מטבולית תיוג של אוצין עשיר חזור קינאזות 1 ו -2 עם רדיואקטיבי פוספט

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא לתייג את החלבונים המעניינים בפוספטים רדיואקטיביים על מנת לכמת את החלבונים, רמות הזרחן התאי. זה מושג על ידי תרבית תאים בנוכחות זרחן 32 כדי לסמן רדיואקטיבית את שינויי הפוספט של חלבונים המתבטאים בתאים. כשלב שני, תאים מסומנים עוברים ליזה וליזטים מודגרים עם חרוזי זיקה לטיהור חיסוני של החלבונים שיש לנתח.

דגימות הבאות של חלבונים מסומנים ומטוהרים מופעלות על סולפט התפלת נתרן דו, אלקטרופורזה של ג'ל פולי אקרילאמיד ומוכתמות לממברנות פלואוריד פולי אולאין. על מנת לזהות שילוב פוספט רדיואקטיבי ורמות חלבון, מתקבלות תוצאות המראות קינאזות חוזרות עשירות בלאוצין 1 ו-2, בקיצור L rrk 1 ו-L rrk 2 זרחנים בתאים לרמות דומות על סמך רדיוגרפיה אוטומטית וזיהוי חיסוני. יתרון עיקרי של טכניקת התיוג המטבולי בהשוואה לטכניקות אחרות כגון פוספו, ספיגה חיסונית, הוא שטכניקה זו מאפשרת קביעת רמות זרחון תאיות כוללות של חלבונים, כולל עבור חלבונים שעבורם אין נוגדנים לפוספו.