Name: מדידת ההשפעות של חיידקים על ג Elegans התנהגות באמצעות Assay שימור ביצה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-10-22T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 36 s
Description: למדו את שיטת EIW לכימות התנהגות הנחת ביצים ב-Caenorhabditis elegans. שיטה זו מאפשרת לחוקרים לבחון את השפעתם של חיידקים פתוגניים על התנהגות הרבייה של התולעת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות ליוני מידלטון לאספקת ה זני faecalis והדרכה עם תרבות חיידקים. ג elegans סופקו על ידי CGC, אשר ממומן על ידי NIH משרד תוכניות תשתית מחקרית (P40 OD010440).

1) הכנה של צמיחת מדיה נמטודות (NGM) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להפוך את 50 צלחות, להוסיף 1.5 גרם NaCl, 8.5 אגר ultrapure גרם, וpeptone 1.25 גרם לLflask 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 487.5 מ&quot;ל של DH 2 O לבקבוק. מערבולת בעדינות לתערובת, ולכסות את הפתח של בקבוק עם פיסת נייר אלומיניום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר את הפתרון על ידי מעוקר ב תנאים סטנדרטיים (121 psi, 120 מעלות צלזיוס, 20 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר הפתרון לקירור ל -45 מעלות צלזיוס באמבט מים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפתרון, להוסיף את הדברים הבאים לפי סדר: כולסטרול μl 500 ממיליליטר פתרון מניות (מומס באתנול) 5 מ&quot;ג / 1, 500 מ &#39;μl CaCl 2, 500 1 ז μl MgSO 4, וחיץ 4 12.5 מיליליטר KPO (54.15 גרם KH PO 4 ו17.8 גרם K 2 HPO 2 4 ב 500 מ&quot;ל של DH 2 O) כפי שמתואר ב18. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בטפטפות סטריליים, להוסיף 10 מ&quot;ל של תמיסה אגר לכל צלחת פטרי קלקר 60 מ&quot;מ. לאפשר לתקשורת כדי לחזק בovern טמפרטורת החדרight. </li></ol> 2) הכנת מרק א &#39;ב&#39; coli מדיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לעשות חמש 100 מ&quot;ל תרבויות, להוסיף 5.0 גרם של Bacto tryptone, 2.5 תמצית שמרים גרם, 5.0 גרם NaCl לכוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף סטרילי מים, מזוקקים לנפח סופי של 500 מ&quot;ל. מחממים את הפתרון על צלחת חמה, תוך כדי ערבוב, עד שהמומסים שנמסו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים 100 מ&quot;ל של מרק B לחמישה בקבוקי זכוכית (לפחות 200 מ&quot;ל נפח). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר את פתרונות על ידי מעוקר ב תנאים סטנדרטיים (121 psi, 120 ° C, 20 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרשה B מרק להתקרר לטמפרטורת חדר לפני השימוש. </li></ol> 3) מתזמן ג צלחות תחזוקת elegans <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שנתן לייבוש צלחות NGM בטמפרטורת חדר למשך שבוע אחד לפחות, לחסן תרבות מרק 100 מ&quot;ל ב &#39;אחד עם כמה מושבות של א&#39; coli (OP50). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגדול E. תרבות coli על 37 מעלות צלזיוס למשך הלילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחד או שתיים טיפות פיפטה (כ 10081; L) של OP50 תרבות על מרכז כל צלחת NGM. צלחות נערמים מכסה בצד בדרך כלל למעלה. כאשר pipetting (זריעה), להתחיל על ידי pipetting התרבות לצלחת בתחתית הערימה. דרך עבודה שלך כל ערימה. נסה לא לעבור את הצלחות לאחר זריעה, כי זה חשוב שהתרבות לא להתקרב מדי לשולי הצלחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר צלחות זרע לייבוש בטמפרטורת חדר במשך שבוע אחד לפחות לפני השימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צלחות זורעים מאוחסנות (הפוך) בכלי פלסטיק אטומים בטמפרטורת חדר. </li></ol> 4) שמירה על ג elegans זנים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לשמור על מדושן ג מניות elegans, השתמשו תולעת לבחור לעבור שלוש L4s או מבוגרים הרה להולדת לחדשה, זורעי NGM צלחת כל 3-4 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צלחות חנות (הפוך) רצוי בתוך חממה ב 15-22 ° C. תרבויות במבחנים שתוארו היו מאוחסנות בטמפרטורה של 20 ° C. ג elegans פיתוח הוא טמפרטורה תלויה. כmaintenaNCE עולה טמפרטורה, זמן בין שלבי התפתחות יורד. </li></ol> 5) הכנת הסויה אגר (TSA) א &#39;tryptic faecalis תרבות מדיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להפוך את 50 צלחות, למדוד 500 מ&quot;ל של מים סטריליים, מזוקקים לתוך בקבוק ומביא לרתיחה, תוך בחישה, על פלטה חמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 20 גרם של האבקה אגר TSA לבקבוק ולאפשר פתרון לפזר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר את פתרונות על ידי מעוקר ב תנאים סטנדרטיים (121 psi, 120 ° C, 20 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר הפתרון לקירור ל -45 מעלות צלזיוס באמבט מים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בטפטפות סטריליים, להוסיף 10 מ&quot;ל של תמיסה אגר לכל צלחת פטרי קלקר 60 מ&quot;מ. לאפשר לתקשורת כדי לחזק בטמפרטורת חדר למשך לילה. </li></ol> 6) הכנת מרק סויה א tryptic (TSB) faecalis תרבות מדיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להפוך 250 צינורות תרבות, למדוד 500 מ&quot;ל של מים סטריליים, מזוקקים לתוך בקבוק וחם על פלטה חמה תוך כדי ערבוב. </li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 15 גרם של אבקה אגר TSB לבקבוק ולאפשר את האבקה להמסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר את פתרונות על ידי מעוקר ב תנאים סטנדרטיים (121 psi, 120 ° C, 20 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר פתרון ללהתקרר לטמפרטורת חדר, ולאחר מכן טפטפת לתוך 2 מ&quot;ל, 5 מבחנות מ&quot;ל סטרילי. </li></ol> 7) הכנה של מוח לב עירוי (BHI) מדיה, עם סטרפטומיצין, לE. תרבות faecalis <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למדוד 500 מ&quot;ל של מים סטריליים, מזוקקים לתוך בקבוק ומביא לרתיחה, תוך בחישה, על פלטה חמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 26 גרם של מדיום BHI לבקבוק ולאפשר הפתרון להמסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר את פתרונות על ידי מעוקר ב תנאים סטנדרטיים (121 psi, 120 ° C, 20 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתרון יאפשר לקירור ל -45 מעלות צלזיוס באמבט מים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות טכניקה סטרילית, להוסיף 0.5 מ&quot;ל של פתרון מניות סטרפטומיצין 10 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​ומערבולת לערבב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 10 מ&quot;ל של הפתרון לכל צלחת פטרי קלקר 60 מ&quot;מ. </li><li&gt; תקשורת לביסוס בטמפרטורת חדר למשך לילה אפשר. צלחות חנות (הפוך) בשעת 4 ° C ועד כמה שעות לפני השימוש. </li></ol> 8) שמירה על E. זני faecalis <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לשמור על א מניות faecalis, השתמשו בלולאת סטרילי לפס בודדות על מושבות (TSA) אגר סויה נפרדת צלחות tryptic. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגדול תרבויות על 37 מעלות צלזיוס למשך הלילה. צלחות חנות (הפוך) בתיק או בקופסה אטום בטמפרטורת חדר במשך כמה שבועות. </li></ol> 9) הכנת א &#39; צלחות faecalis עבור assay EIW <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחסן תרבות 2 מיליליטר TSB עם מושבה של א &#39; faecalis ודגירת הלילה בשעה 37 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה μl 20 של א &#39; תרבות faecalis אל מרכז צלחת BHI, סטרפטומיצין מוכן, ודגירת הלילה בשעה 37 ° C. </li></ol> 10) הכנת א &#39; צלחות coli עבור assay EIW (לוחות בקרה) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחסן B-100 מיליליטר אחתרבות ה עם מושבה של א &#39; coli OP50 ו דגירה הלילה על 37 מעלות צלזיוס </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה μl 20 של תרבות OP50 אל מרכז צלחת NGM unseeded ולאפשר את צלחות זרע לייבוש בטמפרטורת חדר למשך לילה. </li></ol> 11) ביצה ב assay תולעת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיק 15 - 20 מבוים-L4 ג elegans (איור 1) על גבי מרכז מדשאה של חיידקים על BHI סטרפטוקוקוס-E. מוכן faecalis צלחת. היזהר שלא להעביר הרבה OP50 לצלחת BHI. בחר את אותו המספר של L4s לשליטת NGM-OP50 צלחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה צלחות עבור 40 שעות בטמפרטורה של 20 מעלות צלזיוס </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את פתרון אקונומיקה 20%. מערבבים אקונומיקה מסחרית (6.0% נתרן היפוכלוריט) עם הנפח המתאים של מים מזוקקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 10 טיפות של μl פתרון אקונומיקה לעשרה מקומות שונים על מכסה פלסטיק (של תולעת או צלחת חיידקים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות איסוף תולעת, תולעת להעביר אחד לכל טיפת אקונומיקה. מערבולת בעדינות את קצהלבחור בטיפת אקונומיקה כדי לוודא את התולעת יש לשטוף בסוף בחרו (לאשר על ידי הצגת אגל תחת מיקרוסקופ לנתח). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר לציפורן לפזר לכ -10 דקות או עד התולעים נפתחו בסערה, לגרש את הביצים (איור 2). היזהר שלא להעביר את הביצים מהצלחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מיקרוסקופ לנתח, לספור את הביצים בכל טיפה של אקונומיקה. </li></ol>

<ol><li>Horvitz, H. R., Chalfie, M., Trent, C., Sulston, J. E., Evans, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+and+octopamine+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Serotonin and octopamine in the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Science. 216, 1012-1014 (1982).</li>
<li>Sawin, E. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Genetic+and+cellular+analysis+of+modulated+behaviors+in+Caenorhabditis+elegans+%5B%5D%22">Genetic and cellular analysis of modulated behaviors in Caenorhabditis elegans [dissertation]</a>. , Massachusetts Institute of Technology. Cambridge, MA. (1996).</li>
<li>Trent, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Genetic+and+behavioral+studies+of+the+egg-laying+system+of+Caenorhabditis+elegans+%5B%5D%22">Genetic and behavioral studies of the egg-laying system of Caenorhabditis elegans [dissertation]</a>. , Massachusetts Institute of Technology. Cambridge, MA. (1982).</li>
<li>Chase, D. L., Koelle, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+RGS+protein+function+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of RGS protein function in Caenorhabditis elegans.</a> Methods Enzymol. 389, 305-320 (2004).</li>
<li>Trent, C., Tsuing, N., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Egg-laying+defective+mutants+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Egg-laying defective mutants of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 104, 619-647 (1983).</li>
<li>Weinshenker, D., Garriga, G., Thomas, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+pharmacological+analysis+of+neurotransmitters+controlling+egg+laying+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Genetic and pharmacological analysis of neurotransmitters controlling egg laying in Caenorhabditis elegans.</a> J. Neurosci. 15, 6975-6985 (1995).</li>
<li>Waggoner, L. E., Zhou, G. T., Schafer, R. W., Schafer, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+alternative+behavioral+states+by+serotonin+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Control of alternative behavioral states by serotonin in Caenorhabditis elegans.</a> Neuron. 21, 203-214 (1998).</li>
<li>Bany, A., Dong, M., Koelle, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+cellular+basis+for+acetylcholine+inhibition+of+Caenorhabditis+elegans+egg-laying+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Genetic and cellular basis for acetylcholine inhibition of Caenorhabditis elegans egg-laying behavior.</a> J. Neurosci. 23, 8060-8069 (2003).</li>
<li>Dempsey, C. M., Mackenzie, S. M., Gargus, A., Blanco, G., Sze, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+%285HT%29%2C+fluoxetine%2C+imipramine+and+dopamine+target+distinct+5HT+receptor+signaling+to+modulate+Caenorhabditis+elegans+egg-laying+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Serotonin (5HT), fluoxetine, imipramine and dopamine target distinct 5HT receptor signaling to modulate Caenorhabditis elegans egg-laying behavior.</a> Genetics. 169, 1425-1436 (2005).</li>
<li>Leung, M. C., Williams, P. L., Bennedetto, A., Au, C., Helmcke, K. J., Aschner, M., Meyer, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caenorhabditis+elegans%3A+an+emerging+model+in+biomedical+and+environmental+toxicology%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Caenorhabditis elegans: an emerging model in biomedical and environmental toxicology.</a> Toxicol. Sci. 106, 5-28 (2008).</li>
<li>Mylonakis, E., Aballay, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Worms+and+flies+as+genetically+tractable+animal+models+to+study+host-pathogen+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Worms and flies as genetically tractable animal models to study host-pathogen interactions.</a> Infect. Immun. 73, 3833-3841 (2005).</li>
<li>Schafer, W. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSchafer%2C+WR+%22WormBook%22">WormBook</a>. , WormBook. (2005).</li>
<li>White, J., Southgate, E., Thomson, N., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure+of+the+Caenorhabditis+elegans+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Philos.+Trans.+R.+Soc.+Lond.+B.+Biol.+Sci%22%5BJournal%5D)">The structure of the Caenorhabditis elegans nervous system.</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 314, 1-340 (1986).</li>
<li>Desai, C., Garriga, G., McIntire, S. L., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetic+pathway+for+the+development+of+the+Caenorhabditis+elegans+HSN+motor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A genetic pathway for the development of the Caenorhabditis elegans HSN motor neurons.</a> Nature. 336, 638-646 (1988).</li>
<li>Garsin, D. A., Sifri, C. D., Mylonakis, E., Qin, X., Singh, K. V., Murray, B. E., Calderwood, S. B., Ausubel, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+model+host+for+identifying+Gram-positive+virulence+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">A simple model host for identifying Gram-positive virulence factors.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98, 10892-10897 (2001).</li>
<li>Aballay, A., Yorgey, P., Ausubel, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salmonella+typhmurium+proliferates+and+establishes+a+persistent+infection+in+the+intestine+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Salmonella typhmurium proliferates and establishes a persistent infection in the intestine of Caenorhabditis elegans.</a> Curr. Biol. 10, 1539-1542 (2000).</li>
<li>O'Quinn, A. L., Wiegand, E. M., Jeddeloh, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burkholderia+pseudomallei+kills+the+nematode+Caenorhabditis+elegans+using+an+endotoxin-mediated+paralysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Burkholderia pseudomallei kills the nematode Caenorhabditis elegans using an endotoxin-mediated paralysis.</a> Cell. Microbiol. 3, 381-393 (2001).</li>
<li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77, 71-94 (1974).</li>
<li>Harvey, S. C., Shorto, A., Orbidans, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+genetic+analysis+of+life-+history+traits+of+Caenorhabditis+elegans+in+stressful+environments%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Evol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Quantitative genetic analysis of life- history traits of Caenorhabditis elegans in stressful environments.</a> BMC Evol. Biol. 8, 15(2008).</li>
<li>Harvey, S. C., Orbidans, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((All+eggs+are+not+equal%3A+the+maternal+environment+affects+progeny+reproduction+and+developmental+fate+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">All eggs are not equal: the maternal environment affects progeny reproduction and developmental fate in Caenorhabditis elegans.</a> PLoS One. 6, e25840(2011).</li>
<li>Klass MR, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans%3A+major+biological+and+environmental+factors+influencing+life+span%5BTitle%5D)+AND+%22Mech.+Ageing.+Dev%22%5BJournal%5D)">Aging in the nematode Caenorhabditis elegans: major biological and environmental factors influencing life span.</a> Mech. Ageing. Dev. 6, 413-429 (1977).</li>
</ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

השלבים הקריטיים ביותר בביצוע assay זה בהצלחה הם: 1) באמצעות מניות מדושנות של ג elegans, 2) culturing סוגים בודדים של חיידקים בצלחת assay, 3) זיהוי מדויק מבוים L4 תולעים לחשיפה לE. faecalis, 4) שמירה על זמן החשיפה לE. faecalis עקבי בכל הניסויים ו 5) הלבנת זמן שלא יעלה על עשר דקות כדי למנוע התפוררות ביצה. עבור assay זה חשוב להרים תולעים בריאים, מדושנים. הרעבה מצד האם יכולה להשפיע על פוריו...

Caenorhabditis elegans, תולעת עגולה מיקרוסקופית, נטול חיים, היא אורגניזם מודל משמש באופן מסורתי כדי ללמוד תהליכים התפתחותיים ואיתות תא בגלל האנטומיה שלו שקופה, הפיתוח מאופיין היטב, מלא ברצף הגנום, דור בזמן הקצר, וההומולוגיה גנטית לבני אדם . לאחרונה, ג elegans הפך אורגניזם מודל בתחום הרעלים סביבתיים ומולדת חסינות 10, 11. תולעי hermaphroditic דישון עצמי האלה הפכו לבגרות מינית בתוך שנים עד שלושה ימים מיום הבקיעה מן הביצה. במהלך מחזור החיים שלו, ג elegans עובר דרך ארבעה שלבי זחל (L1-L4), לפני שהגיע לבגרות. אחד המבודד אנדרוגינוס יכול לייצר, בממוצע, 300 צאצאים בתוך שלושה ימים של פוריות שיא. בreproductively הבוגר ג elegans הרמפרודיטים, ביצים מופרות נשמרות בתוך הרחם במשך כמה שעות לפני שהניחו.מספר הרגיל של ביצים מאוחסנות ברחם בכל זמן נתון (בשיא פוריות) הוא 12 בין עשרה לחמש עשר. מספר הביצים ברחם הוא פונקציה של שניהם בקצב ייצור של ביצה והשיעור של הנחת ביצה. ביצים מופרות הם גורשו מן הרחם על ידי התכווצות שרירי פות של שישה עשר מסודרים סביב הפתיחה של הפות 13. motorneurons הרמפרודיט הספציפי (HSN של) וסינפסה VC motorneurons על שרירי פות המשפיעים התכווצות שרירים ובכך הטלה התנהגות 5,7,13,14. גירוש של ביצים מהרחם מתרחש עקב פעילות מתואמת של נוירונים ושרירים. תרבויות מעבדה של ג elegans גדלים בדרך כלל בדיאטה של nonpathogenic חיידקי Escherichia OP50. בסביבה הטבעית, ג elegans בא במגע עם מגוון רחב של מקורות מזון, כגון חיידקים פתוגניים, שיכול להיות מזיק. בעת חשיפה לחומרים מזיקים בהסביבה, ג elegans לשמור על ביצים עד שהסביבה הופכת להיות חיובית יותר. יש להניח שימור ביצה זו הוא מאמץ כדי להגן על הצאצאים שלהם. בביצה זה בתולעת (EIW) assay, ג elegans חשוף לחיידקים פתוגניים פוטנציאל, אנטרוקוקוס faecalis, שנמצא בסביבה. חשיפה לצורות פתוגניים של א &#39; faecalis יכול לגרום לדלקת מעיים מתמשכת ואף למוות בג elegans 15. חשיפה לצורות אחרות של חיידקים פתוגניים הוכח להשפיע שימור ביצת 16,17, עם זאת ההשפעה לא לכמת. בנוסף, ההשפעה של מתינות פתוגניים זנים של E. faecalis, זנים שאינם קטלניים באופן מיידי, על התנהגות הטלת ביצים לא נחקרו. מבחני EIW כרוכים לספור את מספר הביצים נשמרים ברחם של ג elegans 4. למרות שג elegansהם שקופים, ביצים מצטברות ברחם יכולות להיות קשים לכמת בבעלי חיים בשלמותה. Assay EIW כרוך הלבנת ההרה המבוגר ג elegans שנחשפו לחיידקים לתקופה קצובה של זמן. פתרון אקונומיקה ממסים את הציפורן החיצונית עוזב את הביצים מאחור. את הביצים הן שבירה להשפעות של אקונומיקה בשל הנוכחות של קליפת ביצה מגן. אחרי הלבנה, אחד היא בקלות רבה תוכל לספור את מספר הביצים ששוחררו מהרחם של התולעים על הלבנת. Assay תאר הוא שיטה פשוטה וזולה, ומהירה לכמת את מספר הביצים ברחם בזמן אחד, ובכך לכמת את ההשפעות של א &#39; faecalis בשייר ביצה. assay זה יכול לשמש כדי לכמת את ההשפעה של סוגים אחרים של חיידקים, רעלים סביבתיים או תרופות בשייר ביצה. assay זה גם יש לו הפוטנציאל לשמש כמסך לpathogenicity חיידקים.

<table><tbody><tr><td>Agar,</td><td>Affymetrix</td><td>10906</td><td></td></tr><tr><td>בקטו פפטון</td><td>בקטון דיקינסון</td><td>211677</td><td></td></tr><tr><td>בקטו טריפטון</td><td>בקטון דיקינסון</td><td>211705</td><td></td></tr><tr><td>עירוי לב מוח מדיום מיובש</td><td>אספקה ביולוגית 781781</td><td></td><td></td></tr><tr><td>C. elegans, זן N2</td><td>Caenorhabditis Genetics Center</td><td></td><td>http://www.cbs.umn.edu/cgc</td></tr><tr><td>כולסטרול</td><td>Alfa Aesar</td><td>A11470</td><td></td></tr><tr><td>צלחות תרבית עבור C. elegans</td><td>Tritech Research Inc.</td><td>T3308</td><td></td></tr><tr><td>צלחות תרבית עבור זני</td><td></td><td></td> E. faecalisFisher Scientific-Fisherbrand 875713<td></td></tr><tr><td>E. coli (OP50)</td><td>Caenorhabditis Genetics Center</td><td></td><td>http://www.cbs.umn.edu/cgc</td></tr><tr><td>E. faecalis</td> שסופקו על ידי J. Middleton.<td></td><td></td><td> כל המבודדים אושרו כאנטרוקוק<</td></tr><tr>td colspan="4"> על ידי התבוננות בגידול על אגר אנטרוקוקוזל (BBL) ובמרק NaCl של 6%;</td></tr><tr><td colspan="4"> כל הזנים גדלו ב-44.5 &ordm; C והיו שליליים לקטלאז ואסקולין שעבר הידרוליזה. מקלט פשוט &nbsp; מפתח דיכוטומי המבוסס על תגובות פיגמנטציה ותסיסה לשישה סוכרים&nbsp; (ארבינוז, מניטול, מתיל-ואלפא;-D-גלוקופירנוזיד (MGP), ריבוז, סורבוז וסורביטול) מותר&nbsp; זיהוי משוער של כל <הם>E. זני faecalis (Efs חסר פיגמנטציה והוא ארבינוז, MGP&nbsp; וסורבוז שלילי וסורביטול, מניטול וריבוז חיובי). כל זני ה-Efs המשוערים&nbsp; אושרו באמצעות מערכת ה-API 20 STREP (Biomerieux). </td></tr><tr><td>מיקרוסקופ</td><td>מוטי</td><td>SMZ 168B</td><td>כל מיקרוסקופ עם תאורה משודרת והגדלה של פי 50 אמור להיות מספיק</td></tr><tr><td>סטרפטומיצין סולפט</td><td>פישר ביו-ריאגנטים</td><td>BP910-50</td><td></td></tr> אגר <tr><td>סויה טריפטית (מדיום אגר עיכול סויה-קזאין), Difco</td><td>Becton Dickinson</td><td>236950</td><td></td></tr><tr><td>ציר סויה טריפטיקז (מדיום לעיכול פולי סויה-קזאין),</td> תמצית שמרים BBL <td>Becton Dickinson</td><td>211768</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Acros</td><td>61180-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

מדידת ההשפעות של חיידקים על<em&gt; ג elegans</em&gt; התנהגות באמצעות assay שימור ביצה

Measuring the Effects of Bacteria on C. Elegans Behavior Using an Egg Retention Assay

התנהגות הטלת ביצי סי אלגנס מושפעת רמזים סביבתיים כגון osmolarity 1 ורטט 2. בהיעדר המוחלט של מזון ג elegans גם יחדל הטלת ביצים ולשמר את ביציות מופרות ברחם 3 שלהם. עם זאת, ההשפעה של מקורות שונים של מזון, בעיקר חיידקים פתוגניים ובעיקר אנטרוקוקוס faecalis, על התנהגות הטלת ביצים לא מאופיינת היטב. ביצה בתולעת assay (EIW) הוא כלי שימושי כדי לכמת את ההשפעות של סוגים שונים של חיידקים, במקרה זה א faecalis, על התנהגות הטלת ביצים. מבחני EIW כרוכים לספור את מספר הביצים נשמרים ברחם של ג elegans 4. Assay EIW כרוך הלבנת מבוימת, הרה המבוגר ג elegans כדי להסיר את העור המת ולהפריד את ביצי עודפים מבעלי החיים. לפני הלבנת, תולעים חשופים לחיידקים (או כל סוג של אות סביבתית) לתקופה קצובה של זמן. אחרי הלבנה, אחד היא בקלות רבה תוכל לספור את מספר ביצי עודפים בתוך הרחם של התולעים. ב assay זה, גידול בשייר כימות ביצה לאחר E. ניתן למדוד את חשיפת faecalis בקלות. Assay assay EIW הוא התנהגות שעשויה לשמש מסך לפוטנציאל חיידקים פתוגניים או הנוכחות של רעלים סביבתיים. בנוסף, assay EIW עשוי להיות כלי למסך לתרופות המשפיעות על נוירוטרנסמיטר איתות מאז התנהגות הטלת ביצים היא מווסתת על ידי נוירוטרנסמיטרים כגון סרוטונין ואצטילכולין 5-9.

assay זה מאפשר לכמת את מספר הביצים נשמרות בתוך ג elegans לאחר החשיפה לE. faecalis. L4 מבוים תולעים (מאופיין בחלל פתוח שקוף מעל הפות שלהם, איור 1) נחשפו לE. faecalis דרך הבגרות. לאחר ארבעים שעות של חשיפה לE. faecalis, הלבנת בוצעה. כציפורן התפוררה בטיפת אקונומיקה, את הביצים התבררו יותר (איור 2). מספר ביצי עודפים היה לכמת בקלות על ידי ספירה בעת הצגה תחת מיקרוסקופ לנתח. <p class="jove_content" style=";text-align...

ביצה בתולעת assay (EIW) הוא שיטה יעילה לכמת-הטלת התנהגות. שינויים בנחת ביצה יכולים להיות תגובה התנהגותית של האורגניזם המודל<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em&gt; לחומרים מזיקים סביבתיים כגון אלה המיוצרים על ידי חיידקים פתוגניים.

מדידת ההשפעות של חיידקים על<em&gt; ג Elegans</em&gt; התנהגות באמצעות Assay שימור ביצה

C. elegans egg-laying behavior is  affected by environmental cues such as osmolarity1 and  vibration2. In the total absence of food C. elegans also cease ...

measuring-effects-bacteria-on-c-elegans-behavior-using-an-egg

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

C. התנהגות הטלת ביצים של elegans יכולה לספק מידע חשוב במחקרים התפתחותיים, פוריותיים ואנטומיים. סרטון זה מציג את השלבים החשובים של בדיקת הטלת ביצים ומציג ניסוי לדוגמה שבו תרופה נבדקת לרעילות רבייה.

בדיקת הטלת ביצים: שיטה לכימות התנהגות הטלת הביצים של C. elegans

שיטת הערכת כמותית תגובת chemotactic...

Assay Chemotaxis סי אלגנס

C. elegans הוא מודל שימושי לחקר ההשפעות של אתנול על ההתנהגות. אנו מציגים בדיקת התנהגותית שמכמתת את ההשפעות של אתנול על מהירות התנועה של תולעים זוחלות; ניתן למדוד עם הבדיקה הזו גם את הרגישות הראשונית וגם את התפתחות הסובלנות התפקודית החריפה לאתנול.

Assay למדידת ההשפעות של אתנול במהירות התנועה של<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em

פרוטוקול בסיסי כדי להעריך את הרעילות של כימיקלים חיית מודל, Caenorhabditis elegans, מתואר. השיטה זו נוח ושימושי עבור הפיתוח של תרופות כמו גם באשר הערכת הסיכונים של מזהמים סביבתיים שונים.

מדידת אפקט של כימיקלים על גדילה, רבייה של Caenorhabditis elegans

כאן, אנו מציגים את תולעים נימיות Caenorhabditis elegans כמודל מארח רב-תכליתי ללמוד אינטראקציה מיקרוביאלי.

נמטודות. Caenorhabditis Elegans - מודל רב תכליתי In Vivo ללמוד אינטראקציות מארח-חיידק

פרוטוקול זה מתאר כיצד למדוד חדירות המעי של האלגיה. שיטה זו מועילה למחקרים ביולוגיים בסיסיים על בריאות המעיים הקשורים לאינטראקציה בין בקטריה מעיים למארחים שלהם ולהקרנה כדי לזהות פרוביוטיקה וחומרים כימיים כדי לרפא תסמונת המעיים הדולף ומחלות המעי דלקתיות.

מדידת ההשפעות של חיידקים וכימיקלים על חדירות המעי של האלמרנים

כדי לחקור אינטראקציות מלווה מלווה מלווה-מצע, אנו מבצעים מסכי אינטראקציה סינתטית ב elegans Caenorhabditis באמצעות הפרעות RNA בשילוב עם מוטציות קלות או ביטוי יתר של מלווים ולנטר תפקוד לקוי של חלבון ספציפי לרקמות ברמה האורגנית.

שימוש באלגנים של Caenorhabditis למסך עבור אינטראקציות ממלווים ספציפיות לרקמות

Caenorhabditis elegans משמשים כמערכת מודל מצוינת עם שיטות חזקות ובעלות נמוכה לסקר את תוחלת החיים, תוחלת החיים והחוסן ללחץ.

סקר שיטות בעלות נמוכה למדידת תוחלת החיים ותוחלת הבריאות ב - Caenorhabditis elegans

כאן, אנו מציגים שיטה כללית לקביעת הכדאיות העוברית והמספר הכולל של עוברים המיוצרים (brood) באמצעות אורגניזם המודל C. elegans.

מדידת כדאיות עוברית וגודל הברוד ב- Caenorhabditis elegans

וידאו זה מדגים את הטכניקה של microinjection לתוך בלוטת המין של C. elegans כדי ליצור חיות טרנסגניות.

הדור של Stable טראנסגנטי C. elegans שימוש Microinjection

למדו את שיטת EIW לכימות התנהגות הנחת ביצים ב-Caenorhabditis elegans. שיטה זו מאפשרת לחוקרים לבחון את השפעתם של חיידקים פתוגניים על התנהגות הרבייה של התולעת.

מדידת ההשפעות של חיידקים על

גלה סרטונים נוספים