Anaplastic Thyroid Carcinoma

מספר סוגים של מודלים של בעלי חיים של קרצינומה של בלוטת התריס אדם כבר הוקמו, ובכלל זה תת עורי וxenograft השתלת orthotopic של תאים סרטניים לעכברים immunodeficient. המודלים xenograft תת עורי היו יקרים להקרנה והערכה של טיפולים פרה טיפוליים חדשים. ישנם מספר היתרונות לשימוש במודל תת עורית; 1) מהיר, 2) לשחזור, ו3) הקמת גידול, צמיחה, ותגובה לסוכנים טיפוליים עשויים להיות במעקב על ידי בדיקה חזותית. עם זאת, ראיות משמעותיות יש לשפוך אור על בואם קצר של דגמי xenograft תת עורי 1-3. לדוגמה, טיפולים רפואיים הממחישים תכונות המרפאות במודלי xenograft תת עורי לעתים קרובות אין להם השפעה ניכרת על המחלה האנושית. Microenvironment של האתר של השתלת xenographic או הזרקה טמון בלבו של שוני זה. מודלים xenograft סרטניים Orthotopic לספק biolo יותרהקשר רלוונטי gically שבו ללמוד את המחלה. היתרונות של השתלת תאים חולים או רקמות למקבילת המקור האנטומי שלהם בתוך חיה מארחת כוללים אתר מתאים לאינטראקציות גידול מארחות, התפתחות של גרורות הקשורים למחלה ואת היכולת לבחון את השפעת האתר ספציפית על תרופות טיפוליות ניסיוניות. לכן, מודלים xenograft orthotopic נמל ערך הרבה יותר קליני כי הם מתרבים מחלה אנושית באופן הדוק. מסיבות אלה, מספר הקבוצות ניצלו את מודל סרטן בלוטת התריס orthotopic ככלי מחקר 4-7. כאן, אנו מתארים את הגישה שקובעת מודל orthotopic לחקר סרטן בלוטת התריס אנפלסטית (ATC), שהוא פולשני מאוד, מתנגד לטיפול, וכמעט קטלני בכל החולים שאובחנו. תאים בתרבית ATC ערוכים להשעיה סלולרית מנותקת בתמיסה המכילה מטריצת קרום במרתף. נפח קטן הוא לאט injected לבלוטת התריס הנכונה. מראה כללי ובריאות של העכברים מנוטרים על מנת להבטיח סיבוכים שלאחר ניתוח מינימאליים וכדי לאמוד penetrance פתולוגית של הסרטן. עכברים הם הקריבו ב4 שבועות, ורקמות שנאספו לניתוח היסטולוגית. בעלי חיים עשויים להילקח בזמן מאוחר יותר לבחון את נקודות יותר מראש את התקדמות המחלה. ייצור של מודל עכבר orthotopic זו יוצר פלטפורמה שמשיגה שתי מטרות: 1) עוד יותר את ההבנה שלנו של ATC פתולוגיה, ו2) מסך סוכנים טיפוליים עכשוויים ועתידיים ליעילות במאבק ATC.

גילינו 19 גידולים בבלוטת התריס פולשניים מתוך סך של 20 עכברים הוזרקו תאי ATC לאחר 4 שבועות. בדוגמא שמוצגת באיור 2 א, עכברים שקבלו זריקת orthotopic של 5 תאי ATC 5x10 גדלו בתנאים מצורפים, תערוכת חדירה משמעותית של תאים סרטניים בבלוטת התריס על ידי 4 שבועות לאחר ההזרקה. אופיים של התאים הפולשים ATC עם תאים אופייניים מוארכים ותאים בינוניים עד ענק בגודל עם eosinophilic ציטופלסמה וגרעינים גדולים אומת על ידי hematoxylin ו eosin (H &amp; E) מכתים. לשם השוואה, בלוטת התריס וקנה הנשימה מחית שליטה שאינה המוזרקת מוצג באיור 2. זקיקים של החיה uninjected להציג קרובה, עדיין רופפת, ויש לי בעצם עמותת מורפולוגיה סיבוב. בשל גודלו הקטן של בלוטת התריס ושימוש במשלוח זריקות, תוצאות לא מכוונות שעלולות להתעורר. איור 3 א ממחישציינתי הנפוץ ביותר, שהוא הפיתוח של מסת גידול מחוץ, אבל לא מקיף, בלוטת התריס. זה יותר סביר להניח שעקב חדירת המחט דרך ומעבר לבלוטת התריס כאשר תאים גורשו. לפעמים, עכברים עם הצגה אין צמיחת גידול, הן גסות והיסטולוגיה, מזוהים כפי שמוצגים באיור 3. היעדר התפתחות גידול זיהוי יכול להיגרם על ידי גירוש של ההשעיה התא מאתר ההזרקה וההפצה לרקמות וחללים שכנות. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig1.jpg" alt="איור 1"/> איור 1. חשיפה של בלוטת התריס. תוויות מצביעות על בלוטת תריס ימין ושמאל משני צדי קנה נשימה. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig2.jpg" alt="איור 2"/> איור 2. בדיקה היסטולוגית של גידול ובדגימות רקמת vasion לאחר הזרקת בלוטת התריס מוצלחת. נותחו במישור העטרה.) תמונה שצולמה ב200X של עכבר מציג גידול משמעותי בתאים אופייניים מוארכים ותאים בינוניים עד ענק בגודל עם eosinophilic ציטופלסמה וגרעינים גדולים בhematoxylin ו eosin ( H &amp; E) כתם ט&quot;ו מציין את הנגע הראשוני שממנו התאים סרטניים לפלוש לבלוטת התריס ב &#39;) קנה נשימה ובלוטת תריס מבעלי החיים שליטה (תמונה נלקחה ב100X) ט&quot;ו, גידולים;... S, שריר חלק; Tr, קנה נשימה; Thy, בלוטת תריס. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig3.jpg" alt="איור 3"/> איור 3. תוצאות לא מכוונות של הזרקת orthotopic. דגימות רקמה נותחו במישור העטרה. גידול היקפי) ללא צמיחה ניכרה בthyroiחוסר גילוי גידול על ברוטו (לא מוצג) או בדיקה היסטולוגית ד (חץ שחור, תמונה שצולמה ב100X). ב) (תמונה צולמה ב50X). Thy, בלוטת תריס.

הדור של מודל עכבר orthotopic של קרצינומה של בלוטת התריס אנפלסטית מתואר כאן. טכניקה זו מעסיקה מיקום כירורגית של תאי סרטן בבלוטת התריס anaplastic אדם לבלוטת התריס של עכברי immunodeficient, ובכך ליצור אווירה יותר רלוונטית מבחינה קלינית ללמוד התקדמות מחלה, כמו גם התערבויות טיפוליות חדשניות מסך.

Several types of animal models of human thyroid carcinomas have been established, including subcutaneous xenograft and orthotopic implantation of cancer ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא להדגים מיקום כירורגי של אנאפלסטי אנושי, קרצינומה של בלוטת התריס או תאי TC לתוך בלוטת התריס על מנת ליצור מודל עכבר קסנוגרפט אורתוטופי. זה מושג על ידי תרבית וקציר תאי TC. לאחר הכנת העכבר לניתוח, יש לחשוף את בלוטת התריס בשני חתכים אורכיים רצופים בצוואר ולהזריק את תאי ה-TC באיטיות לבלוטת התריס הימנית.השלב האחרון הוא לסגור את החתכים בתפרים ולאפשר לעכבר להתאושש. בסופו של דבר, בדיקה היסטולוגית של דגימות מרקמות שנכרתו משמשת להצגת צמיחה ופלישה של גידול במגוון תנאים. היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות כגון השתלת קסנוגרפט תת עורית, הוא שהשתלה אורתוטופית מציבה תאי TC בנישה הביולוגית שלהם ומשכפלת מקרוב את התקדמות המחלה והפתולוגיה כפי שהיא מתרחשת בבני אדם.שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח כגון קביעת המנגנונים הביולוגיים של אגרסיביות סרטן בלוטת התריס. התחל הליך זה על ידי תרבית קו תאי A TC אנושי TJ 11 T בשש צלחות תרבית באר באמצעות מדיה משלימה RPMI 1640 יום אחד לפני קציר התאים כאשר התאים הם 70 עד 80% הפשרה משולבת, 0.01 מיליליטר של ג'ל גדול בארבע מעלות צלזיוס. קצור את התאים באמצעות טריפסין לאחר שהפכו ל-80 עד 90% לאחר שהתאים נקטפו, שאב את המדיה והשהה מחדש את התאים בשני מיליליטר של RPMI 1640 Media בתוספת עבור כל שש צלחת באר שנקטפה.לאחר מכן, קבע את צפיפות התאים על ידי ערבוב תרחיף התאים אחד לאחד עם 0.4% צבע כחול טריאם קבע את צפיפות התאים באמצעות מונה תאים אוטומטי TC 10. חשב את נפח תרחיף התא הדרוש להזרקת 500,000 תאים לעכבר. ודא שיש תאים מתאימים זמינים להשתלה על ידי חישוב כפול ממספר השתלים המתוכננים.העבירו את הנפח הנדרש של תרחיף התאים לצינור חרוטי של 15 מיליליטר. הצנטריפוגה הבאה ב -200 גרם למשך ארבע דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן שאפו את המדיה והשעו מחדש תאים ב-100 מיליון תאים למיליליטר במדיה משלימה RPMI 1640.לאחר מכן, העבירו תאים לצינור של 1.6 מיליליטר. יש להוסיף נפח אחד של ג'ל מאטרי ולערבב בעדינות על ידי פיפטינג איטי פנימה והחוצה. הניחו את תרחיף התאים על קרח עד שיהיה צורך בו.ראשית, יש לעקר את אזור הניתוח, הכולל את היקף החיתוך והאזור שמסביב על ידי ניגוב כל המשטחים באתנול 70%. לאחר מכן הכינו את אזור ההתאוששות על ידי הדלקת מנורות חימום והנחת רפידות סטריליות. הרדמו את העכבר והכינו אותו לניתוח על ידי גילוח אזור הצוואר של העכבר מקו הלסת לחלק העליון של עצם החזה והחוצה לכל זרוע.לאחר מכן, הברג את אזור הניתוח שלוש פעמים על ידי החלפת ריבועי גאו ספוגים בכלורהקסידין ואתנול לסירוגין. ואז פעם אחרונה עם גזה ספוגה בבטדין. כמו כן, יש למרוח בעדינות משחת עיניים כדי למנוע התייבשות בעיניים.בשלב זה, בדוק את רפלקס הדוושה כדי לוודא שהעכבר מורדם כראוי. לאחר מכן הנח את שכבת הגב של העכבר על מחסום שדה סטרילי חד פעמי. מתחת לטווח הניתוח, אבטח את העכבר במקומו בעזרת סרט בד.לאחר מכן, שפשפו היטב את הידיים והציפורניים ולבשו כפפות כירורגיות סטריליות בצורה סטרילית, פתחו את חבילת הניתוחים וסדרו מכשירים. לבסוף, הניחו וילון סטרילי על העכבר, והשאירו רק את אתר הניתוח חשוף. התחל בביצוע חתך אורכי של סנטימטר עד 1.5 סנטימטר לאורך קו האמצע של הגרון באמצעות אזמל חד פעמי סטרילי.אל תסטה מקו האמצע מכיוון שהדבר יגדיל את הסיכוי לחתך או ניתוק עורקים גדולים. בצע חתך שני בשרירי הרצועה המקיפים את קנה הנשימה. לאחר מכן משוך את הצד הימני של השריר החתוך הצידה, וחשוף את בלוטת התריס הימנית.בקש מעוזר למסור את המזרק. הזריק אותו לאט לבלוטת התריס הימנית באמצעות מזרק אינסולין 31. לאחר מכן הסר בעדינות את תפר המחט יחד עם שכבת השריר עם חומר תפירה מונופילמנט ניילון שישה באמצעות סגנון תפירה מופרע.לבסוף, תפר את העור באותו אופן לאחר הניתוח. יש למרוח שכבה של משחה אנטיביוטית משולשת ישירות על מקום החתך. אפשר לעכבר להתאושש בשכיבה הגבית מתחת למנורה.ברגע שהעכבר יכול להשיג שכיבה חזה ללא סיוע, ניתן להחזיר אותו עם עכברים אחרים בכלוב שלו. בדוק את מקום החתך ואת הבריאות הכללית של העכבר מדי יום במשך שבוע לאחר הניתוח. לאחר מכן בדוק את זה פעם בשבוע.אם בכל עת העכבר מראה סימנים של ירידה בבריאותו, יש להמית אותו ולאסוף את רקמותיו. לאחר שהעכברים הגיעו לנקודת זמן שנקבעה מראש לאחר הניתוח, יש להרדים עם קטמין וקסילזין ולהחדיר את החיה באיחור עם חיץ, ולאחר מכן קיבוע, ואז לקצור את הרקמות ולעבד אותן להיסטולוגיה. בלוטת התריס וקנה הנשימה מחיית ביקורת שלא הוזרקה מוצגים כאן עם זקיקי צביעת המטין ואאוזין מציגים קשר הדוק אך רופף ויש להם מורפולוגיה עגולה בעיקרה.לעומת זאת, עכברים המקבלים זריקה אורתוטופית של 500,000 תאי TC A מראים חדירה משמעותית של תאים סרטניים לבלוטת התריס עד ארבעה שבועות לאחר ההזרקה. אופי התאים הפולשים מראה תאים אופייניים בצורת ציר ותאים בגודל בינוני עד ענק עם ציטופלזמה אאוזינופילית וגרעינים גדולים. בשל גודלה הקטן של בלוטת התריס והשימוש במתן הזרקה, עלולות להיווצר תוצאות לא מכוונות כגון התפתחות גוש גידול מחוץ לבלוטת התריס, אך לא מקיף אותה.זאת בשל חדירת מחט דרך בלוטת התריס כאשר תאים נפלטים מדי פעם, עכברים המציגים ללא גידול גידול, הן מבחינה גסה והן מבחינה היסטולוגית מתגלים כפי שמוצג כאן. היעדר התפתחות גידול הניתנת לזיהוי נגרם על ידי הוצאת תרחיף התאים מאתר ההזרקה לרקמות וחללים שכנים לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך 20 דקות. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד ליצור מודל אורתוטופי משלך לקרצינומה אנאפלסטית של בלוטת התריס.על ידי גישה כירורגית לבלוטת התריס והזרקת תאי C מתורבתים.

an-orthotopic-mouse-model-of-anaplastic-thyroid-carcinoma

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

שתי טכניקות שניתן להשתמש בהם כדי לבסס את המודל הזה: הזרקה של השעיה תא סרטני בקיר cecal או השתלה של פיסת גידול תת עורי על cecum. מודל זה שימושי לחקר התפתחות טבעית של סרטן המעי הגס בדיקות סוכני טיפולית חדשה נגד סרטן המעי הגס.

עכבר דגם orthotopic של סרטן המעי הגס

דגם orthotopic של סרטן השחלות הצפק ב עכברים immunocompetent עבור In vivo הדמיה ניטור הגידול של המערכת החיסונית גידול

הסרטון מדגים את טכניקת החיסון האורתוטופית לסרטן השד במודל עכבר. טכניקה זו מייצרת שיעור גידול גבוה עם פחות שונות בגודל הגידול וצורתו בהשוואה להזרקה תת עורית או לא ניתוחית.

הזרקה אורתוטופית: השתלת תאים סרטניים ספציפיים לרקמה בעכבר בוגר

סרטון זה מתאר את הליך החיסון האורתוטופי של תאי סרטן בלוטת התריס לבלוטת התריס של מודלים עכבריים, אשר עשוי לשמש פלטפורמה רבת ערך להערכת סרטן וגילוי אסטרטגיות טיפול פוטנציאליות.

חיסון אורתוטופי של תאי סרטן בלוטת התריס לתוך בלוטת התריס מורין: הליך להקמת מודל עכבר אורתוטופי לסרטן בלוטת התריס

מודל גידול ראשוני orthotopic סרטן השד סר כירורגית של גידול ראשוני כדי להאריך את חיי עכבר כדי ליצור גרורות ספונטניות מתוארים. גידול הגידול ולהתפתחותו מנוטר לכמת ידי דימות פלואורסצנטי בלוציפראז.

במודל עכבר orthotopic של שד ספונטני סרטן גרור

סרטן הערמונית הוא הגורם השני בשכיחותו למקרי מוות הקשורים לסרטן בארצות הברית. מודל סרטן אורתוטופי מספק גישה שימושית להבנת הביולוגיה של סרטן הערמונית ולהערכת היעילות של משטרי טיפול. פרוטוקול זה מתאר את השלבים המפורטים הדרושים להקמת מודל עכבר אורתוטופי לסרטן הערמונית.

דגם Murine Orthotopic פרה-קליני של סרטן ערמונית האדם

בהקשר הקליני, חולים עם סרטן הלבלב מקומי יעברו כריתת לבלב ואחריו טיפול אדג'ובנטי. פרוטוקול זה שדווח כאן נועד לבסס שיטה בטוחה ויעילה של מידול תרחיש קליני זה בעכברים עירומים, באמצעות השתלה אורתוטופית של סרטן הלבלב ואחריו כריתת לבלב דיסטלית וכריתת טבור.

מודל עכבר כריתה אורתוטופי של סרטן הלבלב

כאן, אנו מציגים צינור סטנדרטי להשגת גידולי ATC מורין על ידי מודלים עכבריים מהונדסים גנטית ספונטניים. יתר על כן, אנו מציגים דינמיקה של הגידול ומידע פתולוגי על הנגעים הראשוניים והגרורות. מודל זה יסייע לחוקרים להבין גידולים ולהקל על תגליות תרופות.

מודל מורין ספונטני של סרטן בלוטת התריס אנאפלסטי

נקבעו מספר סוגים של מודלים של בלוטת התריס של השימוטו, כמו גם דלקת אוטואימונית ספונטנית של בלוטת התריס בעכבר NOD. עכברי H-2h4 הם מודל פשוט ואמין להשראת HT. מאמר זה מתאר גישה זו ומעריך את התהליך הפתולוגי להבנה טובה יותר של מודל SAT murine.

יצירת עכבר מודל אוטואימוני ספונטני של בלוטת התריס

הפרוטוקול הנוכחי מתאר אולטרה-סאונד בתדירות גבוהה להדמיית בלוטת התריס כולה של העכבר ולמעקב אחר צמיחת קרצינומה אנפלסטית של בלוטת התריס.

אולטרה-סאונד ברזולוציה גבוהה לניתוח גידולי ATC אורתוטופיים במודל עכבר מהונדס גנטית

הפרוטוקול הנוכחי מבסס ומאפיין מודל קסנוגרפט נגזר ממטופל (PDX) של קרצינומה אנפלסטית של בלוטת התריס (ATC) וקרצינומה של תאי קשקש בראש ובצוואר (HNSCC), כאשר מודלים של PDX הופכים במהירות לסטנדרט בתחום האונקולוגיה התרגומית.

הקמה ואפיון של מודלים של קסנוגרפט שמקורם במטופל של קרצינומה אנפלסטית של בלוטת התריס וקרצינומה של תאי קשקש בראש ובצוואר

למד כיצד ליצור מודל אורתוטופי של קרצינומה אנפלסטית של בלוטת התריס בעכברים באמצעות השתלת תאים סרטניים אנושיים ישירות לבלוטת התריס. שיטה זו מאפשרת חקירה מדויקת של התקדמות המחלה ומנגנונים ביולוגיים.

מודל עכבר orthotopic של קרצינומה של בלוטת התריס אנפלסטית

גלה סרטונים נוספים