Name: מערכת Coculture עם מוח פרוס Organotypic ו3D אליפטית של קרצינומה של תאים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-10-09T22:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 48 s
Description: למדו לדמיין אינטראקציות בין תאי גליה וקרצינומה במהלך היווצרות גרורות מוחיות. השיטה משתמשת בפרוסות מוח אורגנוטיפיות מעכברים בשיתוף תרבות עם תאי סרטן וצביעה פלואורסצנטית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים Chalid Ghadban לסיועו הטכני המעולה, אנדראס Wodarz וסטפן Heermann לייעוץ הטכני שלהם לגבי confocal ומיקרוסקופיה הזמן לשגות. אין ניגוד עניינים לכל אחד מהכותבים. עבודה זו ממומנת על ידי מועצת המחקר הגרמנית (DFG) בפרויקט 2 של Forschergruppe 942 (FOR942 BI 703/3-1), על ידי Dres. באייר-Stiftung (אדן Württembergischer Krebspreis, גרמניה) ועל ידי תכנית המחקר של הפקולטה לרפואה, גיאורג אוגוסט-אוניברסיטת גטינגן שבגרמניה.

זה דגם חדש הוא עיבוד של גישת פרוסת המוח בהיפוקמפוס organotypic שפורסמה בעבר 9-12. שינויים ותוספות הוכנסו כדי לייעל את אינטראקציות רקמת סרטן תאי מוח ועל מנת להבטיח שחזור. המחקר נבדק ואושר על ידי ועדת האתיקה המקומית. טופלו בעלי חיים בזהירות על פי ההנחיות לטיפול בבעלי החיים בגטינגן לרפואה באוניברסיטה. Coculture פרוסת מוח organotypic אפשר לחלק לשני שלבים. שלב הראשון הוא ההכנה של פרוסת מוח organotypic. שלב שני כולל את הכנת תאים הסרטניים ותצהיר במודל coculture. 1. Organotypic מוח פרוס <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את המדיום לנתיחה בהיקף של מדיום המינימום ההכרחי (MEM), בתוספת 0.2 גלוטמין מ&quot;מ, 100 U / ml פניצילין, 100 מ&quot;ג / מיליליטר סטרפטומיצין, ו4.5 מ&quot;ג / מיליליטר של גלוקוז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לערוף את העכברים מכל זן עכבר בין יום הלידהשישה ושמונה (P6-8). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את המוח במהירות מהגולגולת בתנאי aseptic ולהעביר אותו למדיום לנתיחה קר כקרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את המוט הקדמי ובמוח קטן מכל החלק במוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתקן ולייצב את המוח על במה עם דבק cryo וagarose 5%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פורסים את החלקים במוח בצורה אופקית בעובי 350 מיקרומטר באמצעות vibratome. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף 5:56 פרוסות מוח כולו ממוח עכבר אחת, בהתאם למין וגיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את התרבות בינונית בהיקף של MEM 50%, פתרון 25% הנקס &#39;מאוזן מלח (HBSS), 25% בסרום סוס רגיל (NHS), 0.2 גלוטמין מ&quot;מ, 100 U / ml פניצילין, 100 מ&quot;ג / מיליליטר סטרפטומיצין (Sigma, מינכן, גרמניה), וגלוקוז 4.5 מ&quot;ג / מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את כל פרוסה מוח organotypic על הוספת קרום 0.4 מיקרומטר פוליקרבונט transwell בצלחת שש היטב עם 1 מיליליטר של מדיום גידול בנמוך יותר טוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לילה פרוסות מוח organotypic התרבות בhumidifieאווירת ד עם 5% CO 2 באינקובטור 37 מעלות צלזיוס. </li></ol> 2. דגם Slice Coculture <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להטביע 10 5 של גידול-transfected GFP או תאים אחרים (תאים למשל MCF-7-GFP) ב20 מטריצת ג&#39;ל μl, בהיקף של 15% מדיום RPMI ו85% ג&#39;ל ECM. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את תערובת מטריצת MCF-7-ג&#39;ל לspacer סטרילי המתכתי (קוטר 3.8 מ&quot;מ) ישירות בסמוך לאזור בקליפת המוח של פרוסת מוח organotypic ו דגירה במשך שעה 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את spacer ולאפשר אליפטית גידול 3D לcoculture עם פרוסת organotypic ל24-96 שעה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשנות את מדיום התרבות בכל יום אחר. </li></ol> 3. הכתמה Immunofluorescence של האסטרוציטים וmicroglial בOrganotypic המוח פרוס Coculture <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן coculture פרוסת מוח organotypic עם paraformaldehyde 4% במשך 8 שעות ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף את coculture פרוסה עם PBST (PBS עם 0.5% טריטון X-100) במשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחסום את יםamples עם סרום נורמלי עז בPBST (1:20) בטמפרטורת חדר במשך שעה 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להכתים את האסטרוציטים ידי דוגרים coculture פרוסת המוח עם נוגדן fibrillary נגד גליה חומצי חד שבטי חלבון (GFAP, 1:200 בPBST) ל36 שעות ב 4 ° C ואחרי עז אנטי עכבר TRITC (1:100 בPBST) מכתים במשך שעה 1 בטמפרטורת חדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף את הדגימות עם פעמים PBST שלוש למשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כתם תאי microglial עם ILB 4-Alexa פלואוריד 647 (1:100 בPBST) במשך שעה 1 בטמפרטורת חדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Counterstain coculture מוח פרוסה עם DAPI (1:1,000) במשך 3 דקות בטמפרטורת חדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ההר וcoverslip coculture פרוסת המוח עם מדיום הרכבה ניאון DAKO. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך את הכיתה של פלישת גידול המבוסס על שיטת הניקוד הבאה: 0 = אף אחד מהתאים; + &lt;1/3; + + = 1/3 - 2/3; + + + ≥ 2/3 מהתאים פלשו (ראשון למדוד את אורכו של קשר הקטע שבין התוספת הגידול ופרוס, ולאחר מכן למדוד את fraction מגע לזיהוי על ידי התאים הפולשים). </li></ol> 4. הדמיה חיה של האינטראקציה בין גליה ותאים סרטניים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את הניסוי מתחת לייקה הפוך מיקרוסקופ DMI 6000B ב10X עדשת הגדלה ומצלמת CCD 350 FX היקה DFC. </li></ol>

<ol><li>Langley, R. R., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+seed+and+soil+hypothesis+revisited--the+role+of+tumor-stroma+interactions+in+metastasis+to+different+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">The seed and soil hypothesis revisited--the role of tumor-stroma interactions in metastasis to different organs.</a> Int. J. Cancer. 128, 2527-2535 (2011).</li>
<li>Joyce, J. A., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microenvironmental+regulation+of+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Microenvironmental regulation of metastasis.</a> Nat. Rev. Cancer. 9, 239-252 (2009).</li>
<li>Mantovani, A., Allavena, P., Sica, A., Balkwill, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer-related+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cancer-related inflammation.</a> Nature. 454, 436-444 (2008).</li>
<li>Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+organ+microenvironment+in+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Cancer+Biol%22%5BJournal%5D)">The role of the organ microenvironment in brain metastasis.</a> Semin. Cancer Biol. 21, 107-112 (2011).</li>
<li>Rath, B. H., Fair, J. M., Jamal, M., Camphausen, K., Tofilon, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytes+enhance+the+invasion+potential+of+glioblastoma+stem-like+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Astrocytes enhance the invasion potential of glioblastoma stem-like cells.</a> PloS one. 8, e54752(2013).</li>
<li>Steeg, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+metastasis%3A+mechanistic+insights+and+clinical+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Tumor metastasis: mechanistic insights and clinical challenges.</a> Nat. Med. 12, 895-904 (2006).</li>
<li>Eichler, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+of+brain+metastases-translation+to+new+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">The biology of brain metastases-translation to new therapies.</a> Nat. Rev. Clin. Oncol. 8, 344-356 (2011).</li>
<li>Winkler, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+glioma+cell+invasion+in+vivo+reveals+mechanisms+of+dissemination+and+peritumoral+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Imaging glioma cell invasion in vivo reveals mechanisms of dissemination and peritumoral angiogenesis.</a> Glia. 57, 1306-1315 (2009).</li>
<li>Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+organotypic+cultures+of+nervous+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method for organotypic cultures of nervous tissue.</a> J. Neurosci. Methods. 37, 173-182 (1991).</li>
<li>Kreutz, S., Koch, M., Ghadban, C., Korf, H. W., Dehghani, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cannabinoids+and+neuronal+damage%3A+differential+effects+of+THC%2C+AEA+and+2-AG+on+activated+microglial+cells+and+degenerating+neurons+in+excitotoxically+lesioned+rat+organotypic+hippocampal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Cannabinoids and neuronal damage: differential effects of THC, AEA and 2-AG on activated microglial cells and degenerating neurons in excitotoxically lesioned rat organotypic hippocampal slice cultures.</a> Exp. Neurol. 203, 246-257 (2007).</li>
<li>De Simoni, A., Yu, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+organotypic+hippocampal+slice+cultures%3A+interface+method%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Preparation of organotypic hippocampal slice cultures: interface method.</a> Nat. Protoc. 1, 1439-1445 (2006).</li>
<li>Fuller, L., Dailey, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+rodent+hippocampal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22CSH+Protoc%22%5BJournal%5D)">Preparation of rodent hippocampal slice cultures.</a> CSH Protoc. 2007, pdb prot4848(2007).</li>
<li>Lorger, M., Felding-Habermann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capturing+changes+in+the+brain+microenvironment+during+initial+steps+of+breast+cancer+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Capturing changes in the brain microenvironment during initial steps of breast cancer brain metastasis.</a> Am. J. Pathol. 176, 2958-2971 (2010).</li>
<li>Brana, C., Biggs, T. E., Mann, D. A., Sundstrom, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+macrophage+hippocampal+slice+co-culture+system%3A+application+to+the+study+of+HIV-induced+brain+damage%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">A macrophage hippocampal slice co-culture system: application to the study of HIV-induced brain damage.</a> J. Neurosci. Methods. 90, 7-11 (1999).</li>
<li>Kim, J. A., Yamada, M. K., Nishiyama, N., Matsuki, N., Ikegaya, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mossy+fiber+pathfinding+in+multilayer+organotypic+cultures+of+rat+hippocampal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Mol.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Mossy fiber pathfinding in multilayer organotypic cultures of rat hippocampal slices.</a> Cell. Mol. Neurobiol. 23, 115-119 (2003).</li>
<li>Matsumura, H., Ohnishi, T., Kanemura, Y., Maruno, M., Yoshimine, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+glioma+cell+invasion+by+confocal+laser+scanning+microscopy+in+a+novel+brain+slice+model%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Biophys.+Res.+Commun%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of glioma cell invasion by confocal laser scanning microscopy in a novel brain slice model.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 269, 513-520 (2000).</li>
<li>Charles, N. A., Holland, E. C., Gilbertson, R., Glass, R., Kettenmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+brain+tumor+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">The brain tumor microenvironment.</a> Glia. , (2011).</li>
<li>Mizutani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fractalkine+receptor+but+not+CCR2+is+present+on+microglia+from+embryonic+development+throughout+adulthood%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">The fractalkine receptor but not CCR2 is present on microglia from embryonic development throughout adulthood.</a> J. Immunol. 188, 29-36 (2012).</li>
<li>Kettenmann, H., Hanisch, U. K., Noda, M., Verkhratsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Physiology of microglia.</a> Physiol. Rev. 91, 461-553 (2011).</li>
<li>Markovic, D. S., Glass, R., Synowitz, M., Rooijen, N., Kettenmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+stimulate+the+invasiveness+of+glioma+cells+by+increasing+the+activity+of+metalloprotease-2%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuropathol.+Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Microglia stimulate the invasiveness of glioma cells by increasing the activity of metalloprotease-2.</a> J. Neuropathol. Exp. Neurol. 64, 754-762 (2005).</li>
<li>Baumert, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pathology-based+substrate+for+target+definition+in+radiosurgery+of+brain+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Radiat.+Oncol.+Biol.+Phys%22%5BJournal%5D)">A pathology-based substrate for target definition in radiosurgery of brain metastases.</a> Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 66, 187-194 (2006).</li>
<li>Palmieri, D., Chambers, A. F., Felding-Habermann, B., Huang, S., Steeg, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+of+metastasis+to+a+sanctuary+site%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">The biology of metastasis to a sanctuary site.</a> Clin. Cancer Res. 13, 1656-1662 (2007).</li>
<li>Pukrop, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+promote+colonization+of+brain+tissue+by+breast+cancer+cells+in+a+Wnt-dependent+way%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Microglia promote colonization of brain tissue by breast cancer cells in a Wnt-dependent way.</a> Glia. 58, 1477-1489 (2010).</li>
<li>Bos, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+that+mediate+breast+cancer+metastasis+to+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genes that mediate breast cancer metastasis to the brain.</a> Nature. 459, 1005-1009 (2009).</li>
</ol>

יש לנו מה למסור.

חקירות היסטולוגית קודמות של גרורות במוח הראו שינויים מהירים ודרסטי של תאי גליה תושב, במיוחד של האסטרוציטים ומיקרוגליה 13. ללמוד את השינויים האלה ואת אינטראקציות עם קרצינומה של התאים, מערכת coculture רומן הזה היא גם מתאימה. כבר יש לי תחומי מחקר אחרים ניסיון ארוך שנים עם פרוסות מוח בהיפוקמפוס organotypic. אחד יתרונות הוא שהתרבויות הפרוסה המוח בהיפוקמפוס organotypic הן קיימא והיעילות השתמרה במשך ימים עד שבועות, מה שהופך אותו מתאים לניסויים לטווח ארוך. מאז ההשקה של Stoppini של המערכת הפרוסה בהיפוקמפוס organotypic ב1991, זה היה בשימוש נרחב, למשל במחקר של מחלות ניווניות. לפיכך, מערכת coculture לחדש זה מייצגת שינוי של גישה מבוססת היטב עם מגוון רחב של יישומים ב9,11 ביולוגיה גידול. השינוי הציע לנו מודל לשחזור כדי להעריך את הציון של af פלישת גידולterwards ותרבויות גדלו בשיטת הממשק מתאימות בצורה אידיאלית לניסויים הדורשים מבנה תלת ממדים. כמה טכניקות שנוצלו כדי coculture פרוסות בהיפוקמפוס organotypic עם תאים אחרים. אלה כוללים מערכת עקיפה בין תאי מקרופאג ופרוסת מוח organotypic 14, וcoculture ישיר של שתי פרוסות שונות מהאזור בהיפוקמפוס 15. אגרגטים גליומה יש גם cocultured עם פרוסות מוח 16. מודלים אלה יכולים לשמש כדי לנתח את האירועים תאיים ומולקולריים בפרוסות המוח, אבל לא מאפשרים מגע ישיר, פיסיולוגי בין תאים סרטניים, מיקרוגליה וparenchyma המוח. יתר על כן, שיטה זו מאפשרת התצפית של מיקרוגליה ללא זיהום של מונוציטים / מקרופאגים היקפיים המופק ממוח עצם. השימוש במודל עכבר מהונדס CCR2 וCX3CR1 הוא שיפור קריטי בשל העובדה שקשה להבחין מיקרוגליה תושב מפולשים מונוציטיםהמבוסס על המאפיינים דומים שלהם 17,18,19. למרות הזרקה תוך מוחית של קרצינומה של תאים מאפשרת חוקרת התקדמות גידול, שהוא לא יכול להגיד הרבה, האם התאים כמו מקרופאג-המוקף מקורן אוכלוסיית מיקרוגליה מוח תושב או ממונוציטים / מקרופאגים שמקורם במח עצם היקפיים 17. צוות של Kettenmann הציג מודל פרוסת מוח organotypic כי המעורבים ייחסו תאי גליומה לפרוסות מוח עם micromanipulator 20. עם זאת, גליומות הממארת הראשונית שונה בהרבה דרישת שלום מקרצינומות גרורתי. ראשית, גליומות הממארת הן ממוצא mesenchymal, לא לשלוח גרורות מחוץ למערכת העצבים, ולהעביר / לפלוש לתאים בודדים כללא גבול בין גידול ורקמת המוח. לעומת זאת, צמיחת infiltrative היא מאפיין פתולוגי טיפוסי, וקרצינומות כזו בדרך כלל להעביר / לפלוש כקבוצות. שנית, קרצינומות לעתים קרובות מנסות לבנות מחדש את מבני אפיתל במוח, ואילו תאי גלייהמנסה להפריד את הגידול מרקמת המוח על ידי כמוסה (פסאודו). בהתחשב בתכונות ביולוגיות ומורפולוגיים, גליומה וגרורות של קרצינומות הממאירות הן לא ממש דומות. מסיבות אלה, אנו שונה ופיתחו מערכת coculture בו אנחנו לא coculture להזריק אבל התוספת תא קרצינומה סמוכה לפרוסת המוח. יתר על כן, צפינו microglial וצבירת astrocytic בגבול של התוספת הגידול, כלומר, מיקרוגליה להיכנס לתוספת הגידול וניתן היה לזהות בקלות על ידי מיקרוסקופ שדה הבהיר ואישרו לאחר מכן על ידי מיקרוסקופיה confocal. התאים הסרטניים לפלוש לתוך פרוסת המוח, שהוא דומה לאמיתי במצב vivo ולתצפית שנעשתה על ידי Baumert ועמיתיו, שמצאו את אזור חדירה ב63% מהמקרים ניתוח שלאחר המוות במוחה גרורות 21. בגלל טפטוף הדם החסר, יש רק מקרופאגים / מיקרוגליה תושב בתרבות זו. יתר על כן, בגלל מ &#39;תאי issing T, ולכן נעדרו allo-תגובתיות, קרצינומה של תאים אנושיים יוכל לשמש עבור coculture אפילו עם פרוסות מוח של עכברים עם מערכת חיסון או חולדות (NMRI, B6, או Wistar). זה יכול לשמש כתחליף לעכבר מודל העירום. מאז ניתן להשיג 4:56 פרוסות מכל עכבר, מספרים מופחתים באופן משמעותי של בעלי חיים נדרשים, בהשוואה לדגמי הזרקה הקיימת. בנוסף, בעלי החיים לא סובלים לתקופה של מחלה גרורתית ארוכה והם לא עוברים תהליכים אופרטיביים שוב ושוב 22. עם מערכת coculture זה, יש לנו הפגין ההפעלה של מיקרוגליה על ידי תאים סרטניים ואת היכולת של קידום פלישת תאי הסרטן. בנוסף, זו הפעם הראשונה, למיטב ידיעתנו, מיקרוגליה נמצאו להובלה באופן פעיל בתאי קרצינומה 23. למרות כל היתרונות הללו, מערכת coculture יש, אכן, גם מגבלות. זה עדיין במבחנהמודל חסר השלבים של גרורות לפני קולוניזציה. בגלל חוסר זלוף, לא ניתן ללמוד את extravasation. לפיכך, הדרך החלופית ללמוד extravasation היא להשתמש גם in vivo המערכת הקאמרית בוידן הותאם מודל הזרקה או עם מטריצה ​​תאית, HUVEC והאסטרוציטים לחקות את מחסום דם מוח 22,24. שיטת coculture פרוסת המוח היא עדיין מודל אמין לשחזור עם יתרונות רבים ופוטנציאל למגוון רחב של יישומים, כגון ניתוח של התישבות, בפרט עם דגש על תפקידם של תאי תושב. שילוב עם טכניקות אחרות שהוקמו (כגון אימונוהיסטוכימיה, מיקרוסקופיה confocal ומיקרוסקופיה הזמן לשגות) תומך בחקירה של אינטראקציות תא אל התא ישירים. זוהי חלופה קלה ושלמה של טכניקות אחרות, ומציעה גישה לחקירה של הרמזים ואפקטים כמו שהוטלו על ידי microenvironment גרורתי.

<table><tbody><tr><td>האנק&#039; s תמיסת מלח מאוזנת (HBSS)</td><td>Gibco, דרמשטדט, גרמניה</td><td>24020</td><td></td></tr><tr><td>מדיום חיוני מינימלי (MEM)</td><td>Gibco, דרמשטדט, גרמניה</td><td>32360</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640</td><td>PAA Laboratories Inc., C&ouml; lbe, גרמניה</td><td>E15-840</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&#039; s פוספט חוצץ מלח (PBS)</td><td>Pan Biotech, Aidenbach, גרמניה</td><td>P04-36500</td><td></td></tr><tr><td>סרום סוסים רגיל (NHS)</td><td>Invitrogen, קרלסרוה, גרמניה</td><td>16050-122</td><td></td></tr><tr><td>סרום עגל עוברי (FCS)</td><td>Invitrogen, קרלסרוהה, גרמניה</td><td>10091148</td><td></td></tr><tr><td>גלוקוז</td><td>B. Braum, Melsungen, גרמניה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>L-גלוטמין-פניצילין-סטרפטומיצין תמיסת</td><td>סיגמא, Steinheim , גרמניה</td><td>G1146</td><td></td></tr><tr><td>Vibratome</td><td>Leica , וצלר, גרמניה</td><td>Leica VT1200S</td><td></td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Leica , וצלר, גרמניה</td><td>Leica SM 2000R</td><td></td></tr><tr><td>ממברנת פוליקרבונט</td><td>BD Falcon, היידלברג, גרמניה</td><td>353090</td><td>הכנסת ממברנה טרנסוול (0.4 &mu; m גודל נקבוביות)</td></tr> <tr><td>ג'ל ECM</td><td>Trevigen, R& D, ויסבאדן-נורדנשטדט, גרמניה</td><td>3432-005-01</td><td>תמצית קרום מרתף</td></tr><tr><td>מרווח מתכתי</td><td>Kig GmbG, קירקל, גרמניה</td><td>DIN 433</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ קונפוקלי</td><td>Zeiss, G&ouml; ttingen, גרמניה</td><td>מיקרוסקופ ומצלמה LSM 510</td><td></td></tr><tr><td>Time-lapse</td><td>Leica, Wetzlar, גרמניה</td><td>מיקרוסקופ DMI 6000B ומצלמת DFC 350 FX CCD</td> מיקרוסקופ אנטומיה Zeiss, G&ouml;<td></td></tr><tr><td></td><td> ttingen, גרמניה</td><td>Stemi SV11</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Merck, דרמשטאדט, גרמניה</td><td>1.04005.1000</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן חלבון חומצי סיבי חד-שבטי נגד גליה (GFAP) של עכבר</td><td>Sigma, Steinheim, גרמניה</td><td>G3893</td><td></td></tr><tr><td>עז נגד עכבר IgG, F(ab&#039;)2- TRITC</td><td>Santa Cruz, היידלברג, גרמניה</td><td>SC3796</td><td></td></tr><tr><td>איזולקטין GS-IB4 מ- Griffonia simplicifolia, Alexa Fluor 647 conjugate</td><td>Invitrogen, קרלסרוה, גרמניה</td><td>132450</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4&#039;,6&#039;-diamidino-2-phenylindole dihyfrochloride)</td><td>Sigma, Steinheim, גרמניה</td><td>D8417</td><td></td></tr><tr><td>מדיום הרכבה פלואורסצנטי</td><td>DAKO, גלוסטרופ, דנמרק</td><td>עונה 3023</td><td></td></tr></tbody></table>

מערכת coculture עם מוח פרוס organotypic ו3d אליפטית של קרצינומה של תאים

Coculture System with an Organotypic Brain Slice and 3D Spheroid of Carcinoma Cells

יש חולים עם גרורות במוח של קרצינומות פרוגנוזה גרועה. עם זאת, התהליך באתר גרורתי בקושי נחקר, במיוחד את תפקידו של תושב תאים (סטרומה). מחקרים בקרצינומות העיקרית להדגים את ההשפעה של microenvironment על ​​גרורות, אפילו על 1,2 הפרוגנוזה. במיוחד מקרופאגים הגידול משויכים (TAM) הגירת תמיכה, פלישה והתפשטות 3. מעניין לציין, כי אתרי המטרה העיקריים של גרורות ברשות מקרופאגים רקמות ספציפיות, כגון תאי Kupffer בכבד או מיקרוגליה במערכת העצבים המרכזית. יתר על כן, האתרים גרורתי גם להחזיק תאי רקמה ספציפית אחרים, כמו האסטרוציטים. לאחרונה, האסטרוציטים הודגמו לטפח התפשטות והתמדה של תאים סרטניים 4,5. לכן, נראה שפונקציות של סוגי תאי רקמות ספציפיות אלה כדי להיות חשובים מאוד בתהליך של 6,7 גרורות במוח. למרות תצפיות אלה,עם זאת, עד עכשיו אין מתאים in vivo / במבחנה מודל זמין ישירות לדמיין תגובות גליה במהלך היווצרות גרורה במוח, בפרט על ידי מיקרוסקופ שדה הבהיר. אחרונים בתחום ההדמיה לחיות vivo של תאי קרצינומה הפגין קולוניזציה ההתנהגות המוחית שלהם 8. עם זאת, שיטה זו היא מאוד מייגע, יקרה ומורכבת מבחינה טכנית. בנוסף, סוגים של ניסויים בבעלי חיים אלה מוגבלים לסדרות קטנות ומגיעים עם לחץ משמעותי עבור בעלי החיים (על ידי השתלה של צלחת הזכוכית, הזרקה של תאים סרטניים, הרדמה חוזרת וקיבוע לטווח ארוך). יתר על כן, in vivo הדמיה מוגבלת עד כה להדמיה של תאי הסרטן, ואילו אינטראקציות עם תאי תושב טרם מאוירות. לבסוף, חקירות של קרצינומה של תאים אנושיים בבעלי חיים עם מערכת חיסון הן בלתי אפשריים 8. מסיבות אלה, הקמנו consi מערכת cocultureעוקץ של פרוסה organotypic עכבר מוח ותאי האפיתל המוטבע בmatrigel (מרחב תא 3D). תחומי תא קרצינומה 3D הונחו ישירות ליד קצה פרוסת המוח כדי לחקור את הפלישה של רקמת המוח הסמוכה. זה מאפשר לנו לחזות שינויים מורפולוגיים ויחסי גומלין בין תאי גליה וקרצינומה של התאים על ידי הקרינה ואפילו על ידי מיקרוסקופ שדה הבהיר. לאחר ניסוי coculture, רקמת המוח או הספרואידים תא 3D יכולה להיות שנאספו ומשמשת לניתוחים נוספים מולקולריים (למשל qRT-PCR, IHC, או immunoblot), כמו גם לחקירות על ידי מיקרוסקופיה confocal. שיטה זו יכולה להיות מיושמת כדי לפקח על האירועים בתוך רקמת מוח חי במשך ימים בלי השפעות מזיקות לפרוסות המוח. המודל גם מאפשר דיכוי והחלפה של תאי תושב על ידי תאים מרקמות תורמות כדי לקבוע את ההשפעה מובהקת של גנוטיפ נתון סלקטיבית. לבסוף, מודל coculture הוא אלטרנטיבה מעשיתלin vivo גישות כאשר בודקים מניפולציות תרופתי ממוקדות.

ראשית, כל התאים המשמשים קרצינומה (אנושי: MCF-7 והעכבריים: 410.4) פלשו פרוסת מוח עכבר organotypic. הפלישה הייתה אפוא מינים עצמאיים (איור 1 א), אשר מצביעה על מגוון רחב של יישומים באופן מינים עצמאיים. בנוסף, מיקרוגליה, כמו גם האסטרוציטים שנצברו בממשק כפי שתואר לעיל in vivo ו בדגימות מטופל 13. זמן לשגות הדמיה על פני תקופה ממושכת של זמן חשפה לא רק את הכדאיות של הפרוסה, אלא גם הציעה פלטפורמה טובה כדי לבחון את האינטראקציות הסלולר. על ידי ניסויי זמן לשגות, תאי microglial נרשמו להיכנס תוך מרחב תא 3D, בתורו, תאי הסרטן פלשו גם פרוסת המוח (איורים 1B1-B2). יתר על כן, יש לנו הראינו בעבר את היכולת של מיקרוגליה להובלת קרצינומה של תאים על ידי מנגנון עדיין חידתי כדי לסייע בכך בפלישת קרצינומה. באמצעות שימוש בטכניקות תיוג immunofluorescence, אנחנותאר שיתוף מגויר של תאים סרטניים ותאי סטרומה (למשל מיקרוגליה ואסטרוציטים), שניהם ברקמת המוח ובתוספת של תאי גידול (איורים 1C-D), המצביעים על יחסי גומלין הדוקים בין תאים אלה במהלך תהליך הפלישה. תוצאות דומות התקבלו כאשר פרוסות מוח העכבר היו cocultured או עם אדם (איורים 1C1-C3) או עכברי קרצינומה של תאים (איורים 1D1-D3) - מראה את מגוון הרחב של יישומים לחקר תאים ממינים שונים, גנוטיפים וזנים. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/50881/50881fig1.jpg" fo:content-width="4.75in" fo:src="/files/ftp_upload/50881/50881fig1highres.jpg" /> איור 1. מודל מוח פרוס coculture עם אליפטית 3D של עכבר וקרצינומה של תאים אנושיים. א) כימות של פלישת תאים סרטנית בcocultures פרוסת המוח כל organotypic עם סרטן שד בעכברשורת תאים 410.4 או שורת תאי סרטן שד אנושית MCF-7. הנתונים מייצגים את אחוז את מידת פלישת תא למוח פרוס בכל קבוצה עם ≥ n 38. לא היה הבדל משמעותי בין שתי קבוצות אלה (מבחן קרוסקל-ארהב). ב &#39;) זמן לשגות תמונות של cocultures פרוסת המוח כל organotypic עם תאי MCF-7-GFP ותמונות מייצגות מday2 (B1) ויום 5 (B2) היו מוצג. תמונות מיקרוסקופיה CD) Confocal הראו קבוצות של קרצינומות, האסטרוציטים ומיקרוגליה. צביעה כפולה של האסטרוציטים (אנטי GFAP-TRITC, אדום) ומיקרוגליה (ILB4-Alexa פלואוריד 647, סגול) של כל coculture עם 350 מיקרומטר פרוסה עבה organotypic המוח ותוספת transfected GFP גידול התאים (הירוקה): 3D- MCF-7-GFP (C1-C3) ו3D-410.4-GFP (D1-D3). מקפים לבנים הראו הקצה של פרוסת המוח ומול פלישת גידול. ברים סולם מייצגים 50 מיקרומטר. מיקרוגליה, האסטרוציטיםnd colocalizations גידולים (C1 ו-D1), colocalizations האסטרוציטים-גידולים (C2 ו-D2) וcolocalizations מיקרוגליה גידול (C3 ו-D3) בcoculture פרוסה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50881/50881fig1highres.jpg" target="_blank">לחץ כאן לצפייה בתמונה גדולה יותר</a>

Coculture פרוסת מוח organotypic עם קרצינומה של תאים מאפשר לדמיין שינויים מורפולוגיים על ידי הקרינה וכן בתחום בהיר מיקרוסקופיה (וידאו) במהלך התהליך של פלישת תא קרצינומה של רקמת המוח. מערכת מודל זה מאפשרת גם להחלפת תאים וחידוש גישות ומציעה מגוון רחב של מניפולציות וניתוחים.

מערכת Coculture עם מוח פרוס Organotypic ו3D אליפטית של קרצינומה של תאים

Patients with cerebral metastasis of carcinomas have a poor prognosis. However, the process at the metastatic site has barely been investigated, in ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לדמיין אינטראקציות גליה ישירות במהלך היווצרות גרורות מוחיות. זה מושג על ידי הכנת פרוסות מוח אורגנוטיפיות מעכברים. לאחר מכן, פרוסות המוח האורגנוטיפיות עוברות תרבית משותפת עם תאי קרצינומה.ואז תאי סטרומה מוכתמים בפלואורסצנטיות בסמנים ספציפיים. לבסוף, רמת פלישת הגידול מוערכת במיקרוסקופ פלואורסצנטי. בסופו של דבר, ניתן להשיג תוצאות המראות אינטראקציה וקולוקליזציה של תאי סרטן גליה באמצעות תיוג אימונופלואורסצנטי ומיקרוסקופיה זמן-lapse או קונפוקלית.היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות כמו הזרקה תוך מוחית של תאי קרצינומה, הוא ששיטה זו היא אלטרנטיבה קלה ומציעה פלטפורמה טובה להתבוננות באינטראקציות תאיות במהלך התקדמות הגידול. ההשלכות של טכניקה זו הן 10 לקראת גילוי חדשני וטיפולים סלקטיביים לטיפול בסרטן. מכיוון שתאי הטראומה ממלאים תפקידים חשובים בגרורות וגם מטרות פוטנציאליות לטיפול בסרטן, הדגמת הטכניקה תהיה יבגניה מסירת פוסט-דוקטורט מהמעבדה שלי לפני ההליך הכירורגי, הכינו את מדיום הדיסקציה המורכב ממדיום חיוני מינימלי, בתוספת 0.2 מילי-מולרי גלוטמין, 100 מיליגרם למיליליטר סטרפטומיצין, ו-4.5 מיליגרם למיליליטר גלוקוז לאחר עריפת ראשי עכברים מכל זן עכברים בין היום השישי לאחר הלידה שמונה.באמצעות תנאים אספטיים במהירות, הסר את המוח מהגולגולת והעביר אותו למדיום דיסקציה. הסר את הקוטב הקדמי ואת המוח הקטן מהמוח. לאחר מכן השתמש בדבק קריו ו-5% אגרוס כדי לתקן ולייצב את רקמת המוח שנותרה המורכבת מהמוח.על במה באמצעות פרוסה אופקית של ויברם, חלקים בעובי 350 מיקרון, בהתאם למין ולגיל העכבר, אוספים ארבע עד שש פרוסות מוח שלמות ממוח אחד. לאחר הכנת מדיום התרבות על פי פרוטוקול הטקסט, הוסף מיליליטר אחד לכל באר תחתונה של צלחת באר טרנס של שש בארות. לאחר מכן הניחו כל פרוסת מוח אורגנוטיפית על קרום טרנסוול פוליקרבונט 0.4 מיקרון והכניסו אותם לבארות הצלחת.דגרו את הפרוסות למשך הלילה באווירה לחה עם 5% פחמן דו חמצני ו -37 מעלות צלזיוס. למחרת, הטמיעו 10 לגידול שעבר GFP החמישי או תאים אחרים ב -20 מיקרוליטר של מטריצת ג'ל המורכבת מ -15% מדיום RPMI ו -85% ג'ל ECM. מניחים את תערובת מטריצת הג'ל MCF לתוך ספייסרים מתכתיים סטריליים הסמוכים ישירות לאזורים בקליפת המוח של פרוסות המוח האורגנוטיפיות ודוגרים במשך שעתיים לאחר הדגירה, מסירים את הספייסרים ומאפשרים לגידול התלת מימדי PHE לדגור עם פרוסות המוח למשך 24 עד 96 שעות.החלף את מדיום התרבות כל יומיים אם תרצה. בצע הדמיה חיה באמצעות מיקרוסקופ זמן-lapse עם אובייקט הגדלה של פי 10 כדי להכתים את תרביות פרוסת המוח. תקן אותם עם 4% אלדהיד פרפורמים במשך שמונה שעות בארבע מעלות צלזיוס לפני שטיפת הדגימות ב-PBST למשך חמש דקות.לאחר מכן כדי לחסום את הדגימות, השתמש בסרום עיזים רגיל ב- PBST בטמפרטורת החדר למשך שעה. לאחר מכן, צבעו את האסטרוציטים על ידי דגירה של תרביות הקו עם חלבון חומצי סיבי אנטי גליה או נוגדן חד שבטי GFAP למשך 36 שעות בארבע מעלות צלזיוס, ולאחר מכן צביעה נגד עכברים עזים למשך שעה בטמפרטורת החדר. לאחר שטיפת הדגימות עם PBST שלוש פעמים במשך חמש דקות כל אחת מכתים את תאי המיקרוגליה עם I LB four LOR 647 למשך שעה בטמפרטורת החדר לפני צביעה נגדית עם DPI למשך שלוש דקות בטמפרטורת החדר.לאחר שימוש במדיום הרכבה פלואורסצנטי להרכבת דגימות התרבות המשותפת, צלם את הדגימות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי עם הגדלה של פי 25. לבסוף, הערך את דרגת פלישת הגידול על סמך מערכת הניקוד הבאה. זה מודד תחילה את אורך קטע המגע בין פקק הגידול לפרוסה, ולאחר מכן את חלק המגע שניתן לזהות על ידי התאים הפולשים.כפי שמוצג כאן, כל קווי תאי הקרצינומה שנבדקו פלשו לפרוסות מוח אורגנוטיפיות של עכברים, מה שמרמז על כך שתהליך הפלישה היה בלתי תלוי במין. סרטון זה מציג הקלטה בהילוך מהיר של אינטראקציות ישירות בין תאי גידול גליה. תאי סטרומה נצפו פולשים לתקע התאים המכיל גידול ומקיימים אינטראקציה עם תאי הסרטן.הדמיית זמן-lapse לאורך תקופה ממושכת אישרה את הכדאיות של פרוסות המוח, ואפשרה הדמיה של תאי מיקרוגליה הנכנסים לכדור התלת מימדי, כמו גם תאים סרטניים הפולשים לפרוסות המוח. יתר על כן, כפי שהראינו בעבר מיקרוגליה מעבירה תאי קרצינומה על ידי מנגנון מסתורי עדיין ומסייעת בפלישת הקרצינומה באמצעות תיוג אימונופלואורסצנטי. הדגמנו את הקולוקליזציה של תאי גידול ותאי סטרומה הן ברקמת המוח והן בפקקי תאי הגידול, מה שמרמז על אינטראקציה הדוקה בין תאים אלה במהלך תהליך הפלישה.כפי שניתן לראות כאן, תוצאות דומות התקבלו כאשר פרוסות מוח של עכבר תורבבו יחד עם תאי קרצינומה אנושית או שתן, ותמכו במגוון הרחב של יישומים לחקר תאים ממינים שונים, גנוטיפים וזנים. טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום גרורות הסרטן לחקור את השפעת המיקרו-סביבה במהלך קולוניזציה של גידול באתרים מרוחקים. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לדמיין תגובות של תאי סרטן GL במהלך היווצרות גרורות במוח התא במערכת מגע פיזיולוגית ישירה.

coculture-system-with-an-organotypic-brain-slice-3d-spheroid

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

סרטון זה מדגים את הפיתוח של מערכת תרבות משותפת תלת-ממדית. פרוסות מוח של עכבר מונחות על קרום, ותאי גידול במוח אנושיים המסומנים באופן פלואורסצנטי מורשים לגדול עליו. ברגע שהמערכת מוכנה, היא מוכתמת לצורך הדמיה.

ביסוס גידול במוח במודל תרבית משותפת של פרוסות אורגנוטיפיות

הסרטון מדגים יצירה ותחזוקה של תרביות פרוסות אורגנוטיפיות מרקמת גליובלסטומה. הרקמה המבודדת משובצת במטריצה אגרוזית, וחלקים דקים מתקבלים באמצעות ויברטום. חלקים אלה מונחים לאחר מכן על תוספות קרום חדירות בתוך צלחת מיקרו ומתורבת במצע תחזוקת תרבית פרוסה לתחזוקה לטווח ארוך.

יצירה ותחזוקה של תרביות פרוסות מרקמת גליובלסטומה אנושית

סרטון זה מתאר את ההכנה והטיפוח של אורגנואידים של גידולי מוח מתרחיף חד-תאי. באמצעות מטריצה חוץ-תאית עשירה בלמינין כפיגום וכמצע תרבית עבור חומרי הזנה, התאים מתאפשרים להתרבות ולהתארגן בתוך האורגנואיד. כתוצאה מכך, נוצרים אורגנואידים ex vivo, המחקים את המגוון התאי ואת המיקרו-סביבה של גידולי מוח.

יצירת תרבית אורגנואידים מתרחיף תאי גידול במוח

שיטות ליצירת רקמות גידול 3D אדם כמערכות בדיקה מתוארות. טכנולוגיות אלה מבוססות על ביולוגי vascularized פיגום decellularized (BioVaSc), תאים אנושיים יסודיים ושורת תאים סרטניים, אשר יכול להיות מתורבת תחת סטטי, כמו גם בתנאים דינאמיים בזרימת bioreactor.

הנדסת רקמות של 3D אדם<em&gt; במבחנה</emמערכת מבחן גידול&gt;

פלישה לרקמות נורמליות שמסביב היא מאפיין מגדיר של גידולים ממאירים. אנו מספקים כאן מבחן מיקרו-צלחת פשוט ואוטומטי למחצה של פלישה לביומטריצה תלת מימדית טבעית שהודגמה במספר מודלים של סרטן אנושי מתקדם.

Assay (3D) תלת ממדי גידול ספרואיד הפלישה

סוגים רבים של גידולי מוח אנושיים ממוקמים באזורים ספציפיים במוח וקשה לגדל אותם בתרבית. פרוטוקול זה מתייחס לתפקיד המיקרו-סביבה של הגידול וחוקר טיפולים תרופתיים חדשים על ידי ניתוח תאי גידול מוח ראשוניים פלואורסצנטיים הגדלים בפרוסת מוח אורגנוטיפית של עכבר.

גידול במוח / Organotypic Slice משותף תרבות מערכת לימוד microenvironment גידול וממוקד תרופות טיפולים

מודלים vivo לשעבר של גליובלסטומה (GBM) אינם מותאמים למחקר רלוונטי מבחינה פיזיולוגית של הפלישה של הגידול האנושי. כאן, אנו מציגים פרוטוקול לייצור ותחזוקה של תרבויות פרוסה organotypic מרקמת GBM אדם טרי. תיאור של זמן לשגות מיקרוסקופיה ו כמותי תא הגירה טכניקות ניתוח מסופק.

A Glioblastoma האדם דגם תרבות פרוסה Organotypic לחקר גידול תאים סרטניים ואפקטים ספציפיים לחולה של תרופות אנטי פולשניות

Organotypic פרוסה בהיפוקמפוס תרבויות (OHSC) מייצגים במבחנה דגם המדמה את המצב ויוו היטב. כאן נתאר מבוסס-vibratome משופרת עם פרוסות פרוטוקול כדי לקבל פרוסות באיכות גבוהה לשימוש בהערכת הפוטנציאל neuroprotective של חומרים חדשניים או ההתנהגות הביולוגית של תאים סרטניים.

Organotypic תרבויות פרוסה בהיפוקמפוס כמודל מחקר Neuroprotection, Invasiveness של תאים סרטניים

כאן, אנו מתארים שיטת פלישה קלה לשימוש עבור גלינובלסטומה. שיטת הפעולה הזאת מתאימה לתאים גלנובלסטומה כמו גזע. מאקרו של פיג'י לכימות קל של פלישה, הגירה והתפשטות מתואר גם כן.

מודל ספרואיד תלת-ממדי לגלינובלסטומה

מודלים מקיפים במבחנה המשיבים נאמנה את המחלה האנושית הרלוונטית חסרים. המחקר הנוכחי מציג יצירה ותרבות תלת מימדית של גידול תלת מימדי(תלת-ממדי), כלי הפריה אמין לחקר האינטראקציה בין הגידול לסטרומלי בקרצינומה הפטוקולרית האנושית.

מודל ספרואידי תלת מימדי לחקר האינטראקציה בין גידולים סרטניים בקרצינומה הפטוקולרית

יש צורך קריטי במודלים תלת מימדיים של סרטן הלוכדים הצלבה הטרו-תאית כדי לחקור גרורות סרטניות. המחקר שלנו מציג את הדור של הטרו-אפיתל סטרומלטי-תאי בסביבה נטולת פיגומים ופיגומים שניתן להשתמש בהם לחקר פלישה והתפלגות מרחבית תאית.

תאי סטרומה הטרו-תאיים בתרביות תלת מימד ללא פיגומים של תאי סרטן אפיתל כדי להניע פלישה

למדו לדמיין אינטראקציות בין תאי גליה וקרצינומה במהלך היווצרות גרורות מוחיות. השיטה משתמשת בפרוסות מוח אורגנוטיפיות מעכברים בשיתוף תרבות עם תאי סרטן וצביעה פלואורסצנטית.

מערכת Coculture עם מוח פרוס Organotypic ו3D אליפטית של קרצינומה של תאים

גלה סרטונים נוספים