Name: בידוד, תרבות ואפיון פונקציונלי של Cardiomyoctyes מאוס למבוגרים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-24T18:10:00.000+00:00
Duration: 12 min 49 s
Description: למדו לבודד ולתרבות קרדיומיוציטים מבוגרים מעכברים באמצעות מערכת פרפוזיית לנגנדורף. השיטה מאפשרת ניתוח תפקודי של התכווצות וטיפול בסידן בתאי שריר הלב לחקר ביולוגיה קרדיווסקולרית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Chlopcikova, S., Psotová, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+rat+cardiomyocytes-a+model+for+the+study+of+morphological%2C+biochemical+and+electrophysiological+characteristics+of+the+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Papers%22%5BJournal%5D)">Neonatal rat cardiomyocytes-a model for the study of morphological, biochemical and electrophysiological characteristics of the heart.</a> Biomedical Papers. , (2001).</li>
<li>Rosenthal, N., Brown, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+ascending%3A+perspectives+for+human-disease+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The mouse ascending: perspectives for human-disease models.</a> Nat. Cell Biol. 9, 993-999 (2007).</li>
<li>Ballou, L. M., Lin, R. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapamycin+and+mTOR+kinase+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Biol%22%5BJournal%5D)">Rapamycin and mTOR kinase inhibitors.</a> J. Chem. Biol. 1, 27-36 (2008).</li>
<li>Brette, F., Orchard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-Tubule+Function+in+Mammalian+Cardiac+Myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">T-Tubule Function in Mammalian Cardiac Myocytes.</a> Circ Res. , (2003).</li>
<li>Sakata, Y., Hoit, B., Liggett, S., Walsh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decompensation+of+pressure-overload+hypertrophy+in+G%3Fq-overexpressing+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Decompensation of pressure-overload hypertrophy in G?q-overexpressing mice.</a> Circulation. , (1998).</li>
<li>Lieu, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absence+of+Transverse+Tubules+Contributes+to+Non-Uniform+Ca+2%2BWavefronts+in+Mouse+and+Human+Embryonic+Stem+Cell-Derived+Cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+and+Development%22%5BJournal%5D)">Absence of Transverse Tubules Contributes to Non-Uniform Ca 2+Wavefronts in Mouse and Human Embryonic Stem Cell-Derived Cardiomyocytes.</a> Stem Cells and Development. 18, 1493-1500 (2009).</li>
<li>Lim, H., De Windt, L., Mante, J., Kimball, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversal+of+cardiac+hypertrophy+in+transgenic+disease+models+by+calcineurin+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Reversal of cardiac hypertrophy in transgenic disease models by calcineurin inhibition.</a> J. Mol. Cell Cardiol. 32 (4), 697-709 (2000).</li>
<li>Muthuchamy, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+a+familial+hypertrophic+cardiomyopathy+mutation+in+alpha-tropomyosin+manifests+cardiac+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse model of a familial hypertrophic cardiomyopathy mutation in alpha-tropomyosin manifests cardiac dysfunction.</a> Circ. Res. 85, 47-56 (1999).</li>
<li>Müller, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+regulation+of+the+cardiac+sodium+calcium+exchanger+promoter+in+adult+and+neonatal+cardiomyocytes+by+Nkx2.5+and+serum+response+factor%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Cell.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Differential regulation of the cardiac sodium calcium exchanger promoter in adult and neonatal cardiomyocytes by Nkx2.5 and serum response factor.</a> J. Mol. Cell. Cardiol. 34, 807-821 (2002).</li>
<li>Epstein, F., Hunter, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+pathways+for+cardiac+hypertrophy+and+failure%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Signaling pathways for cardiac hypertrophy and failure.</a> New England Journal of Medicine. 341 (17), 1276-1283 (1999).</li>
<li>Snopko, R., Aromolaran, A., Karko, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+culture+modifies+Ca+2%2B+signaling+during+excitation-contraction+coupling+in+neonate+cardiac+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Calcium%22%5BJournal%5D)">Cell culture modifies Ca 2+ signaling during excitation-contraction coupling in neonate cardiac myocytes.</a> Cell Calcium. , (2007).</li>
<li>Ranu, H., Terracciano, C., Davia, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Na%2B%2FCa2%2B-exchanger+overexpression+on+excitation-contraction+coupling+in+adult+rabbit+ventricular+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Effects of Na+/Ca2+-exchanger overexpression on excitation-contraction coupling in adult rabbit ventricular myocytes.</a> J. Mol. Cell Cardiol. 34 (4), 389-400 (2002).</li>
<li>Kaab, S., Nuss, H. B., Chiamvimonvat, N., O'Rourke, B., Pak, P. H., Kass, D. A., Marban, E., Tomaselli, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ionic+mechanism+of+action+potential+prolongation+in+ventricular+myocytes+from+dogs+with+pacing-induced+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Ionic mechanism of action potential prolongation in ventricular myocytes from dogs with pacing-induced heart failure.</a> Circ. Res. 78 (2), (1996).</li>
<li>Splawski, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variant+of+SCN5A+sodium+channel+implicated+in+risk+of+cardiac+arrhythmia%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Variant of SCN5A sodium channel implicated in risk of cardiac arrhythmia.</a> Science. 297, 1333-1336 (2002).</li>
<li>Zhou, Y., Wang, S., Zhu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+and+adenoviral+infection+of+adult+mouse+cardiac+myocytes%3A+methods+for+cellular+genetic+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Culture and adenoviral infection of adult mouse cardiac myocytes: methods for cellular genetic physiology.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 279 (1), 429-436 (2000).</li>
<li>Sussman, M., Lim, H., Gude, N., Taigen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+cardiac+hypertrophy+in+mice+by+calcineurin+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Prevention of cardiac hypertrophy in mice by calcineurin inhibition.</a> Science. , (1998).</li>
<li>Heinzel, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impairment+of+diazoxide-induced+formation+of+reactive+oxygen+species+and+loss+of+cardioprotection+in+connexin+43+deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Impairment of diazoxide-induced formation of reactive oxygen species and loss of cardioprotection in connexin 43 deficient mice.</a> Circ. Res. 97, 583-586 (2005).</li>
<li>Li, X., Heinzel, F. R., Boengler, K., Schulz, R., Heusch, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+connexin+43+in+ischemic+preconditioning+does+not+involve+intercellular+communication+through+gap+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Cell.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Role of connexin 43 in ischemic preconditioning does not involve intercellular communication through gap junctions.</a> J. Mol. Cell. Cardiol. 36, 161-163 (2004).</li>
<li>Rockman, H. A., Ross, R. S., Harris, A. N., Knowlton, K. U., Steinhelper, M. E., Field, L. J., Ross, J., Chein, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segregation+of+atrial-specific+and+inducible+expression+of+an+atrial+natriuretic+factor+transgene+in+an+in+vivo+murine+model+of+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88, 8277-8281 (1991).</li>
<li>Nakamura, A., Rokosh, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LV+systolic+performance+improves+with+development+of+hypertrophy+after+transverse+aortic+constriction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">LV systolic performance improves with development of hypertrophy after transverse aortic constriction in mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 281 (3), 1104-1112 (2001).</li>
<li>Boström, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+PGC1-%3F-dependent+myokine+that+drives+brown-fat-like+development+of+white+fat+and+thermogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A PGC1-?-dependent myokine that drives brown-fat-like development of white fat and thermogenesis.</a> Nature. 481, 463-468 (2012).</li>
<li>Liao, R., Jain, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+culture%2C+and+functional+analysis+of+adult+mouse+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">Isolation, culture, and functional analysis of adult mouse cardiomyocytes.</a> Methods Mol. Med. 139, 251-262 (2007).</li>
<li>Volz, A., Piper, H. M., Siegmund, B., Schwartz, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longevity+of+adult+ventricular+rat+heart+muscle+cells+in+serum-free+primary+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Cell.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Longevity of adult ventricular rat heart muscle cells in serum-free primary culture.</a> J. Mol. Cell. Cardiol. 23, 161-173 (1991).</li>
<li>Guatimosim, S., Guatimosim, C., Song, L. -S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGuatimosim%2C+S+%22Methods+in+Molecular+Biology%22">Methods in Molecular Biology</a>. 689, Humana Press. 205-214 (2010).</li>
<li>Yang, J., Delaloye, K., Lee, U. S., Cui, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patch+Clamp+and+Perfusion+Techniques+for+Studying+Ion+Channels+Expressed+in+Xenopus+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes.</a> J. Vis. Exp. (47), e2269(2011).</li>
<li>Brown, A. L., Johnson, B. E., Goodman, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patch+Clamp+Recording+of+Ion+Channels+Expressed+in+Xenopus+Oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in Xenopus Oocytes.</a> J. Vis. Exp. (20), e936(2008).</li>
<li>Arman, A. C., Sampath, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patch+Clamp+Recordings+from+Mouse+Retinal+Neurons+in+a+Dark-adapted+Slice+Preparation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Patch Clamp Recordings from Mouse Retinal Neurons in a Dark-adapted Slice Preparation.</a> J. Vis. Exp. (43), e2107(2010).</li>
<li>Wen, H., Brehm, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paired+patch+clamp+recordings+from+motor-neuron+and+target+skeletal+muscle+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Paired patch clamp recordings from motor-neuron and target skeletal muscle in zebrafish.</a> J. Vis. Exp. (45), e2351(2010).</li>
<li>Maier, S., Westenbroek, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+unexpected+role+for+brain-type+sodium+channels+in+coupling+of+cell+surface+depolarization+to+contraction+in+the+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">An unexpected role for brain-type sodium channels in coupling of cell surface depolarization to contraction in the heart.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (6), 4073-4078 (2002).</li>
<li>Shroff, S. G., Saner, D. R., Lal, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+micromechanical+properties+of+cultured+rat+atrial+myocytes+measured+by+atomic+force+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Dynamic micromechanical properties of cultured rat atrial myocytes measured by atomic force microscopy.</a> Am. J. Physiol. 269, 286-292 (1995).</li>
<li>Domke, J., Parak, W. J., George, M., Gaub, H. E., Radmacher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+the+mechanical+pulse+of+single+cardiomyocytes+with+the+atomic+force+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22European+Biophysics+Journal%22%5BJournal%5D)">Mapping the mechanical pulse of single cardiomyocytes with the atomic force microscope.</a> European Biophysics Journal. 28, 179-186 (1999).</li>
<li>Smith, B. A., Tolloczko, B., Martin, J. G., Grütter, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probing+the+Viscoelastic+Behavior+of+Cultured+Airway+Smooth+Muscle+Cells+with+Atomic+Force+Microscopy%3A+Stiffening+Induced+by+Contractile+Agonist%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Probing the Viscoelastic Behavior of Cultured Airway Smooth Muscle Cells with Atomic Force Microscopy: Stiffening Induced by Contractile Agonist.</a> Biophysical Journal. 88, 2994-3007 (2005).</li>
</ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

בדו&quot;ח זה, שתארנו את הטכניקות הדרושות לבידוד מוצלח ותרבות של המבוגרים CMS מלב העכבר. הטכניקה שלנו מאפשרת למחקר הבא של פונקצית CM ורגישות תוך שימוש בשיטות שתוארו לעיל. הפרמטר הקריטי ללימוד פונקציונלי של המבוגרים CMS הוא הבריאות ואיכות CMS המבודד. כפי שתואר לעיל, הטכניקות שלנו מאפשרות לתשואה גבוהה של תאים פונקציונליים הניתנים למניפולציה של ביטוי גנים באמצעות זיהומי adenoviral / lentiviral בתרבות, וניתוח של רגישות סלולרית ותפקוד התכווצות. <p class="jove_content" style=";text-...

מודלים עכבריים למחלת לב וכלי דם ששימשו ככלים יעילים להבהרת מנגנוני מחלה בסיסיות 1,2, כמו גם לזיהוי מטרות טיפוליות אפשריות 1,3. בפרט, השימוש בשני המודלים העכבריים למחלת לב נרכשת (כמו לחץ-עומס יתר) 4,5 ומודלי עכבר מהונדסים קידמו את ההבנה של מחלות לב 6-8 שלנו. השימוש בטכניקות תרבית תאים ללמוד מפלי איתות 3,9,10 ושינויים בחלבונים בודדים העומדים בבסיס רגישות סלולרית וצימוד עירור והתכווצות בלב 11-13 ברמה של התא הבודד שמשלים in vivo המודלים העכבר. עם זאת, החוסר של שורות תאים נאותות המשקפות את מבנה CM המבוגר ותפקוד היה מגבלה משמעותית. חוקרים ביקשו להתגבר על זה על ידי לימוד חלבונים בודדים, כגון תעלות יונים, במערכות ביטוי Heterologous <sup&gt; 14, ובעוד מחקרים אלו סיפקו לנו מידע שימושי במונחים של ביופיזיקה ערוץ יון או סחר בחלבון, ייצוג לקוי של microenvironment יליד CMS הוא מגבלה משמעותית. שנית, מאחר שרוב תאי Heterologous אלה אין לי מנגנון התכווצות בוגר, זה לא היה אפשרי ללמוד לתפקד התכווצות ואת יחסי גומלין המורכבים שבין רגישות והתכווצות הסלולריות. מסיבה זו, חוקרים פנו לתרביות תאי לב עיקריות לרבים מהמחקרים במבחנה הפונקציונליים שלהם. לבסוף, מחקרי cardiomyocyte מבודדים מאפשרים הערכה של תפקוד התכווצות ללא גורמי בלבול של הכנה רב תאית הכוללים את ההשפעה של צלקת או סיסטיק וכיוון סיבים. שריר לב של חדר עכברוש בילוד ראשי (NRVMs) הם קלים יחסית לתרבות, יכול להיות נגוע בadenoviruses וlentiviruses לתפעל ביטוי גנים 15,nd היה בשימוש ולכן בהצלחה 1, אבל יש מגבלות משלהם. למרות שהם מספקים microenvironment פיסיולוגי 1 והיה סוס העבודה של שדה האיתות, הבדלים משמעותיים בין המורפולוגיה וארגון subcellular של NRVMs וcardiomyoctyes מבוגרים להפוך אותם למודל לקוי לחקירה והנתיבים יוניים וצימוד עירור והתכווצות בלב המבוגר . בעיקר NRVMs חסר משנה t-צינורי סופי 4. מאז Ca 2 + שטף ודינמיקה הם תלוי באופן קריטי על חולצת צינורי בוגר וreticulum sarcoplasmic (SR) מבנה 6, Ca 2 + דינמיקה ומחקרים תפקודיים של התכווצות הלב בNRVMs אינם השתקפות מדויקת של תהליכים הקריטיים אלה בשריר לב מבוגר. יתר על כן, חלק מהרכיבים של מסלולי איתות שונים בין עכברי יילודים ומבוגרים 9, ובכך לספק מגבלה אחרת ללימוד תהליכי מחלה ואניmpact על רגישות סלולרית והתכווצות בNRVMs. לבסוף, ההפצה של מכונות ההתכווצות מובילה לקיצור תא multidirectional ולא אחיד המגביל את הדיוק של מדידות ההתכווצות. השימוש בשריר לב למבוגרים מבודד מספק לכן מערכת מידול מדויקת יותר במבחנה. הצמיחה יוצאת דופן של ידע מתאפשרת על ידי המניפולציה הגנטית של עכברים מדגישה את החשיבות של השגת שריר לב מבודד פונקציונלי מעכברים. למעשה, האפיון של CMS למבוגרים מבודדים ממודלי עכבר יש לשפוך אור על אירועים ביולוגיים ופתולוגיים רבים. CMS מבודד ממודלי עכבר מהונדסים איפשר ללימודים מהרווח או אובדן התפקוד של חלבונים על תכונות ההתכווצות של תאים בודדים 2,16, והכדאיות במודלים של מחלה כגון איסכמיה / reperfusion 17,18, ובכך משלים את המידע שנצבר ב מחקרי vivo עלעכברי se. שימוש במבוגרים מבודדים CMS ממודלים עכבריים למחלת לב נרכש 3,19,20 (כגון עומס יתר לחץ רוחבי אב העורקים נגרם התכווצות, כי יתר לחץ דם מחקה או היצרות מסתם אאורטלי) או פעילות גופנית 5,21 (לדוגמנות היפרטרופיה פיזיולוגית) מאפשר לבדיקה של האינטראקציה של מפלי איתות מעורבים בתהליכים אלה עם רגישות סלולרית וצימוד עירור והתכווצות ברמה של התא הבודד. יתר על כן, היכולת לתפעל ביטוי גנים באמצעות ביטוי מונע adenoviral גן במבוגרים CMS מאפשרת לנו את ההזדמנות לנתח את המרכיבים של מסלולי איתות מורכבים. מנקודת מבט של אלקטרו, מתח כל התא וניסויים מהדק הנוכחיים על מבוגרים מבודדים CMS היו קריטיים בהבהרת אופי והנתיבים יוניים בתחילת מחקר ובמצבי מחלה שונות. בגלל המבנה המורכב של קרום התא וההגנה של מחזור ההפרשבמבני פיגומים בין המבוגרים CMS וNRVMs או שורות תאי Heterologous, את יכולת תיקון תאים בוגרים נותנת ייצוג טוב יותר של ההשפעות של חלבונים מסוימים בממברנה, חלבונים מבניים, ושותפים באינטראקציה ערוץ יון ברכיבי אלקטרו של הלב המבוגר. למרות יתרונות בולטים כגון בלימוד cardiomyocytes העכברי מבוגר, בידוד וculturing cardiomyocytes עכברים הבוגר כבר מאתגר, דוחק את הצורך בתיאור שיטתי ומדויק של המתודולוגיה לבודד את שריר לב עכבר קיימא ולשמור אותם בתרבות כדי לאפשר מניפולציה גנטית נוספת באמצעות ויראלי וקטורים. מחקרים קודמים השתמשו גם CMS המבוגר עכבר חריפות מבודדת או מבוגר חולדה בתרבית CMS. זה האחרון קל יותר לתרבות מאשר עכבר מבוגר CMS, ורוב ניסויי מניפולציות ביטוי גנים במבחנה השתמשו מבוגר CMS חולדה. מחקרים מעטים שינו בהצלחה וחקרו functiביטוי onal גן במבוגרי עכבר CMS, הצגת מגבלה גדולה בהיקף של ניסויים. לכן, כאן אנו מציגים בפירוט מתודולוגיות כגון, שונה מחקירות קודמות, לבידוד 7,8,22, תרבות 3,10,15,23, זיהום adenoviral 11-13,15, וניתוח פונקציונלי של cardiomyoctyes חדרית עכבר מבוגר. תוצאות פרוטוקול הבידוד הזה בCa 2, cardiomyocytes להתרגש + הסובלני שיש לנו בהצלחה בתרבית למשך עד 72 שעה וtransiently transfected עם adenovirus. הפונקציונליות של תאים מבודדים אלה ניתן להעריך באמצעות מערכת MMSYS ההדמיה 14,24 ומהדק תיקון, שגם יידון.

<table><tbody><tr><td>נתרן כלורי</td><td>Sigma</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>אשלגן כלורי</td><td>Sigma</td><td>P9333</td><td></td></tr><tr><td>מגנזיום כלוריד</td><td>Sigma</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>נתרן פוספט מונו-בסיסי</td><td>Sigma</td><td>S8282</td><td></td></tr><tr><td>D-גלוקוז מינימום</td><td>Sigma</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>טאורין</td><td>סיגמא</td><td>T0625</td><td></td></tr><tr><td>2,3-בוטנדיון מונוקסיים</td><td>סיגמא</td><td>B0752</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז B</td><td>רוש מדע יישומי</td><td>11088807001</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז D</td><td>רוש מדע יישומי</td><td>11088858001</td><td></td></tr><tr><td>פרוטאז XIV מ- Streptomyces griseus</td><td>Sigma</td><td>P5147</td><td></td></tr><tr><td>אלבומין מסרום בקר</td><td>סיגמא</td><td>A2153</td><td></td></tr><tr><td>סידן כלוריד</td><td>סיגמא</td><td>C8106</td><td></td></tr><tr><td>מדיה חיונית מינימלית</td><td>סיגמא</td><td>51411C</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת אלבומין מסרום בקר</td><td>סיגמא</td><td>A8412</td><td></td></tr><tr><td>L-גלוטמין</td><td>סיגמא</td><td>G3126</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין</td><td>סיגמא</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>אינסולין-טרנספרין-נתרן סלניט מדיה תוסף</td><td>Sigma</td><td>I1884</td><td></td></tr><tr><td>צזיום כלוריד</td><td>סיגמא</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/289329?lang=en&amp; region=US" target="_blank">289329</a></td><td></td></tr><tr><td>Glutamate</td><td>Sigma</td><td>G3291</td><td></td></tr><tr><td>Adenosine 5'-triphosphate מלח מגנזיום</td><td>Sigma</td><td>A9187</td><td></td></tr><tr><td>אתילן גליקול-ביס(2-amin&#8211; thylether)-N,N,N',N'-חומצה טטראצטית</td><td>Sigma</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת צזיום הידרוקסיד</td><td>Sigma</td><td>232041</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת Tetraethylammonium hydroxide</td><td>Sigma</td><td>86643</td><td></td></tr><tr><td>OptiVisor משקפת זכוכית אופטית</td><td>Dohegan Optical Company Inc.</td><td>מלקחיים לרקמות N/A</td><td></td></tr><tr><td>, 5.5 אינץ', 1x2 שיניים</td><td>Roboz Scientific</td><td>RS-8164</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים מולוני - 4.5 אינץ' (11.5 ס"מ) עקומה קלה ארוכה, משוננת </td><td>Roboz Scientific</td><td>RS-8254</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #3 מלקחיים, Dumostar, גודל קצה 0.17 x 0.10 מ"מ</td><td>Roboz Scientific</td><td>RS-4966</td><td></td></tr><tr><td>Packer מלקחיים יתושים 5 אינץ' ישר</td><td>שטוח Roboz Scientific</td><td>RS-7114</td><td></td></tr><tr><td>מספריים מיקרו חיתוך 4.5 אינץ' מעוקל חד / חד </td><td>Roboz Scientific</td><td>RS-5917</td><td></td></tr><tr><td>מספריים מיקרו חיתוך 3.5 אינץ' ישר חד / חד 20 מ"מ</td><td>Roboz Scientific</td><td>RS-5907</td><td></td></tr></tbody></table>

בידוד, תרבות ואפיון פונקציונלי של cardiomyoctyes מאוס למבוגרים

Isolation, Culture, and Functional Characterization of Adult Mouse Cardiomyoctyes

השימוש בשריר לב ראשוני (CMS) בתרבות סיפק חזק כדי להשלים מודלים עכבריים של מחלת לב בקידום ההבנה של מחלת לב שלנו. בפרט, את היכולת ללמוד הומאוסטזיס יון, פונקצית ערוץ יון, התרגשות יתר סלולרית וצימוד עירור והתכווצות ושינוייהם בתנאים חולים ועל ידי מוטציות הגורמות למחלות הובילה לתובנות משמעותיות למחל לב. יתר על כן, חוסר שורת תאים הונצחה מספיק כדי לחקות את המבוגרים CMS, ואת המגבלות של CMS בילוד (אשר חסרים רבים האופייני ביומכניקה המבנית ותפקודי של המבוגר CMS) בתרבות שהקשו על ההבנה של יחסי הגומלין המורכבים בין מסלולי איתות שלנו, תעלות יונים ותכונות התכווצות בלב המבוגר חיזוק החשיבות של לימוד שריר לב מבודד מבוגר. כאן, אנו מציגים שיטות לבידוד, תרבות, המניפולציה של ביטוי גנים על ידי adenoviral-expreחלבוני ssed, וניתוח פונקציונלי הבא של שריר לב מהעכבר הבוגר. השימוש בטכניקות אלה יסייע לפתח תובנה מכניסטית לתוך איתות מסלולים המווסתים את הרגישות סלולרית, Ca 2 + דינמיקה והתכווצות ולספק הרבה יותר רלוונטי מבחינה פיזיולוגית אפיון של מחלות לב וכלי דם.

הבידוד של תוצאות cardiomyoctyes מבוגרים בתאים בצורת מוט, מפוספסים, ושקטים (לא באופן ספונטני מכות) (איור 5 א). תאים מתים ייראו מעוגלים ולא פסים יהיו נוכחים. תאי רגיעה יכולים להיות מתורבתים וtransfected עם adenovirus כדי לתפעל ביטוי גנים (5B דמויות ו5C). לאחר 24 שעות של תרבות, את המורפולוגיה של תאי חיים לא משתנות, הם עדיין Ca 2 +, סובלני, והם יכולים להיות בקצב על ידי גירוי תחום. בהליך המוצע, תשואה של תאי קיימא 80-90% יכולה להיות מושגת. </...

כאן אנו מתארים את הבידוד של cardiomyoctyes עכבר המבוגר באמצעות מערכת זלוף Langendorff. תאים וכתוצאה מכך הם Ca2 +, סובלניים, חשמלי שקט ויכולים להיות מתורבת וtransfected עם אדנו או lentiviruses כדי לתפעל ביטוי גנים. הפונקציונליות שלהם יכולה גם להיות מנותחת באמצעות מערכת MMSYS וטכניקות תיקון מהדק.

בידוד, תרבות ואפיון פונקציונלי של Cardiomyoctyes מאוס למבוגרים

The use of primary cardiomyocytes (CMs) in culture has provided a powerful complement to murine models of heart disease in advancing our understanding of ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לבודד תרבית ולהו 대해 התכווצות וטיפול בסידן בתאי שריר לב (cardiomyocytes) בוגרים של עכבר. דבר זה מושג תחילה על ידי הוצאת לב העכבר והנחתו ב-PBS בטמפרטורת החדר; ניתן לבצע קניולציה ללב בתוך הצלחת כפי שמוצג באיור, או ישירות על המחט המחוברת למערכת הפרפוזיה, כפי שמוצג בסרטון.השלב השלישי הוא שטיפה ועיכול של הלב על ידי הזרמה של תמיסת פרפוזיה, בופר, ולאחר מכן בופר אנזימטי דרך המערכת. השלב הסופי הוא חיתוך של הפרוventricles לתוך צלחית המכילה בופר העברה וקיצוץ עדין של הרקמה באמצעות פינצטה. בסופו של דבר, התוצאות יכולות להראות התכווצות של תאי cardiomyocyte בודדים וטיפול בסידן באמצעות מדידות של תא שלם ו/או אורך sarcomere ויחס רציומטרי.אינדיקטורים לסידן כגון RO 2:00 AM עם מערכת ה-ion optic. באופן כללי, אנשים שאינם מורגלים בשיטה זו יתקשו בתחילה, מכיוון שייתכן שיהיה קשה לתלות במהירות את הלב דרך האורטה מבלי לפגוע בכלי הדם או בלב עצמו. מזריקים לעכברים בוגרים, בגיל של כ-12 שבועות, 150 USP של heparin sodium לחלל הבטן.אם העכבר מיובש, יש להזריק לו 1 cc של תמיסת סלין. הרדמו את העכבר באמצעות הזרקה של תערובת קטמין-קסילזין במינון התלוי במשקל. יש לבדוק את העכברים כדי לוודא שהם תחת הרדמה עמוקה באמצעות בדיקת היעלמות רפלקס הצביטה באצבעות הגפה האחורית והאטה בקצב הנשימה. קבעו את העכבר המורדם למשטח הניתוח, לאחר מכן הוציאו את הלב והניחו אותו בצלחת עם סלין פיזיולוגי.באמצעות משקפי ניתוח opti vision, זהו וחשוף את האאורטה. אין צורך בהסרת הרקמה שסביב האאורטה לצורך בידוד תאים. ברגע ששורש האאורטה נראה בבירור, בצע ה priming למשאבה באמצעות בופר פרפוזיה.התחילו את השאיבה במהירות גבוהה כדי למלא את הצינורות ולוודא שאין בתוכם בועות. לאחר מכן, שאבו במהירות נמוכה כדי לקבוע את קצב הזרימה עבור פרפוזיית הלב. השתמשו במקלח מים עם סירקולציה כדי לשמור על טמפרטורת תמיסת הפרפוזיה ב-37 °C.השתמשו בפינצטת מיקרו-דיסקציה כדי להשחיל את האאורטה על המחט באופן דומה לגריב. ודאו שקצה המחט נח באאורטה העולה, באופן אידיאלי בשורש האאורטה (aortic root) דיסטלית לווריד השמאלי העליון (right innominate). לאחר מכן, קבעו את הלב למחט על ידי קשירה של חוט משי לתפירה באורך 10 centimeter סביב החלק העליון של האאורטה.ודא שהקשירה נמצאת בגובה האורטה העולה, מתחת לעורק האינומינאט הימני, אך מעל קצה המחט ומעל מסתם האורטה. כעת הורד את הלב אל תוך הכלי הקוני. פעולה זו מסייעת בשמירה על טמפרטורת הסביבה.בצעו פרפוזיה ללב באמצעות תמיסת פרפוזיה למשך חמש דקות בקצב של 1 mL לדקה, וסגרו את מוצא תא הזכוכית כדי לאפשר לתמיסת הפרפוזיה להצטבר בכלי הזכוכית הקוני ולעטוף את הלב. בשלב זה, אתם אמורים לראות עלייה בנפח הלב. בנוסף, הדם ברקמת הלב יוחלף בתמיסת הפרפוזיה, דבר שיגרום לחיוורון של הרקמה.עצרו את המשאבה כדי להעביר את הפיתול מהמכל של תחליל הפרופוזיה למכל של תחליל האנזים. שחררו את תסבית המוצא כדי לרוקן את ה-PERFU eight. הפעילו מחדש את המשאבה כדי להתחיל בביצוע פרופוזיה ללב.בזרימה של תמיסת בופר האנזים בקצב של 1 mL לדקה, סגרו שנית את תסביב היציאה כדי לאפשר לתמיסת הבופר לעטוף את הלב. בזמן שהאנזים מפעפע בלב ומעכל את הרקמה החיברית, הלב יהפוך לחיוור ושלמותו המבנית תפגע. עבור מתחילים, מומלץ לחבר את קו הפרפוזיה למנומטר.ניתן להשתמש במנומטר גם כדי לוודא שמיקום המחט נמצא מעל המסתם האאורטלי ולא בתוך החדר. לחץ נמוך מעיד על כך שהמחט נמצאת בחלל החדר, ולחץ גבוה מעיד על כך שהמחט נוגעת במסתם. כאשר הלב עובר עיכול, הלחץ יירד במהירות כיוון שהרקמה החיבורית אינה שומרת על ההתנגדות.כדי לקבוע מתי לחתוך את הפרוקי (ventricles) מהלב שעבר עיכול, הרים את הלב מתוך הכלי הזכוכית הקוני, לחץ בעדינות על הלב באמצעות פינצטה ואסוף מספר טיפות של PERFU eight לכלי פטרי קטן לצורך בדיקה. אם תאים בודדים נושרים תוך 8 עד 10 דקות, הלחץ החללי ירד ותוכל לראות תאים בודדים נכנסים ל-Perfu. Eight. ברגע שמופיע אחד מהסימנים הללו, חתוך את הפרוקי מהלב לתוך כלי מלא ב-transfer buffer A לקבלת הכנה אחידה יותר.גזרו והסירו את החדר הימני, והשאירו את החדר השמאלי כדי לקצץ ולבחון. אם יש עניין בחדר הימני, ניתן לקצץ אותו לאחר ההפרדה. בעזרת פינסטות למיקרו-דיסקציה, קצצו כל חדר בנפרד. עיכול מוצלח לא ישאיר כמעט גושים מוצקים של רקמה לאחר הקיצוץ, ומרבית הרקמה תהפוך לאמורפית בעקבות הדיסוציאציה.כדי להפריד עוד יותר את הרקמה, העבירו אותה דרך פיפטת פלסטיק (paster pipette) שקצוף קצהה. בזווית של 45 מעלות, הצמידו חתיכת רשת רבועית למשפך קטן באמצעות תפסים והניחו את מנגנון הסינון זה בתוך מבחנה של 15 מיליליטר. השתמשו בפיפטה המותאמת כדי להוציא את תמיסת התאים מהצלחת וסננו את התמיסה לתוך המבחנה של 15 מיליליטר.אפשרו לתאים החיים לשקוע לתחתית המבחנה, פעולה שתיארך מספר דקות. חלוקת הנפח לשתי מבחנות תגביר את המהירות. השקעה לאחר Ali.העבירו 2.5 milliliters של כל אחד מארבעת תמיסות הסידן לארבעה מבחנות של 15 milliliters נפרדות. השתמשו בפיפטה סטנדרטית כדי להעביר בזהירות את משקע התאים השקוע אל התמיסה הראשונה מבין תמיסות הסידן. המתינו עד שהתאים ישקעו לתחתית המבחנה וחזרו על התהליך.העברת התאים ששקעו דרך כל אחד ממסלולי תמיסות הסידן. כאשר התאים מועברים לתמיסת הסידן הרביעית, סגור את השפופרת באמצעות פקק והנח אותה על צדה. הפעל את מערכת ה-MM SIS תוך הבטחה שמנורת הקשת תופעל ראשונה.לאחר מכן, בצעו הטרייה (priming) למערכת באמצעות בופר סידן B. חברו את הצינורות מהמשאבה לכניסות וליציאות המתאימות של תא ה-cis של ה-MM. הדקו כיסוי זכוכית בגודל מתאים, בדרך כלל 20 על 25 מילימטרים, בתוך התא. העבירו 500 µL של תמיסת התאים לשפופרת eend orph קטנה.הוסיפו 0.5 µL של PHE 2:00 AM לתאים והניחו להם להדגיר בחושך בטמפרטורת החדר למשך חמש עד שבע דקות לאחר החשכת החדר. כעת התחילו להזרים בזהירות calcium buffer B דרך התא. רק לאחר שהזרימה החלה, ולא לפני כן, התחילו להעלות את טמפרטורת התא ל-37 °C.השתמשו בפיפטה מותאמת כדי להטפטף טיפה אחת או שתיים של תמיסת תאים על לביבת הזכוכית (cover slip), בהתאם לריכוז התאים, והמתינו לשקיעת התאים. צפיפות התאים בתא צריכה להיות כזו שניתן יהיה לזהות בקלות תאים בודדים שאינם חופפים במערכת לרכישת נתונים.וודאו שהתא מחובר ל-myo Pacer באמצעות חוטי החיבור והתחילו לקבוע את המתח והתדר עבור הניסוי. בחרו תא הפועם בתדר הנכון והעבירו אותו לתוך מפתח המסגור. כווננו את המצלמה ואת ממדי מפתח המסגור כך שכל התא יהיה במרכז החלון, מכוון בצורה אופקית כאשר ה-sarco mirrors גלויים.בשלב הבא, מקמו את התיבה באזור בתא המכיל סרקומרים מוגדרים היטב וכווןו את המיקוד כדי למקסם את שיאו של ספקטרום ההספק. כמו כן, כווןו את בהירות המיקרוסקופ כדי למטב את חלון ההחלקה הכחול ואת מידע הניגודיות השחור. הפעילו את מכפיל הפוטו-אלקטרונים והתחילו בהקלטה.לאחר שהוקלטו נתונים מספיקים, לחצו על pause כדי להשהות את ההקלטה באופן זמני. אין ללחוץ על stop, שכן פעולה זו תסיים את ההקלטה ולא ניתן יהיה להקליט רקע עבור תא זה.כעת, מבלי לשנות את המיקוד או את ממדי חלון התצוגה, הזז את שולחן המיקרוסקופ לאזור בלוחית הכיסוי שבו לא ניתן לראות תאים או חומר תאי. לאחר מכן, לחץ על resume כדי להקליט מדידת רקע. לאחר שהוקלט מספיק רקע, לחץ על stop כדי להפסיק את ההקלטה.לאחר מכן לחצו על שמירת קובץ (file save) כדי לשמור את כל העקבות עבור תא זה בקובץ ZPT יחיד. בידוד של קרדיומיוציטים בוגרים מביא לתאים שקטים, מפוספסים ובצורת מוט שאינם פועמים באופן ספונטני; חץ הראש מראה תאים מתים עגולים ללא פסיפסים. ניתן לתרבת תאים שקטים ולהחדיר אליהם אדנווירוס כדי לשלוט בביטוי גנים. לאחר 24 שעות של תרבית, המורפולוגיה של התאים החיים אינה משתנה.הם עדיין עמידים לסידן וניתן לקצוב אותם באמצעות גירוי שדה. ניתן להשיג תנובה של 85% עד 90% תאים חיוניים. מערכת ה-MM SIS שימשה למדידת כושר התכווצות ומעברי סידן של מיוציטים שנלקחו מעכבר מסוג C 57 black six מסוג בר, בו-זמנית.מדידה של כושר התכווצות ושל ויסות סידן בוצעה על ידי מדידת היחס בין הצורות הקשורות לבלתי הקשורות של fira 2:00 AM; מדידות היחס עשויות להשתנות מעט בין מערכים שונים, אך תאים בריאים מקבלים בדרך כלל ציון שבין 1.5 ל-2.5. על מנת לנתח את הנתונים מעקומות התכווצות וסידן, בוצע מיצוע של העקומות כדי ליצור עקומה מאפיינת עבור כל תא. באמצעות אלגוריתם לניתוח נתוני טרנזיינט בודד הנמצא בתוכנת ה-sys, הופקו פרמטרים לתפקוד הסיסטולי והדיאסטולי מהעקומות המאפיינות.לאחר צפייה בסרטון זה, תהיו בעלי הבנה טובה לגבי אופן בידודם של קרדיומיוציטים (תאי שריר לב) בוגרים בודדים של ימיים.

isolation-culture-functional-characterization-adult-mouse

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

תרבויות cardiomyocyte העכבר ראשיים הן אחד הכלים המרכזיים לחקירה של ארגון ותפקוד myofibrillar. הפרוטוקול הבא מתאר את הבידוד והתרבות של שריר לב עיקרי מלב עכבר בילוד. תרבויות cardiomyocyte וכתוצאה מכך עשויות לשמש בהמשך עבור מגוון רחב של מבחני ביומכנית, ביוכימי ותא ביולוגי.

בידוד והתרבות של שריר לב עכבר בילוד

ניתן לבודד קרדיומיוציטים בודדים מעכברים פראיים ועכברים מוטנטיים מהלב על מנת לחקור את ההתכווצות שלהם ואת מעברי הסידן שלהם. זה מאפשר לאפיין את התרומה של תפקוד לקוי של התאים לתפקוד לקוי של הלב מכל סיבה שהיא.

בידוד ופיזיולוגי ניתוח של שריר לב העכבר

אנו מתארים שיטה אמינה לבידוד של שריר לב עכבר בוגר. פרוטוקול זה מניב תוצאה עקבית לתרבות של שריר לב בוגר מתפקד ממגוון רחב של עכברים מהונדסים גנטי.

בידוד והתרבות של שריר לב מאוס למבוגרים לתא איתות ו<em&gt; במבחנה</em&gt; לב היפרטרופיה

פרוטוקול זה מתאר שיטה שלב אחר שלב לבידוד הניתן לשחזור ותרבית ארוכת טווח של קרדיומיוציטים של עכברים בוגרים עם תפוקה, טוהר וכדאיות גבוהים.

בידוד, תרבות התמרה של cardiomyocytes עכבר למבוגרים

שיטות הם הפגינו לבידוד של מיוציטים צומת sinoatrial (Sams) מעכברים בוגרים ללימודי electrophysiology צמד תיקון או הדמיה. תאים מבודדים ניתן להשתמש ישירות או יכול להישמר בתרבות להתיר ביטוי של חלבונים של עניין, כגון עיתונאים מקודדים גנטית.

שיטות הבידוד, תרבות האפיון פונקציונלי של myocytes צומת Sinoatrial של עכברים בוגרים

המטרה הכוללת של מאמר זה היא כדי לתקנן את הפרוטוקול עבור בידוד, אפיון, התמיינות של תאי גזע הלב (CSCs) מהלב העכבר למבוגרים. כאן, אנו מתארים שיטה צנטריפוגה הדרגתיות צפיפות לבודד CSCs מאתר ושיטות הארוטיות תרבות CSC, התפשטות של בידול לתוך cardiomyocytes.

בידוד, אפיון, התמיינות של תאי גזע הלב מהלב העכבר למבוגרים

הפרוטוקול הזה משמש כדי לבודד פרפור לב בודד מהלב של העכבר המבוגר באמצעות הגישה העיכול קטע. גישה זו משמשת כדי לבודד את הפרפור הימני או השמאלי, שניתן להשתמש בו כדי לאפיין את פרפור מיציט אלקטרופיזיולוגיה במחקרים הדבקת מהדק.

בידוד של פרפור מיוציטים מעכברים למבוגרים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לבידוד, טרנס-תירטוי ותרבות ארוכת טווח של עכבר בוגר וקרדיומיוציטים של חולדות.

בידוד, טרנס-תירבה ותרבות ארוכת טווח של עכבר מבוגר וקרדיומיוציטים עכברים וחולדות

שיטה מתוארת לבידוד בו זמנית של מיוציטים ולא מיוציטים הן מהאטיה והן מחדרי הלב של עכבר בוגר יחיד. פרוטוקול זה מביא לתשואות עקביות של מיוציטים לבביים ברי קיימא מאוד ולא מיוציטים ומפרט תנאי תרבות אופטימליים ספציפיים לתאים עבור פנוטיפים וניתוח במבחנה.

בידוד ותרבות בו זמנית של מיוציטים פרך, מיוציטים חדריים, ולא מיוציטים מלב עכבר בוגר

תקן הזהב בקרדיולוגיה לניסויים פונקציונליים תאיים ומולקולריים הוא קרדיומיוציטים. מאמר זה מתאר התאמות לטכניקה שאינה לנגנדורף לבידוד קרדיומיוציטים של עכברים.

שיטה פשוטה ויעילה לבודד באופן עקבי קרדיומיוציטים עכבר

למדו לבודד ולתרבות קרדיומיוציטים מבוגרים מעכברים באמצעות מערכת פרפוזיית לנגנדורף. השיטה מאפשרת ניתוח תפקודי של התכווצות וטיפול בסידן בתאי שריר הלב לחקר ביולוגיה קרדיווסקולרית.

בידוד, תרבות ואפיון פונקציונלי של Cardiomyoctyes מאוס למבוגרים

גלה סרטונים נוספים