Name: מודל עכברי של ריפוי פצע (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 39 s
Description: למדו מודל עכברי לריפוי פצעים באמצעות ספלינט סיליקון למניעת התכווצות וקידום אפיתליזציה, התרבות תאים ואנגיוגנזה. שיטה זו מאפשרת בדיקה אמינה של תרכובות טיפוליות בחיות מודל.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות לתמיכת מימון הבריאות הלאומית והמועצה למחקר רפואי (NHMRC) של אוסטרליה (פרויקט גרנט ID: 632,512). לואיז דאן נתמכה על ידי מלגת קריירה מוקדמת NHMRC וכריסטינה Bursill על ידי מלגת קריירה קרן לב לאומית לפיתוח.

1. הכנת סדים ותחבושות occlusive <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדורג 10 מ&quot;מ חוגים ביריעות סיליקון בעובי 0.5 מ&quot;מ ומספריים שימוש או ביופסיה כדי ליצור דיסקי סיליקון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מרכז מ&quot;מ ביופסיה 5 באמצע מעגל 10 מ&quot;מ ולחץ בחוזקה כדי ליצור חור ליצירת &quot;סופגנייה&quot;, כמו דיסק שישמש כסד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדורג 10 מ&quot;מ על עיגולים שקוף הלבשה אוטמת כגון Opsite ומספריים להשתמש כדי ליצור תחבושות מעגליות. </li></ol> 2. חיות ניסוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השג אישור ועדת אתיקה לבעלי חיים כל הניסויים שיבוצעו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בעכברים ממין זכר C57BL/6J 8 שבועות ישנים (22-26 גרם) ממגדל מסחרי (למשל מעבדות ג&#39;קסון). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור על עכברים בתנאים סטנדרטיים של 21 מעלות צלזיוס ומחזור 12 שעות אור בחושך עם גישה החופשית למזון ומים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> (אופציונלי): סוכרת יכולה להיגרם ב6 עד 7 עכברים ישנים שבוע על ידי בולוס intraperitoneal injection של 165 מ&quot;ג / ק&quot;ג streptozotocin (בחיץ ציטרט, pH 4.5), עם היפרגליקמיה אושר על ידי ניטור רמת סוכר בדם רגיל (AccuChek Glucometer). עכברים סוכרתיים עשויים להיות polyuria וכן המצעים שלהם ייתכן שיהיו צורך לשנות בתדירות גבוהה יותר כדי למנוע רטיבות והמשקולות שלהם צריכים להיות תחת פיקוח הדוק. </li></ol> 3. הרדמה והכנה אופרטיבית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגרום להרדמה כללית באמצעות 5% isoflurane ב 100% חמצן (קצב זרימה 1 ליטר / דקה) ולשמור על הרדמה באמצעות 1-3% isoflurane. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להבטיח את הרפלקסים פדלים העמוקים של העכבר מדוכא ומניח את העכבר בעמדה פגיע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את אזור הניתוח על ידי הסרת פרווה עם קוצץ מבסיס הצוואר עד 3 ס&quot;מ בהמשך הגב ובין השכמות שתי כתפיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יישום אור הקרם מקריח יכול להיות מיושם על לא יותר מ 2 דקות. מטליות גזה רטובות יכולות לשמש כדי להבטיח את כל השמנת ופרווה שנותרה מוסר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנגב את העור עםספוגית אלכוהול ושני יישומים של 10% povidone-יוד (פולידין) ולעטוף את העכבר. </li></ol> 4. כריתה וקיבוע של פצע <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ייצוג בתרשים של מודל ריפוי פצעים העכברי מוצג באיור 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש סטרילי 4 מ&quot;מ ביופסיה להתוות שתי תבניות עגולות לפצע משני צדי קו האמצע של העכבר ברמה של הכתפיים (ראה איורים 2a-2b). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במלקחיים משוננים להרים את העור באמצע המתווה והמספריים איריס כדי ליצור פצע בעובי מלא המשתרע דרך הרקמה התת עורית (איורים 2 ג-2D), כולל carnosus מרפדים (2E איור), והבלו פיסה העגולה של רקמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על התהליך עבור הפצע בצד השני של קו האמצע (איור 2F). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר ציפוי מגן פלסטיק מכל צד של סד סיליקון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל cyanoacrylate דבק (למשל דבק סופר או דבק מגע דבק) בצד אחד של סד סיליקון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מרכז סד על הפצע (איור 2G) ועוגן הסד עם 6-0 תפרי ניילון הופסק כדי להבטיח מיצוב (איור 2H). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על תהליך קיבוע על פצע האחר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם יש צורך בנקודת הזמן זו, להחיל המתחם הטיפולי להיבדק (μl עד 100) לפצע אחד (איור 2i), ושליטה ברכב לצד השני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכסות את הפצע עם תחבושת אוטמת שקופה (לדוגמה, OpSite) (איור י 2-2k). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שליט ממוקם מתחת לסדים ונלקח photomicrograph (איור 2L). </li></ol> 6. ניהול לאחר ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Carprofen (5 מ&quot;ג / ק&quot;ג) אחת ליום מנוהל באמצעות הזרקה תת עורית-להקלה על כאב שלאחר הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי החיות הניתוח הן בכלוב בנפרד ושמרו על חום מ &#39;ATS עד התאושש באופן מלא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפקח חיות פעמיים ביום למשך גילויים של כאב וירידה במשקל. הבחנו לא מוצג התנהגות בוטה של ​​כאב או ירידה במשקל. </li></ol> 7. מדידת פצע וטיפול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפצע יכול להימדד מדי יום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגרום להרדמה כללית באמצעות 5% גז isoflurane (זרימת שיעור 1 ליטר / דקה), ולאחר מכן להבטיח את הרפלקסים התחושתיים העמוקים של העכבר מדוכאת באמצעות 1-3% isoflurane. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות לקלף את רוטב occlusive עם מלקחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש מחוגה כירורגיות כדי למדוד את קוטר הפצע. אנחנו לוקחים את הממוצע של שלוש מדידות לאורך X, Y ו-Z הציר (איורים 2 מ-2o), כמו גם photomicrograph לשימוש עתידי (איור 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אופציונלי: בשלב זה את החיה ניתן להעריך לזלוף הדם באמצעות לייזר דופלר imager (איור רבעון 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יישום מחדש של המתחם הטיפולי ושליטה ברכב יכול להיות ביצועיםתרופה בשלב זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הלבשה אוטמת שקופה נקיות היא מחדש מיושמת ואת החיות כל הזמן חם עד שהתאוששו באופן מלא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הערה: אם סדים אינם מאובטחים כראוי את הפצע בקלות יהיה חוזה (איור 2 יח). </li></ol> 8. ניתוח היסטולוגית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכברים לאחר 10 ימים עם מנת יתר של הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים ולהב סכין מנתחים להסיר את התפרים ובזהירות לקלף את הקיבוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמשו במספרי איריס ליצור כריתה רחבה, מלאה מסביב ומתחת לאזור הפצע ודגירת הרקמות בparaformaldehyde 4% בופר פוספט (PBS) בשעה 4 ° C למשך הלילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת רקמות לסוכרוז 17% בפתרון PBS עבור 24 שעות נוספות על 4 מעלות צלזיוס ולאחר מכן להסיר פתרון עודף על ידי מספיג בזהירות על רקמות ומקום במתחם והקפאת אוקטובר ב -80 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Hematoxylin ומכתים eosin יכולים לשמש כדי לחזות את המבנה ופער פצע אפיתל. Neovascularisation ניתן להעריך על ידי מנתח immunohistochemical כדי לקבוע את מספר הנימים (באמצעות גורם Willebrand פון). </li></ol>

<ol><li>Sen, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+skin+wounds%3A+a+major+and+snowballing+threat+to+public+health+and+the+economy%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair%22%5BJournal%5D)">Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy.</a> Wound Repair. 17, 763-771 (2009).</li>
<li>Sen, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing+essentials%3A+let+there+be+oxygen%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+Regen%22%5BJournal%5D)">Wound healing essentials: let there be oxygen.</a> Wound Repair Regen. 17, 1-18 (2009).</li>
<li>Gurtner, G. C., Werner, S., Barrandon, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+repair+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Wound repair and regeneration.</a> Nature. 453, 314-321 (2008).</li>
<li>Lindblad, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Considerations+for+selecting+the+correct+animal+model+for+dermal+wound-healing+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomater.+Sci.+Polym.+Ed%22%5BJournal%5D)">Considerations for selecting the correct animal model for dermal wound-healing studies.</a> J. Biomater. Sci. Polym. Ed. 19, 1087-1096 (2008).</li>
<li>Grose, R., Werner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound-healing+studies+in+transgenic+and+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Wound-healing studies in transgenic and knockout mice.</a> Mol. Biotechnol. 28, 147-166 (2004).</li>
<li>Reid, R. R., Said, H. K., Mogford, J. E., Mustoe, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+future+of+wound+healing%3A+pursuing+surgical+models+in+transgenic+and+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Surg%22%5BJournal%5D)">The future of wound healing: pursuing surgical models in transgenic and knockout mice.</a> J. Am. Coll. Surg. 199, 578-585 (2004).</li>
<li>Fang, R. C., Mustoe, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+wound+healing%3A+utility+in+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomater.+Sci.+Polym.+Ed%22%5BJournal%5D)">Animal models of wound healing: utility in transgenic mice.</a> J. Biomater. Sci. Polym. Ed. 19, 989-1005 (2008).</li>
<li>Wong, V. W., Sorkin, M., Glotzbach, J. P., Longaker, M. T., Gurtner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+approaches+to+create+murine+models+of+human+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Surgical approaches to create murine models of human wound healing.</a> J. Biomed. Biotechnol. 2011, 969618(2011).</li>
<li>Galiano, R. D., Michaels, J. t, Dobryansky, M., Levine, J. P., Gurtner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+and+reproducible+murine+model+of+excisional+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair%22%5BJournal%5D)">Quantitative and reproducible murine model of excisional wound healing.</a> Wound Repair. 12, 485-492 (2004).</li>
<li>Galiano, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topical+vascular+endothelial+growth+factor+accelerates+diabetic+wound+healing+through+increased+angiogenesis+and+by+mobilizing+and+recruiting+bone+marrow-derived+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Topical vascular endothelial growth factor accelerates diabetic wound healing through increased angiogenesis and by mobilizing and recruiting bone marrow-derived cells.</a> The American Journal of Pathology. 164, 1935-1947 (2004).</li>
<li>Thangarajah, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+basis+for+impaired+hypoxia-induced+VEGF+expression+in+diabetic+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">The molecular basis for impaired hypoxia-induced VEGF expression in diabetic tissues.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106, 13505-13510 (2009).</li>
<li>Raza, A., Bayles, C., Biebel, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+Bacterial+Growth+and+Moisture+Handling+Properties+of+Transparent+Dressings%3A+3M+Tegaderm+Transparent+Dressing%2C+3M+Tegaderm+HP+Transparent+Dressing%2C+and+Opsite+IV3000+Transparent+Dressing%5BTitle%5D)+AND+%22Smith+and+Nephew+Report%22%5BJournal%5D)">Investigation of Bacterial Growth and Moisture Handling Properties of Transparent Dressings: 3M Tegaderm Transparent Dressing, 3M Tegaderm HP Transparent Dressing, and Opsite IV3000 Transparent Dressing.</a> Smith and Nephew Report. , (1998).</li>
<li>Chung, T. Y., Peplow, P. V., Baxter, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testing+photobiomodulatory+effects+of+laser+irradiation+on+wound+healing%3A+development+of+an+improved+model+for+dressing+wounds+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Photomed.+Laser+Surg%22%5BJournal%5D)">Testing photobiomodulatory effects of laser irradiation on wound healing: development of an improved model for dressing wounds in mice.</a> Photomed. Laser Surg. 28, 589-596 (2010).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

זהו מודל עכברי ניסויי של ריפוי פצע עורי. תכונה משמעותית של מודל זה היא השימוש בסדי סיליקון כדי למנוע התכווצות פצע כך שהיווצרות הרקמה חדשה epithelialization מחדש ועלול להתרחש, מה שהופך אותו דומה לתהליך המתרחש בבני אדם. מודל זה הוא תכליתי וניתן להשתמש בו כדי להעריך את ריפוי פצע (למשל בסוכרת) הגדרות הן פיסיולוגיות וpathophysiological. המודל עשוי לשמש גם כדי להעריך את פוטנציאל ריפוי פצע או הרפוי אנגיוגנזה בהגדרה חסכונית. עם כל עכבר מתנהג כמו שליטה משלו, מספרי בעלי החיים הם מז...

ריפוי פצע לקוי אחראי לתחלואה ותמותה בעולם משמעותית, זה נכון במיוחד עבור הסובלים מסוכרת 1,2. בבני אדם, ריפוי פצע הוא רצף של תהליכים, שבו יש חפיפה משמעותית 3. מייד התהליכים דלקתיים, פציעה הבאות הם יזמו. תאים דלקתיים לשחרר גורמים המעודדים את התהליכים של תא התפשטות, הגירה ואנגיוגנזה. לאחר היווצרות רקמה חדשה epithelialization מחדש ויש שלב של שיפוץ שכרוך גם אפופטוזיס וארגון מחדש של חלבוני מטריצה ​​כגון קולגן. המורכבות של ריפוי פצע לא יכולות כרגע להיות משוכפלת במבחנה וזה מחייב שימוש במודלים של בעלי חיים. נכון להיום, לימודי ריפוי פצעים היו מוגבלים למודלים של בעלי חיים גדולים, כמו חזירים, על מנת להבטיח כי תהליכי הריפוי הם שווי ערך ודומים לבני אדם. עם זאת, שימוש האנימה גדולהLS למחקרים מסוג זה יכול להיות קשה לבית והם לא תמיד מעשיים 4. עכבר המעבדה מייצג מודל חיה חסכוני, שניתן בקלות מניפולציות גנטית לחקירת מכניסטית 5-7. עם זאת, פצעים עכבריים לרפא בצורה שונה לאדם ב, בעיקר בשל התהליך של התכווצות 8. מדובר בין השאר, בשל שכבה תת עורית נרחבת משורטטת שריר נקראת carnosus מרפד שהוא במידה רבה חסר בבני אדם. בעכברים, שכבת שריר זה מאפשר לעור להעביר באופן עצמאי של השרירים העמוקים יותר והוא אחראי להתכווצות המהירה של הפציעה הבאה עור. כדי להתגבר על מגבלה זו, ניתן להתאים את ריפוי פצע עכברי לשכפל ריפוי פצע אדם על ידי שימוש בסד (איור 1) 8,9. בסרטון הזה אנחנו מדגימים את המודל העכברי הפצע החורץ שמבטל התכווצות פצע והדוק יותר קרובות לתהליכים האנושיים של מחדש epithelialization והיווצרות רקמה חדשה. במודל זה שני חתכים בעובי מלא הכוללים carnosus מרפדים נוצרים על dorsum, אחד בכל צד של קו האמצע של העכבר. סד סיליקון ממוקם סביב הפצע עם הסיוע של דבק ולאחר מכן הקיבוע מאובטח עם תפרים. כל עכבר משמש כשלט משלו, עם פצע אחד מקבל טיפול ושליטה ברכב האחר, ובכך להפחית מספרים של בעלי חיים. בעקבות יישומים אקטואליים, הלבשה אוטמת שקופה מוחלת. ניתן להסיר את החבישה בעת צורך ליישומים נוספים אקטואליים ו / או מדידה של אזור הפצע 10,11. בהשלמת ניסויים, סגירת פצע, אדריכלות ומידת neovascularization המורפולוגי ניתן להעריך על ידי אימונוהיסטוכימיה. זה גם יכול להיות מנוצל חסכוני וקל לביצוע מודל להערכת ריפוי פצע בהקשר של סוכרת או pathophysiologies האחרים.

<table><tbody><tr><td>יריעות סיליקון לחץ לאיטום בעובי 0.5 מ"מ</td><td>Invitrogen</td><td>P18178</td><td>חתוך ל"סופגניות "בקוטר חיצוני של 1 ס"מ חיצוני, קוטר פנימי 0.5 ס"מ</td></tr><tr><td>אגרוף ביופסיה 5 מ"מ</td><td>Steifel</td><td>BC-B1-0500</td><td>כדי לתאר את אזור הפצע שיש לכרות</td></tr><tr><td>מספריים Vannas 8.5 ס"מ מעוקל</td><td>World Precision Instruments </td><td>501232</td><td>לחתך וכריתת פצע</td></tr><tr><td>Dumonte #7b מלקחיים, 11 ס"מ</td><td>World Precision Instruments</td><td>501302</td><td>לאחיזת העור בעת יצירת חתך וכריתת עור </td></tr><tr><td>מלקחיים של Graefe, משוננים 10 ס"מ</td><td>World Precision Instruments</td><td>14142</td><td>כדי לסייע בהצמדת סד סיליקון לעור</td></tr><tr><td>מחזיק מחט, לסתות חלקות, מעוקלות, 12.5 ס"מ</td><td>World Precision Instruments</td><td>14132</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים של Malis, חלקים, ישרים, 12 ס"מ</td><td>Codman and Shurtleff, Inc (J& המגבר; J)</td> <td>80-1500</td><td>לתפירת טבעות הסיליקון לעור</td></tr><tr><td>סרגל, הדרגה של 0.5 מ"מ</td><td>n/a</td><td></td><td></td></tr><tr><td>קליפרים 0.25 מ"מ הדרגתיות</td><td>דאקוורת' וקנט</td><td>9-653</td><td>למדידת שטח הפצע</td></tr><tr><td>מול סרט דבק שקוף FlexiFix. 10 ס"מ x 1 מ</td><td>'סמית & אחיין</td><td>66030570</td><td></td></tr><tr><td>רימדיל (קרפרופן)</td><td>פייזר</td><td>462986</td><td></td></tr></tbody></table>

מודל עכברי של ריפוי פצע

Murine Model of Wound Healing

ריפוי פצע ותיקון הם התהליכים הביולוגיים המורכבים ביותר המתרחשים בחיי אדם. לאחר פציעה, מסלולים ביולוגיים רבים להיות מופעלים. ריפוי פצעים לקוי, אשר מתרחש בחולי סוכרת לדוגמה, יכול להוביל לתוצאות חמורות שליליות כגון קטיעה. יש, אם כן, תמריץ להגדיל לפתח סוכני רומן המקדמים תיקון פצע. הבדיקות אלה היו מוגבלות למודלים של בעלי חיים גדולים כמו חזירים, שהם לעתים קרובות לא מעשיים. עכברים מייצגים את המודל האידיאלי קליני, כפי שהם חסכוני ונוחים למניפולציה גנטית, המאפשרת לחקירת מכניסטית. עם זאת, ריפוי פצעים בעכבר הוא שונה בהמהות לזה של בני אדם כפי שהוא מתרחש בעיקר דרך הצמצום. המודל העכברי שלנו מתגבר על זה על ידי שילוב של קיבוע באזור הפצע. על ידי קיבוע הפצע, תהליך התיקון הוא לאחר מכן תלוי באפיתליזציה, התרבות תאים ואנגיוגנזה, אשר משקפות באופן הדוקתהליכים ביולוגיים של ריפוי פצע אדם. בעוד הדורש עקביות וטיפול, מודל עכברי זה אינו כרוך בטכניקות כירורגיות מסובכות ומאפשר בדיקות חזקות של חומר מבטיח שעשויים, למשל, לקדם או לעכב אנגיוגנזה דלקת. יתר על כן, כל עכבר פועל כשליטה שלה כמו שני פצעים מוכנים, מה שמאפשר את היישום של שניהם במתחם ומבחן השליטה ברכב באותו בעל חיים. לסיכום, אנו מדגימים מודל מעשי, קל ללמוד, וחזק של ריפוי הפצע, שהיא דומה לזו של בני אדם.

עקומת סגירת פצע נקבעה על ידי חישוב הקוטר הממוצע של הפצע ולבטא את התוצאות באחוזים, כלומר 100 - (יום 0 קוטר / קוטר X יום). בניסוי זה מתחם טיפולי (או שליטה ברכב) יושם יומי לפצע. המתחם הטיפולי סגירת פצע מאוד מואצת (איור 3). חשוב לציין כי הסדים חייבים להישמר לתקופת הניסוי, כהסרת סדים תוביל להתכווצות פצע מהירה (איור 2 יח) ולסטות מהדפוס של ריפוי הפצע נצפה בבני אדם. <p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="always" style=";text-a...

מודל עכברי של ריפוי פצע עורי שניתן להשתמש כדי להעריך את התרכובות טיפוליות בהגדרות פיסיולוגיות וpathophysiological.

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

המטרה הכללית של הליך זה היא ליצור פצע, המקובע באמצעות סד, כדי למנוע התכווצות ולעודד פרוליפרציה של התשרית האפיתליאלית ואנגיוגנזה. דבר זה מושג תחילה על ידי הכנת גב כף הרגל ויצירת שני פצעים של עובי מלא בשיטת כריתה משני צידי קו האמצע. לאחר מכן, מניחים סד מעל הפצע ומקיים אותו במקומו באמצעות תפרים.לאחר מכן מודד הפצע ומיושמים הטיפולים. לבסוף, מונח תחבושת אוקלוזיבית (חוסמת) על הפצע והעכבר נשאר להתאושש. בסופו של דבר, מודל הריפוי של פצע חיתוך עורי משמש להערכת הפצע, האפיתליזציה ותהליכים נלווים, כולל פרולפרציה ואנגיוגנזה.היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות אחרות הוא מניעת התכווצות הפצע. דבר זה מעודד פרוליפרציה של אפיתלליזציה ואנגיוגנזה, אשר מדמים בצורה מדויקת יותר את תהליך ריפוי הפצעים. בבני אדם, שיטה זו שימושית במיוחד להערכת היעילות של תרכובות טיפוליות, ומכיוון שכל עכבר משמש כביקורת לעצמו, היא ממזערת את מספר בעלי החיים הדרושים למחקר.התחילו בהכנת הסדים והחבישות האוטמות ליצירת סד. ראשית, סמנו מעגל של 10 millimeter על גליון סיליקון, ולאחר מכן השתמשו במספריים או במנקב ביופסיה כדי ליצור דיסקיות סיליקון. לאחר מכן, מרכזו מנקב ביופסיה של 5 millimeter במרכז הדיסקית של 10 millimeter, ולחצו בחוזקה כדי ליצור טבעת דמוית דונאט שתשמש כסד.הכינו תחבישים עגולים באותו גודל באמצעות תחביש אוקלוסיבי שקוף, כגון ops site. ראשית, ודאו את עומק ההרדמה המתאים בעכבר מורדם. לאחר הסרת כל השערות מאזור הניתוח, נקו את העור באמצעות יישומים חוזרים של Betadine ואלכוהול.כאשר הדבר מוכן, השתמשו במנקב ביופסיה סטרילי של 4 מילימטר כדי לסמן שני תבניות מעגליות משני צידי קו האמצע של העכבר בגובה הכתף. לאחר מכן, השתמשו בפינצטה משוננת כדי להרים את העור במרכז הסימון ובמספרי איריס כדי ליצור את הפצע. ודאו שאתם חותכים דרך הרקמה התת-עורית, כולל ה-panniculus carnosus.גזרו את הרקמה משני הצדדים, כך שייחשפו שני פצעים מעגליים. הסירו את ציפוי המגן מפלסטיק מכל צד של הספלינט מסיליקון ומרחו דבק ציאנואקרילט בצד אחד.מרכזו את הסד מעל הפצע והשמישיו למקומו באמצעות תפרים נפרדים של נילון 6-0. חזרו על תהליך הסדירה על הפצע השני. בשלב זה, ניתן למרוח תרכובת טיפולית על פצע אחד בעוד משתמשים בשני.עבור ביקורת רכב (vehicle control), הניחו סרגל מתחת לסדים וצלמו מיקרוגרף. כסו את הפצע באחת מחתיכות התחבשת העגולות שהוכנו קודם לכן. לאחר מתן משכך כאבים, אפשרו לבעל החיים להתאושש בכלוב מחומם.הבעליים נמצאים במעקב פעמיים ביום לאיתור סימני כאב וירידה במשקל. למדידת הפצע, הרדימו את בעל החיים כפי שהודגם קודם לכן וקלפו בעדינות את התחבושת האוקלוסיבית בעזרת פינצטה. השתמשו בקליפר כירורגי כדי למדוד את קוטר הפצע במספר נקודות שונות לקבלת ממוצע, וצלמו מיקרוגרף לצורך התייחסות עתידית.בשלב זה, ניתן להעריך את הפרפוזיה של הדם בבעל החיים. באמצעות מדמיינ לזר-דופלר (laser doppler imager), יש להניח חבישה אוקלוסיבית שקופה ונקייה על הפצע ולשמור על חום גופו של בעל החיים עד להחלמה מלאה. חשוב לציין כי אם הסדים אינם מקובעים כראוי, הפצע יתכווץ בקלות לאחר קטילת בעל החיים במנת יתר של חומר הרדמה; השתמשו בפינצטה ובלהב סכין מנתחים כדי להסיר את התפרים וקלפו בזהירות את הסד מהפצעים.באמצעות מספרי איריס, בצעו כריתה רחבה ומלאה מסביב ומתחת לאזור הפצע. לאחר ההסרה, קבעו את הרקמה בהתאם לנהלים הסטנדרטיים. ניתן להשתמש בצביעת המטוקסיליןתיונין ואאוזין כדי להדמיאן את מבנה הפצע ואת המרווח האפיטליאלי.בנוסף, ניתן להעריך נאווסקולריזציה (יצירת כלי דם חדשים) באמצעות אנליזות אימונוהיסטוכימיות כדי לקבוע את מספר הנימיים. עקומת סגירת פצע נקבעת על ידי חישוב הקוטר הממוצע של הפצע והבעת התוצאות כאחוז. בדוגמה זו, התרכובת הטיפולית האיצה משמעותית את סגירת הפצע בהשוואה לקבוצות הביקורת.לאחר השליטה בטכניקה, ניתן לבצעה תוך 30 דקות אם היא מבוצעת כראוי. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב להצמיד את הסד בצורה מאובטחת באמצעות תפרים במרווחים שווים כדי לשמור על עקביות בין הניסויים.

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

בסרטון זה, אנו מתארים הליך לבידוד מיטת הפצע המושרה על ידי קולונוסקופיה, בנקודת זמן מתאימה לניתוח מולקולרי מפורט. ניתוח זה מסייע להבין את תהליך ריפוי הפצע במצבים דלקתיים של מערכת העיכול.

מודל פצע מורין מונחה קולונוסקופי: שיטה לבידוד מיטת פצע המושרה ביופסיה מהמעי הגס כדי להבין את תהליך הריפוי

אנו מתארים יישום לא פולשנית ויוו הדמיה פרוטוקול מאופין בעיצוב חסכוני, ניצול L-012, chemiluminescent הלומינול-אנלוגי, כדי להמחיש ולכמת מינים חמצן תגובתי (ROS) שנוצר במודל של עכברים excisional פצע.

אין ויוו הדמיה של מינים חמצן תגובתי ב מאתר פצע מודל

כאן, אנו מציגים פרוטוקול עבור התיקון שריטות מבחנה באמצעות הפיברוכדורים העיקריים עבור vivo העור הפצע הריפוי הטיפול בעכברים. שניהם מספר שיטות ברורות כדי להעריך בתוך מבחנה וריפוי פצעים vivo.

שיטת העברת שריטות וחדר מתקפל לחלל מתורבת בניתוח Vivo של ריפוי פצעים

כאן, שני מודלים מורתיים ריפוי הפצע מתוארים, אחד שנועד להעריך את התגובה התאית הפצע ריפוי והשני כדי לכמת את שיעור סגירת הפצע. שיטות אלה ניתן להשתמש עם דגמי מחלות מורכבות כגון סוכרת כדי לקבוע מנגנונים של היבטים שונים של ריפוי הפצע המסכן.

הערכה של ריפוי בפצע חריפה באמצעות השרכה העור מפוליויניל כוהל של הרקמה העורית והזנב Excisional הפצע מודלים.

מטרת המחקר הזה היתה לפתח מודל מורטין של ריפוי פצע כוויות. כוויה תרמית המושרה על העור החלק של עכברים באמצעות תבנית פליז מחומם מראש. הרקמה הנשרפה הייתה מצופה בשתל עור שנקטפו מזנבו של עכבר תורם דומה גנטית.

מודל מורנה של פצע צריבה שוחזר עם שתל העור Allogeneic

פרוטוקול זה מתאר כיצד ליצור פצעים דו-צדדיים בעובי מלא בעכברים וכיצד לעקוב אחר, לקצור ולהכין את הפצעים לניתוח מורפומטרי. כלול תיאור מעמיק של אופן השימוש בסעיפים היסטולוגיים טוריים כדי להגדיר, לכמת ולזהות פגמים מורפומטריים במדויק.

מודל ריפוי פצעים מרין וניתוח פצעים מורפומטריים היסטולוגיים

כאן אנו מדגימים טכניקה ממוטבת להערכת תיקון פצעים באמצעות עור אנושי ex vivo בשילוב עם גישה מוכתמת שלם. מתודולוגיה זו מספקת פלטפורמה פרה-קלינית להערכת טיפולים פוטנציאליים לפצעים.

מודל פצע Ex vivo אנושי וגישה מוכתמת בהר שלם להערכה מדויקת של תיקון העור

מחקר זה מציג שתי טכניקות ניסיוניות חיוניות: בניית מודל פצע עכברים להערכת סגירת פצע והכנת תרחיפים חד-תאיים מעור העכברים כדי לשמר את כדאיות התאים.

מודלים של פצעים בעכברים והכנת תרחיפי תאים בודדים

מוצג פרוטוקול יעיל להקמת מודל ריפוי פצעי כוויות בעכברים באמצעות מכשיר חימום דיגיטלי. אתרי הניסוי דמויי לוח השחמט שנוצרו על העור מאפשרים ניתוח פונקציונלי נוסף לבדיקת ריפוי הפצעים.

מודל ריפוי פצעי כוויה דמוי לוח שחמט של עכברים המבוסס על מכשיר חימום דיגיטלי

פצעים מייצגים אתגר בריאותי עולמי. מחקר זה פיתח תא צילום סטנדרטי המשתמש בפלנימטריה דיגיטלית כדי למזער את שונות מדידת הפצעים. ניטור פצעים בעכברים במשך 14 יום חשף עלייה ראשונית באזור הפצע ובהיקפו, ואחריו סגירה הדרגתית. מתודולוגיה זו עשויה לסייע בהערכת קינטיקה של סגירת פצע במודלים פרה-קליניים.

פלנימטריה דיגיטלית להערכת קינטיקה של סגירת פצע במודל עכבר

מתואר מודל פצע מעור עכברוש המאפשר הערכה של תרופות שונות בתנאים פיזיולוגיים או פתולוגיים בשלבים שונים של תהליך ההחלמה. בנוסף, מפורט פרוטוקול לביצוע פלנימטריה ידנית למעקב אחר קצב התכווצות הפצע במהלך תיקון הרקמות.

מודל פצע עור כירורגי לעכברוש: גישה למחקרי ריפוי פצעים והערכת ביוחומרים

למדו מודל עכברי לריפוי פצעים באמצעות ספלינט סיליקון למניעת התכווצות וקידום אפיתליזציה, התרבות תאים ואנגיוגנזה. שיטה זו מאפשרת בדיקה אמינה של תרכובות טיפוליות בחיות מודל.

מודל עכברי של ריפוי פצע

גלה סרטונים נוספים