Name: רנא באתר הכלאה בעוברי הר שלמים והיסטולוגיה הסלולרית מותאמת לElasmobranchs הימי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-04-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 13 s
Description: למדו הכלאת RNA in situ בעוברי אלסמוברנקים ימיים שלמים בשילוב היסטולוגיה לחקר ביטוי גנים והחלטות גורל תאיות. שיטה זו מספקת מסגרת אמינה למחקר ביולוגיה התפתחותית ורפואה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אני רוצה להודות לסטודנטים לתואר הראשון הרבים שעבדו במעבדה שלי ותרמו להתפתחות של פרוטוקולים אלה. NAT קבל תמיכה מסקידמור-איחוד הרשת, פרויקט שהוקם עם ADVANCE NSF שולם מענק.

<ol><li>Forester, R., Goldstein, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+osmoregulatory+role+of+amino+acids+and+urea+in+marine+elasmobranchs%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Intracellular osmoregulatory role of amino acids and urea in marine elasmobranchs.</a> Am. J. Physiol. 230, 925-931 (1976).</li>
<li>Shuttleworth, T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aShuttleworth%2C+T+%22Physiology+of+elasmobranch+fishes%22">Physiology of elasmobranch fishes</a>. Shuttleworth, R. , Springer-Verlag. 171-194 (1988).</li>
<li>Yancey, P. H., Clark, M. E., Hand, S. C., Bowlus, R. D., Somero, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Living+with+water+stress%3A+evolution+of+osmolyte+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Living with water stress: evolution of osmolyte systems.</a> Science. 217, 1214-1222 (1982).</li>
<li>Ballatori, N., Villalobos, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+molecular+and+cellular+basis+of+toxicity+using+comparative+models%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicl.+Appl.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Defining the molecular and cellular basis of toxicity using comparative models.</a> Toxicl. Appl. Pharmacol. 183, 207-220 (2002).</li>
<li>Nieto, M. A., Patel, K., Wilkinson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+hybridization+analysis+of+chick+embryos+in+whole+mount+and+tissue+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">In situ hybridization analysis of chick embryos in whole mount and tissue sections.</a> Methods Cell Biol. 51, 219-235 (1996).</li>
<li>Jass, J. R., Walsh, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+mucin+expression+in+the+gastrointestinal+tract%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Altered mucin expression in the gastrointestinal tract: a review.</a> J Cell Mol Med. 5, 327-351 (2001).</li>
<li>Ballard, W. W., Mellinger, J., Lechenault, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+series+of+normal+stages+for+development+of+Scyliorhinus+canicula%2C+the+lesser+spotted+dogfish+%28Chondrichthyes%3B+Scyliorhinidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Zool%22%5BJournal%5D)">A series of normal stages for development of Scyliorhinus canicula, the lesser spotted dogfish (Chondrichthyes; Scyliorhinidae).</a> J. Exp. Zool. 267, 318-336 (1993).</li>
<li>Echelard, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sonic+hedgehog%2C+a+member+of+a+family+of+putative+signaling+molecules%2C+is+implicated+in+the+regulation+of+CNS+polarity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Sonic hedgehog, a member of a family of putative signaling molecules, is implicated in the regulation of CNS polarity.</a> Cell. 75, 1417-1430 (1993).</li>
<li>Riddle, R. D., Johnson, R. L., Laufer, E., Tabin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sonic+hedgehog+mediates+the+polarizing+activity+of+the+ZPA%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Sonic hedgehog mediates the polarizing activity of the ZPA.</a> Cell. 75, 1401-1416 (1993).</li>
<li>Theodosiou, N. A., Hall, D. A., Jowdry, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+acid+mucin+goblet+cell+distribution+and+Hox13+expression+patterns+in+the+developing+vertebrate+digestive+tract%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Zool.+B.+Mol.+Dev.+Evol%22%5BJournal%5D)">Comparison of acid mucin goblet cell distribution and Hox13 expression patterns in the developing vertebrate digestive tract.</a> J. Exp. Zool. B. Mol. Dev. Evol. 308, 442-453 (2007).</li>
<li>Sambrook, J., Russell, D. W. Ch. 7. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSambrook%2C+J+%22Molecular+Cloning%3B+A+Laboratory+Manual%22">Molecular Cloning; A Laboratory Manual</a>. 1, Cold Spring Harbor Laboratory Press. 7.82(2001).</li>
<li>Zhang, G., Miyamoto, M. M., Cohn, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lamprey+type+II+collagen+and+Sox9+reveal+an+ancient+origin+of+the+vertebrate+collagenous+skeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Lamprey type II collagen and Sox9 reveal an ancient origin of the vertebrate collagenous skeleton.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 3180-3185 (2006).</li>
<li>Sheehan, D. C., Hrapchak, B. B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSheehan%2C+DC+%22Theory+and+practice+of+histotechnology%22">Theory and practice of histotechnology</a>. , 2, Battelle Press. (1980).</li>
<li>Theodosiou, N. A., Simeone, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+of+a+rudimentary+colon+in+the+elasmobranch%2C+Leucoraja+erinacea%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Evidence of a rudimentary colon in the elasmobranch, Leucoraja erinacea.</a> Dev. Genes Evol. 222, 237-243 (2012).</li>
<li>Filipe, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucins+in+the+human+gastrointestinal+epithelium%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Cell+Pathol%22%5BJournal%5D)">Mucins in the human gastrointestinal epithelium: a review.</a> Invest. Cell Pathol. 2, 195-216 (1979).</li>
<li>Corfield, A. P., Wagner, S. A., Clamp, J. R., Kriaris, M. S., Hoskins, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucin+degradation+in+the+human+colon%3A+production+of+sialidase%2C+sialate+O-acetylesterase%2C+N-acetylneuraminate+lyase%2C+arylesterase%2C+and+glycosulfatase+activities+by+strains+of+fecal+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Mucin degradation in the human colon: production of sialidase, sialate O-acetylesterase, N-acetylneuraminate lyase, arylesterase, and glycosulfatase activities by strains of fecal bacteria.</a> Infect. Immun. 60, 3971-3978 (1992).</li>
<li>Reid, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow-cytometric+and+histological+progression+to+malignancy+in+Barrett%27s+esophagus%3A+prospective+endoscopic+surveillance+of+a+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Flow-cytometric and histological progression to malignancy in Barrett's esophagus: prospective endoscopic surveillance of a cohort.</a> Gastroenterology. 102, 1212-1219 (1992).</li>
<li>Mowry, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+staining+of+pancreatic+beta-cell+granules.+Evolution+and+present+status%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Pathol.+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">Selective staining of pancreatic beta-cell granules. Evolution and present status.</a> Arch. Pathol. Lab Med. 107, 464-468 (1983).</li>
<li>Roberts, D. J., Smith, D. M., Goff, D. J., Tabin, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial-mesenchymal+signaling+during+the+regionalization+of+the+chick+gut%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Epithelial-mesenchymal signaling during the regionalization of the chick gut.</a> Development. 125, 2791-2801 (1998).</li>
</ol>

אין לי מה לחשוף.

הפרוטוקולים שהוצגו הם שיטות קלסיות לניטור ביטוי גנים וזיהוי סוגי תאים מובחנים, והותאמו לשימוש בelasmobranchs הימי. שינויים נוספים של פרוטוקולים אלה עשויים להיות נחוצים כדי להסתגל למיני elasmobranch שונים. הדאגה הנפוצה ביותר לגבי כל הר רנ&quot;א באתר שלו את הסיכון של זיהום RNase ובכך השפלה של בדיקת רנ&quot;א והודעות אנדוגניים. שני היבטים צריכים להילקח בחשבון: סינתזה של riboprobe והכלאתה להודעות עובריות, ו...

<table><tbody><tr><td>10 x מאגר שעתוק</td><td>Roche</td><td>11-465-384-001</td><td></td></tr><tr><td>תערובת תיוג DIG-RNA</td><td>Roche</td><td>11-277-073-910</td><td></td></tr><tr><td>מעכב RNAse</td><td>Roche</td><td>03-335-399-001</td><td></td></tr><tr><td>RNA פולימראז - SP6</td><td>Roche</td><td>10-810-274-001</td><td></td></tr><tr><td>DNAseI, RNAse-free </td><td>Roche</td><td>10-776-785-001</td><td></td></tr><tr><td>שמרים RNA</td><td>Invitrogen</td><td>15401-029</td><td></td></tr><tr><td>CHAPS</td><td>EMD-Millipore</td><td>220201</td><td></td></tr><tr><td>הפרין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>H4784</td><td></td></tr><tr><td>DEPC (דיאתיל פירוקרבונט)</td><td>מחקר אורגני</td><td>2106D</td><td></td></tr><tr><td>מוריה כף מחוררת</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>10370-17</td><td></td></tr><tr><td>Netwell מוסיף</td> מדעי <td>מיקרוסקופיה אלקטרונית</td><td>64713-00</td><td>Netwells לשימוש בכלי תרבית רקמות 6 בארות</td></tr><tr><td>צלחת תרבית רקמות 6 בארות</td><td>Corning</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>בקבוקוני נצנוץ מזכוכית עם מכסי מכסה הברגה</td><td>Weaton Science Products</td><td>986540</td><td></td></tr><tr><td>formamide</td><td>Fisher</td><td>BP227500</td><td></td></tr><tr><td>Proteinase K</td><td>Invitrogen</td><td>59895 (AM2542)</td><td></td></tr><tr><td>NBT</td><td></td><td>11585029001</td><td></td></tr><tr><td>BCIP</td><td>Roche</td><td>11585002001</td><td></td></tr><tr><td>מי חמצן, 30%</td> <td>EMD</td><td>HX0635-1</td><td></td></tr><tr><td>סרום כבשים</td><td>VWR</td><td>101301-478</td><td></td></tr><tr><td>glutaraldehyde</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5882</td><td></td></tr><tr><td>tRNA</td><td>Roche</td><td>10-109-541-001</td><td></td></tr><tr><td>Anti-DIG Fab Fragments</td><td>Roche</td><td>1137-6623</td><td></td></tr><tr><td colspan="4"><חזק>טבלה 3. ריאגנטים וציוד לתושבת RNA שלמה initu's<'s/strong>.</td></tr><tr><td>1% אלצ'יאן כחול 8GS, pH 2.5</td><td>מדעי מיקרוסקופיית אלקטרונים</td><td>26323-01</td><td></td></tr><tr><td>מדעי מיקרוסקופיה</td><td>אלקטרונית גרעינית מהירה ואדום</td><td>26078-05</td><td></td></tr><tr><td>DPX Mountant</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>13510</td><td></td></tr><tr><td>פרפין (Paraplast X-tra)</td><td>McCormick Scientific</td><td>39503002</td><td></td></tr><tr><td>10% פורמלין, NBF</td><td>VWR</td><td>95042-908</td><td></td></tr><tr><td>בקבוקוני נצנוץ מזכוכית עם מכסי מכסה הברגה</td><td>Weaton Science Products</td><td>986540</td><td></td></tr><tr><td>תבניות בסיס גניבה אל חלד</td><td>Tissue-Tek</td><td>4161-4165</td><td>גדלים מרובים זמינים.</td></tr><tr><td>קלטות </td><td>Tissue-Tek</td><td>4170</td><td></td></tr><tr><td>מחמם שקופיות</td><td>Fisher-Scientific</td><td>12-594Q</td><td></td></tr><tr><td>Tissue Embedder</td><td>Leica Microsystems</td><td>EG1160</td><td></td></tr><tr><td>Microtome, סיבובי</td><td>Leica Microsystems</td><td>RM2235</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek Slide Staining Set</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>62540-01</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek 24-Slide Holder</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>62543-06</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost*Plus slides</td><td>Fisherbrand</td><td>12-550-17</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Table 4. ריאגנטים וציוד לכתם כחול אלציאני</חזק>.</td></tr></tbody></table>

רנ&quot;א<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה בעוברי הר שלמים והיסטולוגיה הסלולרית מותאמת לelasmobranchs הימי

RNA In situ Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

elasmobranchs הימי מוערכים מודלים של בעלי חיים למחקרים ביו וגנומית כפי שהם החוליות הפרימיטיביות ביותר שיש חסינות אדפטיבית ויש מנגנונים ייחודיים לויסות לחץ האוסמוטי 1-3. כאמן חוליות לסת החיים הפרימיטיביים ביותר עם ספיחים לזווג, elasmobranchs הוא מודל אבולוציונית חשוב, במיוחד ללימודים באבולוציה ובהתפתחות. elasmobranchs הימי יש גם שמש ללמוד טוקסיקולוגיה הימית ופיזיולוגיה של לחץ במערכת יחסים עד 4 שינויי האקלים. לפיכך, פיתוח וההתאמה של מתודולוגיות נדרשים כדי להקל ולהרחיב את השימוש בחוליות הפרימיטיביות האלה לתחומים ביולוגיים רבים. כאן אני מציג את ההסתגלות המוצלחת של כל הר רנ&quot;א כלאה באתר וטכניקות היסטולוגית ללמוד ביטוי גנים והיסטולוגיה תא בelasmobranchs. ניטור ביטוי גנים הוא כלי היכר של Biol התפתחותיתogists, ונמצא בשימוש נרחב כדי לחקור תהליכים התפתחותיים 5. כל הר רנ&quot;א כלאה באתר מאפשר להדמיה והלוקליזציה של תעתיקי גנים ספציפיים ברקמות של העובר המתפתח. דפוס הביטוי של המסר של גן יכול לספק תובנה לגבי מה תהליכים התפתחותיים והחלטות גורל תא גן יכולים לשלוט. על ידי השוואת דפוס הביטוי של גן בשלבי התפתחות שונים, תובנה ניתן להשיג בכמה תפקידים של שינויים גנטיים במהלך התפתחות. בעוד כל ההר באתר של מספק אמצעים לאיתור ביטוי גנים ברקמות, טכניקות היסטולוגית תאפשרנה זיהוי של סוגי תאים מובחנים ורקמות. כתמי היסטולוגית יש פונקציות מגוונות. כתמים כלליים משמשים כדי להדגיש מורפולוגיה של תאים, למשל hematoxylin וeosin לצביעה כללית של גרעינים וציטופלסמה, בהתאמה. כתמים אחרים יכולים לסמן תאים ספציפייםסוגים. לדוגמה, alcian כתם הכחול דיווח במאמר זה הוא בשימוש נרחב כתם קטיוני לזהות mucosaccharides. הכתמה של מערכת העיכול עם alcian כחול יכולה לזהות את חלוקת תאי גביע המייצרים mucosaccharides. שינויים במרכיבי mucosaccharide על פפטידים קצרים להבחין תאי גביע בתפקידו במסגרת מערכת העיכול 6. באמצעות כל הר RNA בשל אתרו וhistochemical שיטות בו זמנית, החלטות גורל תא יכולות להיות מקושרות לביטוי גנים ספציפיים. אמנם RNA בים וhistochemistry &quot;אתר נמצאים בשימוש נרחב על ידי חוקרים, ההסתגלות והשימוש בם בelasmobranchs הימי נפגשו הצלחה מוגבלת ומגוונת. כאן אני מציג את הפרוטוקולים שפותח עבור elasmobranchs והשתמשו על בסיס קבוע במעבדה שלי. למרות שינויים נוספים של RNA בשיטת הכלאה של אתר עשויים להיות נחוצים כדי להסתגל למינים שונים, הפרוטוקולים מתוארים כאן עמrovide נקודת התחלה חזקה עבור חוקרים המבקשים להתאים את השימוש בelasmobranchs הימי לשאלות המדעיות שלהם.

דוגמאות לכתמים כחולים alcian באזורים שונים של L. מערכת עיכול erinacea מוצגת באיור 2. mucin חומצה המכיל תאי globlet הם נראים בבירור על ידי alcian כתם הכחול לאורך מערכת העיכול. חלוקת mucins חומצה שונה באזורים השונים של מערכת העיכול, ובכך הוא משקפת הבדלים בתפקוד. mucins חומציים מיוצרים בדלילות במעי הספירלה והביב, ואילו ריכוז גבוה של החומצה mucins מזוהה במעי דיסטלי (האיור 2a להשוות ו2c עם 2b). <t...

על ידי שילוב של כל שיטות להר רנ&quot;א<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה והיסטולוגיה, ביטוי גנים יכולים להיות מקושרת עם החלטות גורל תא בעובר המתפתח. שיטות אלו הותאמו לelasmobranchs הימי ולהקל על השימוש בבעלי החיים אלה כאורגניזמים מודל למחקרים ביו, רעלים והשוואתיים.

רנ&quot;א<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה בעוברי הר שלמים והיסטולוגיה הסלולרית מותאמת לElasmobranchs הימי

Marine  elasmobranchs are valued animal models for biomedical and genomic studies as  they are the most primitive vertebrates to have adaptive immunity ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לעקוב אחר ביטוי גנים והחלטות סולפט על סף מרינה מתפתחת. זה מושג על ידי הכלאה ראשונה, בדיקת RNA ספציפית לגן בעוברים המותקנים בבית. השלב השני של ההליך הוא הדמיה של ביטוי גנים בעוברים לאחר חתך וצביעה עבור סיאן כחול ואדום מהיר גרעיני, בחינת הרקמה לביטוי מסרים ספציפיים לגנים ונוכחות של תאי גביע המייצרים מוצין חומצי.שלום, אני ניקול הדוסיו, ואני פרופסור לביולוגיה ביוניון קולג'. היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני השיטות הקיימות להכלאה של RNA שלם ואתר הוא שפרוטוקול זה מותאם במיוחד לדרגות SMA ימיות. התחל את הפרוטוקול הזה עם עוברי סקייט מבוימים במתנול המאוחסן במינוס 20 מעלות צלזיוס, ובדיקת RNA מוכנה לעוברים בשלבים.בגיל 29:30 ואילך, ניתן להרים גוף אפידרמיס מהעובר תחת המיקרוסקופ. נתח בזהירות את שכבת האפידרמיס כדי למקסם את חדירת הבדיקות. השלב הקריטי ביותר בפרוטוקול זה הוא הבטחת חדירה מלאה של הגשושית לעוברים מבוגרים.זה כולל הסרת שכבת האפידרמיס החיצונית מהעוברים וטיפול הולם בחלבון K. העבירו את העוברים בבקבוקוני זכוכית נקיים והחזירו להם לחות באמצעות סדרת מתנול הפוכה עם נדנוד עדין בכל תמיסה למשך חמש עד 30 דקות בטמפרטורת החדר, השלימו את ההתייבשות עם שתי שטיפות ב-PBT למשך 10 דקות כל אחת עם אקונומיקה נדנדה עדינה ו-6% מי חמצן PBT למשך שעה אחת. לאחר מכן חזור על שטיפת ה- PBT עם נ

rna-situ-hybridization-whole-mount-embryos-cell-histology-adapted-for

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

סרט הווידאו הזה מדגים 2 צבעים הר שלם הכלאה באתרו, שיטה שבאמצעותה דפוס ביטוי במרחב ובזמן של 2 גנים שונים יכולים להיות דמיינו בעוברים אפרוח צעיר. שיטה זו הוצגה לראשונה על ידי דייוויד וילקינסון, דומינגוס אנריקה, פיל אינגהם ודוד איש-Horowicz.

הר שלם כפול באתרו הכלאה של עוברים צ&#39;יק מוקדם

הר שלמים הכלאה באתרו היא אחת הטכניקות הנפוצה ביותר בביולוגיה התפתחותית. כאן, אנו מציגים ברזולוציה גבוהה פלורסנט כפול פרוטוקול הכלאה באתרו לניתוח דפוס הביטוי המדויק של גן יחיד לקביעת חפיפה של תחומים הביטוי של שני גנים. אנו כוללים propidium גרעיני יודיד נגד כתם להדגיש ארגון רקמות.

דג הזברה שלמים הר ברזולוציה גבוהה פעמיים פלורסנט באתרו הכלאה

שימוש הר שלם באתרו הכלאה קישור לביולוגיה מולקולרית האורגניזם

הר שלם<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה של E8.5 לעוברי E11.5 עכבר

דג הזברה, דגים טרופיים קטנים, הפכה לדגם פופולרי ללימוד תפקוד גן במהלך התפתחות מחלה וחוליות. הביטוי של הזמן ומרחב של גני המטרה יכול להיקבע על...

הר שלם ברזולוציה גבוהה<em&gt; באתרו</em&gt; הכלאה בתוך עוברי דג הזברה לחקר ביטוי גנים ותפקוד

פיתוח cilia חיוני organogenesis נכונה. פרוטוקול זה מתאר שיטת אופטימיזציה תווית, דמיינו תאים ciliated של דג זברה.

להמחיש Multiciliated בתאים דג זברה באמצעות פרוטוקול משולב של פלורסנט הר שלמה בחיי עיר הכלאה, Immunofluorescence

המטרה של פרוטוקול זה היא לבצע הכלאה בחיי עיר על דגימות אלמוגים מבוגרים שמוטבע פרפין, למחלקה על גבי מדרון זכוכית. זוהי שיטה איכותי המשמש כדי להמחיש את הביטוי המרחבי לווין אנטי-חוש RNA ברקמות פרפין-מוטבע.

בחיי עיר טכניקות הכלאה פרפין-מוטבע דגימות אלמוגים למבוגרים

פרוטוקול זה מאפשר הדמיה של ביטוי גנים בעובריים Astyanax cavefish. גישה זו פותחה במטרה למקסם את אות של ביטוי גנים, תוך מזעור צביעת הרקע לא ספציפית.

Wholemount ב באתרו הכלאה עבור עוברי Astyanax

כאן, אנו מציגים פרוטוקול עבור נוגדן הפלורסנט בתיווך זיהוי של חלבונים בהכנות שלמות של עוברי הדגים והזחלים.

כל הר אימונוהיסטוכימיה בזיבפיש עוברים וזחלים

פרוטוקול זה מתאר כיצד להשיג תמונות על ידי שילוב הכלאה באתרו ואימונוהיסטוכימיה של חלקים עובריים של דגי זברה. הכלאה באתרו בוצעה לפני הקפאה, ואחריה הכתמת נוגדנים. כדאי לזהות את דפוסי הביטוי של שני גנים בדגי זברה אם יש מיעוט נוגדנים.

ב Situ הכלאה בשילוב עם אימונוהיסטוכימיה בעוברי דגי זברה Cryosectioned

למדו הכלאת RNA in situ בעוברי אלסמוברנקים ימיים שלמים בשילוב היסטולוגיה לחקר ביטוי גנים והחלטות גורל תאיות. שיטה זו מספקת מסגרת אמינה למחקר ביולוגיה התפתחותית ורפואה.

רנ"א

גלה סרטונים נוספים