Name: העברת כלי דם גין ממתכת סטנט משטחים באמצעות adenoviral וקטורי Tethered דרך Hydrolysable חוצה linkers (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 30 s
Description: למדו השתלת סטנט משחרר גנים בעורק הקרוטידי המשותף בעכברושי מעבדה. השיטה כוללת שימוש בקטטר פוגארטי לפגיעה באנדותל וביולומינסנציה להערכת ביטוי טרנסגן לאורך זמן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

למחברים אין אינטרסים פיננסיים מתחרים לחשוף.

<ol><li>Boeckle, S., Wagner, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+targeted+gene+delivery%3A+chemical+modification+of+viral+vectors+and+synthesis+of+artificial+virus+vector+systems%5BTitle%5D)+AND+%22AAPS+J%22%5BJournal%5D)">Optimizing targeted gene delivery: chemical modification of viral vectors and synthesis of artificial virus vector systems.</a> AAPS J. 8, E731-E742 (2006).</li>
<li>Waehler, R., Russell, S. J., Curiel, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+targeted+viral+vectors+for+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Engineering targeted viral vectors for gene therapy.</a> Nat Rev Genet. 8, 573-587 (2007).</li>
<li>Campos, S. K., Barry, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+advances+and+future+challenges+in+Adenoviral+vector+biology+and+targeting%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Current advances and future challenges in Adenoviral vector biology and targeting.</a> Curr Gene Ther. 7, 189-204 (2007).</li>
<li>Bangari, D. S., Mittal, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+strategies+and+future+directions+for+eluding+adenoviral+vector+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Current strategies and future directions for eluding adenoviral vector immunity.</a> Curr Gene Ther. 6, 215-226 (2006).</li>
<li>Barry, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+delivery+of+therapeutic+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Systemic delivery of therapeutic viruses.</a> Curr Opin Mol Ther. 11, 411-420 (2009).</li>
<li>De Laporte, L., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrices+and+scaffolds+for+DNA+delivery+in+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">Matrices and scaffolds for DNA delivery in tissue engineering.</a> Adv Drug Deliv Rev. 59, 292-307 (2007).</li>
<li>Gustafson, J. A., Price, R. A., Greish, K., Cappello, J., Ghandehari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silk-elastin-like+hydrogel+improves+the+safety+of+adenovirus-mediated+gene-directed+enzyme-prodrug+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharm%22%5BJournal%5D)">Silk-elastin-like hydrogel improves the safety of adenovirus-mediated gene-directed enzyme-prodrug therapy.</a> Mol Pharm. 7, 1050-1056 (2010).</li>
<li>Kidd, M. E., Shin, S., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrin+hydrogels+for+lentiviral+gene+delivery+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Fibrin hydrogels for lentiviral gene delivery in vitro and in vivo.</a> J Control Release. 157, 80-85 (2012).</li>
<li>Lei, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incorporation+of+active+DNA%2Fcationic+polymer+polyplexes+into+hydrogel+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Incorporation of active DNA/cationic polymer polyplexes into hydrogel scaffolds.</a> Biomaterials. 31, 9106-9116 (2010).</li>
<li>Lei, Y., Rahim, M., Ng, Q., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyaluronic+acid+and+fibrin+hydrogels+with+concentrated+DNA%2FPEI+polyplexes+for+local+gene+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Hyaluronic acid and fibrin hydrogels with concentrated DNA/PEI polyplexes for local gene delivery.</a> J Control Release. 153, 255-261 (2011).</li>
<li>Jang, J. H., Schaffer, D. V., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+biomaterial+systems+to+enhance+viral+vector+gene+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Engineering biomaterial systems to enhance viral vector gene delivery.</a> Mol Ther. 19, 1407-1415 (2011).</li>
<li>Salvay, D. M., Zelivyanskaya, M., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+delivery+by+surface+immobilization+of+plasmid+to+tissue-engineering+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Gene delivery by surface immobilization of plasmid to tissue-engineering scaffolds.</a> Gene Ther. 17, 1134-1141 (2010).</li>
<li>Moss, A. J., Hamburger, S., Moore, R. M., Jeng, L. L., Vol Howie, L. J. Advance Data. 191, National Center for Health Statistics Vital and Health Statistics. (1991).</li>
<li>Gristina, A. G., Naylor, P., Myrvik, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infections+from+biomaterials+and+implants%3A+a+race+for+the+surface%29%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Prog+Technol%22%5BJournal%5D)">Infections from biomaterials and implants: a race for the surface).</a> Med Prog Technol. 14, 205-224 (1988).</li>
<li>Santerre, J. P., Woodhouse, K., Laroche, G., Labow, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+biodegradation+of+polyurethanes%3A+from+classical+implants+to+tissue+engineering+materials%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Understanding the biodegradation of polyurethanes: from classical implants to tissue engineering materials.</a> Biomaterials. 26, 7457-7470 (2005).</li>
<li>Tang, L., Eaton, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+responses+to+biomaterials%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">Inflammatory responses to biomaterials.</a> Am J Clin Pathol. 103, 466-471 (1995).</li>
<li>Zimmerli, W., Sendi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+implant-associated+infection%3A+the+role+of+the+host%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Immunopathol%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of implant-associated infection: the role of the host.</a> Semin Immunopathol. 33, 295-306 (2011).</li>
<li>Fishbein, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bisphosphonate-mediated+gene+vector+delivery+from+the+metal+surfaces+of+stents%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Bisphosphonate-mediated gene vector delivery from the metal surfaces of stents.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 159-164 (2006).</li>
<li>Levy, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localized+adenovirus+gene+delivery+using+antiviral+IgG+complexation%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Localized adenovirus gene delivery using antiviral IgG complexation.</a> Gene Ther. 8, 659-667 (2001).</li>
<li>Ma, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anchoring+of+self-assembled+plasmid+DNA%2Fanti-DNA+antibody%2Fcationic+lipid+micelles+on+bisphosphonate-modified+stent+for+cardiovascular+gene+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Anchoring of self-assembled plasmid DNA/anti-DNA antibody/cationic lipid micelles on bisphosphonate-modified stent for cardiovascular gene delivery.</a> Int J Nanomedicine. 8, 1029-1035 (2013).</li>
<li>Hu, W. W., Lang, M. W., Krebsbach, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+adenovirus+immobilization+strategies+for+in+situ+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gene+Med%22%5BJournal%5D)">Development of adenovirus immobilization strategies for in situ gene therapy.</a> J Gene Med. 10, 1102-1112 (2008).</li>
<li>Jang, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+immobilization+of+hexa-histidine-tagged+adeno-associated+viral+vectors+for+localized+gene+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Surface immobilization of hexa-histidine-tagged adeno-associated viral vectors for localized gene delivery.</a> Gene Ther. 17, 1384-1389 (2010).</li>
<li>Bengali, Z., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+Delivery+by+Immobilization+to+Cell-Adhesive+Substrates%5BTitle%5D)+AND+%22MRS+Bull%22%5BJournal%5D)">Gene Delivery by Immobilization to Cell-Adhesive Substrates.</a> MRS Bull. 30, 659-662 (2005).</li>
<li>Holmes, C. A., Tabrizian, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Substrate-mediated+gene+delivery+from+glycol-chitosan%2Fhyaluronic+acid+polyelectrolyte+multilayer+films%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Appl+Mater+Interfaces%22%5BJournal%5D)">Substrate-mediated gene delivery from glycol-chitosan/hyaluronic acid polyelectrolyte multilayer films.</a> ACS Appl Mater Interfaces. 5, 524-531 (2013).</li>
<li>Pannier, A. K., Wieland, J. A., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+polyethylene+glycol+enhances+substrate-mediated+gene+delivery+by+nonspecifically+immobilized+complexes%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Surface polyethylene glycol enhances substrate-mediated gene delivery by nonspecifically immobilized complexes.</a> Acta Biomater. 4, 26-39 (2008).</li>
<li>Wang, C. H., Pun, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Substrate-mediated+nucleic+acid+delivery+from+self-assembled+monolayers%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Substrate-mediated nucleic acid delivery from self-assembled monolayers.</a> Trends Biotechnol. 29, 119-126 (2011).</li>
<li>Fishbein, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+delivery+of+gene+vectors+from+bare-metal+stents+by+use+of+a+biodegradable+synthetic+complex+inhibits+in-stent+restenosis+in+rat+carotid+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Local delivery of gene vectors from bare-metal stents by use of a biodegradable synthetic complex inhibits in-stent restenosis in rat carotid arteries.</a> Circulation. 117, 2096-2103 (2008).</li>
<li>Fishbein, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenoviral+vector+tethering+to+metal+surfaces+via+hydrolyzable+cross-linkers+for+the+modulation+of+vector+release+and+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Adenoviral vector tethering to metal surfaces via hydrolyzable cross-linkers for the modulation of vector release and transduction.</a> Biomaterials. 34, 6938-6948 (2013).</li>
<li>Mittereder, N., March, K. L., Trapnell, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+concentration+and+bioactivity+of+adenovirus+vectors+for+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the concentration and bioactivity of adenovirus vectors for gene therapy.</a> J. Virol. 70, 7498-7509 (1996).</li>
<li>Forbes, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+NO+and+ROS+production+by+AdiNOS+transduced+vascular+cells+through+supplementation+with+L-Arg+and+BH4%3A+Implications+for+gene+therapy+of+restenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Modulation of NO and ROS production by AdiNOS transduced vascular cells through supplementation with L-Arg and BH4: Implications for gene therapy of restenosis.</a> Atherosclerosis. 230, 23-32 (2013).</li>
<li>Niinomi, M., Nakai, M., Hieda, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+new+metallic+alloys+for+biomedical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Development of new metallic alloys for biomedical applications.</a> Acta Biomater. 8, 3888-3903 (2012).</li>
<li>Brito, L. A., Chandrasekhar, S., Little, S. R., Amiji, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-viral+eNOS+gene+delivery+and+transfection+with+stents+for+the+treatment+of+restenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Eng+Online%22%5BJournal%5D)">Non-viral eNOS gene delivery and transfection with stents for the treatment of restenosis.</a> Biomed Eng Online. 9, 56(2010).</li>
<li>Egashira, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+delivery+of+anti-monocyte+chemoattractant+protein-1+by+gene-eluting+stents+attenuates+in-stent+stenosis+in+rabbits+and+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Local delivery of anti-monocyte chemoattractant protein-1 by gene-eluting stents attenuates in-stent stenosis in rabbits and monkeys.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 27, 2563-2568 (2007).</li>
<li>Ohtani, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stent-based+local+delivery+of+nuclear+factor-kappaB+decoy+attenuates+in-stent+restenosis+in+hypercholesterolemic+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Stent-based local delivery of nuclear factor-kappaB decoy attenuates in-stent restenosis in hypercholesterolemic rabbits.</a> Circulation. 114, 2773-2779 (2006).</li>
</ol>

פיתוח פרוטוקולים ומחקרים שהוצגו במאמר זה נתמכו בחלקם על ידי מענקי פיתוח מדענים של איגוד הלב האמריקאי (I.F. 0735110N ו-M.C. 10SDG4020003), מענק המכון הלאומי ללב, ריאות ודם של ארה"ב HL 72108 (R.J.L.), והמכון הלאומי ללב, ריאות ודם T32 007915 (S.P.F). צנתרי אנגיופלסטיקה נתרמו באדיבות על ידי NuMED (הופקינטון, ניו יורק). המחברים מבקשים להודות לסיוע המזכירות של גב' סוזן קרנס.

<html> הפרוטוקול המובא מתאר את שיטה תפעולית למסירת גן מצע תיווך המושגת באמצעות קובץ מצורף הפיך של וקטורי adenoviral לבלי מקטורן משטחי נירוסטה. בעוד שפותח לצורך הספציפי של טיפול גנטי מבוסס סטנט של היצרות כלי דם, טכניקה זו יש יישומים רחבים הרבה יותר בתחומים של חומרים ביולוגיים, שתלים ביו וריפוי גנטי. למרות שמחקרים שהוצגו לי אך ורק בשימוש נירוסטה כמצע מתכת טיפוסי, PABT נקשר סגסוגות מתכת אחרות כגון קובלט / כרום וניטינ...

היעילות של טיפול גנטי ככלים טיפוליים הקשתה על ידי יכולת המיקוד העני של וקטורי ריפוי גנטי 1,2. חוסר תוצאות מיקוד נכונים ברמות תת הטיפוליות של ביטוי transgene במיקום היעד ומוביל להפצה רחבה של וקטורים לאיברים שאינם יעד 3, כוללים אלה אחראים להרכבת תגובות חיסוניות נגד שני הווקטורים והמוצר טיפולי מקודד 4, 5. פוטנציאל אחד אמצעים כדי לקזז את ההפקרות של התמרה ולקדם מטרה היא להציג את וקטורי גן במיקום הרצוי בצורה שמונעת הפצה החופשית שלהם באמצעות דם והלימפה. בדרך כלל, מאמצים אלה מסתמכים על מערכות אספקה ​​בזריקות מקומית הכוללות גם וקטורים ויראליים או שאינם נגיפיים ונכללו עם מטריצות הפיברין, קולגן או חומצה היאלורונית הידרוג&#39;ל 6-10 המסוגלים וקטורי גן זמני שמירה במקום ההזרקה ידי כולא ה פיזיתשלהם ברשת פולימרים. עוד הפרדיגמה מקובלת לריפוי גנטי מקומי מנצלת חוסר תנועה של וקטורי גן על פני השטח של התקנים תותבים מושתלים 11,12. שתלים קבועים רפואיים (endovascular, הסימפונות, סטנטים אורולוגים ומערכת עיכול, קוצבי לב, מפרקים מלאכותיים, רשתות כירורגית וגינקולוגית, וכו &#39;.) משמשים מדי שנה בעשרות מיליון חולים 13. בעוד בדרך כלל יעיל, מכשירים אלה נוטים לסיבוכים הכהלכה נשלטים על ידי נהלים רפואיים הנוכחיים 14-17. התקנים תותבים מושתלים נוכחיים הזדמנות ייחודית שתשמש כפלטפורמות proxy לטיפול ריפוי גנטי מקומי. מנקודת המבט הפרמקוקינטי, derivatization של שתלים רפואיים עם מינוני קלט נמוכים יחסית של תוצאות וקטורי גן בהשגת שני ריכוזים מקומיים גבוהים של וקטורי גן על שתל ממשק הרקמה / והאטת קינטיקה של thei המשטחחיסול r ממיקום זה. כתוצאה ממגורים ממושכים וספיגה מוגברים על ידי אוכלוסיית התאים הממוקדות, חוסר תנועת וקטור ממזערת התפשטות וקטור הגן. כך החיסון המכוון של רקמות שאינם יעד מצטמצם. קשירת פני השטח של וקטורי גן בחומרים ביולוגיים להשתלה (המכונים גם כמסירת גן בתיווך מצע או מסירת גן שלב מוצק) יושמה בניסויי תרבות תא ושל בעלי חיים באמצעות שני ספציפי (אנטיגן הנוגדן 18-20, avidin ביוטין 21,22) ושאינו ספציפיים 23-26 (תשלום, ואן דר ואלס) אינטראקציות. הקובץ המצורף קוולנטיים של וקטורים על פני השטח של המכשיר המושתל כבר נחשב בעבר כאינו פונקציונלי מאז קשרים חזקים יתר על המידה עם המשטח מונעים הפנמת וקטור על ידי תאי מטרה. לאחרונה הודגם כי מגבלה זו ניתן להתגבר על ידי השימוש במקשר צולב באופן ספונטני hydrolysable משמש כטשלה בין המשטח המתכתי שונה של חלבוני סטנט וקפסיד של הווקטור adenoviral 27,28. יתר על כן, שיעור שחרור הווקטור וכמובן ביטוי transgene במבחנת in vivo זמן יכולים להיות מווסת עם השימוש בlinkers חוצי hydrolysable מציג קינטיקה שונה של הידרוליזה 28. הנייר הנוכחי מספק פרוטוקול מפורט לקובץ המצורף קוולנטיים הפיך של וקטורי adenoviral למשטח מתכת מופעל ומציג הגדרת ניסוי שימושית לחקר אירועי התמרה שהתפתחו במבחנה בשריר חלק בתרבית ותאי האנדותל ובחי במודל התרדמה עכברוש של אנגיופלסטיקה סטנט .

<table><tbody><tr><td>316 דיסקי רשת נירוסטה</td><td>Electon Microscopy Sciences</td><td>E200-SS</td><td></td></tr><tr><td>גנרי 304 סטנטים מנירוסטה בדרגה</td><td>Laserage</td> הזמנה <td></td><td>מותאמת אישית</td></tr><tr><td>AdeGFP</td><td>אוניברסיטת פנסילבניה Vector Core</td><td>AD-5-PV0504</td><td></td></tr><tr><td>AdLuc</td><td>אוניברסיטת פנסילבניה Vector Core</td><td>AD-5-PV1028</td><td></td></tr><tr><td>AdEMPTY</td><td>אוניברסיטת פנסילבניה Vector Core</td><td>A858</td><td></td></tr><tr><td>Cy3(NHS)2</td><td>GE Healthcare</td><td>PA23000</td><td></td></tr><tr><td>Sepharose 6B</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>6B100-500ML</td><td></td></tr><tr><td>UV 96-well לוחות</td><td>Costar</td><td>3635</td><td></td></tr><tr><td>פלואורומטריה 96 בארות</td><td>צלחות Costar</td><td>3915</td><td></td></tr><tr><td>תרבית תאים צלחות 96 בארות</td><td>Falcon</td><td>353072</td><td></td></tr><tr><td>Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride (TCEP)</td><td>Pierce Thermo Scientific</td><td>20490</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol (DTT)</td><td>Pierce Thermo Scientific</td><td>20290</td><td></td></tr><tr><td>sulfo-LC-SPDP</td><td>Pierce Thermo Scientific</td><td>21650</td><td></td></tr><tr><td>ספקטרופוטומטר</td><td>התקנים מולקולריים&nbsp;</td><td>SpectraMax 190</td><td></td></tr><tr><td>ספקטרופלואורומטר</td><td>מכשירים מולקולריים</td><td>SpectraMax Gemini EM</td><td></td></tr><tr><td>אינקובטור שייקר אורביטלי</td><td>VWR</td><td>1575R</td><td></td></tr><tr><td>תנור זרימת אוויר אופקי</td><td>Shel Lab</td><td>1350 FM</td><td></td></tr><tr><td>Centra-CL2 צנטריפוגה&nbsp;</td><td>חברת ציוד בינלאומית</td><td>426</td><td></td></tr><tr><td>מערבל מערבולת דיגיטלי</td><td>פישר תרמו סיינטיפיק</td><td>02-215-370</td><td></td></tr><tr><td>אקליפס TE300 מיקרוסקופ פלואורסצנטי</td><td>ניקון&nbsp;</td><td>מצלמת CCD TE300</td><td></td></tr><tr><td>DC 500</td><td>Leica</td><td>DC-500</td><td></td></tr><tr><td>7500 מערכת PCR בזמן אמת</td><td>Applied Biosystems</td><td>לא זמין</td><td></td></tr><tr><td>תחנת ביולומינסנציה ספקטרום IVIS</td><td>פרקינס-אלמר</td><td>לא זמין</td><td></td></tr><tr><td>מלח דיפוטסיום EDTA</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>ED2P</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר אלבומין שבר V (BSA)</td><td>פישר תרמו סיינטיפיק</td><td>BP1600-100</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים של Dumont</td><td>Fine Science Tools</td><td>11255-20</td><td></td></tr><tr><td>A10 קו תאים&nbsp;</td><td>ATCC</td><td>CRL-1476</td><td></td></tr><tr><td>תאי אנדותל אבי העורקים של בקר</td><td>Lonza</td><td>BW-6002</td><td></td></tr><tr><td>לוציפרין, מלח אשלגן</td><td>זהב ביוטכנולוגיה</td><td>LUCK-1Ge</td><td></td></tr><tr><td>פלורוניק F-127</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>P2443-250G</td><td></td></tr><tr><td>PBS ללא סידן ומגנזיום</td><td>Gibco</td><td>14190-136</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>Gemini Bio-Products</td><td>100-106</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת פניצילין/סטרפטומיצין</td><td>Gibco</td><td>11540-122</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, גלוקוז גבוה</td><td>Corning cellgro</td><td>10-013-CV</td><td></td></tr><tr><td>0.25% טריפסין/EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>QIAamp DNA מיקרו קיט</td><td>Qiagen</td><td>56304</td><td></td></tr><tr><td>Power Sybr Green PCR Master Mix</td><td>Applied Biosystems</td><td>4367659</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו אמפר אופטי 96 בארות צלחת תגובה</td><td>מיושמת ביו-מערכות N8010560</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מיקרו-אמפר סרט דבק אופטי</td><td>ביו-מערכות יישומיות</td><td>4360954</td><td></td></tr><tr><td>Cephazolin&nbsp;</td><td>אפוטקס</td><td>לא זמין</td><td></td></tr><tr><td>לוקסיקום (מלוקסיקם)</td><td>נורברוק</td><td>לא זמין</td><td></td></tr><tr><td>הפרין נתרן</td><td>APP תרופות</td><td>לא זמינות</td><td></td></tr><tr><td>קטבט (קטמין)</td><td>VEDCO</td><td>לא זמין</td><td></td></tr><tr><td>Anased (קסילזין)&nbsp;</td><td>לואיד</td><td>אינו זמין</td><td></td></tr><tr><td>פוראן (איזופלורן)&nbsp;</td><td>בקסטר</td><td>לא זמין</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים מעוקלים של קשתית מוריה</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>11370-31</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים מעוקלים עדינים במיוחד של Graefe</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>11152-10</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 מלקחיים</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td>מספריים קפיציים של Vannas</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>15018-10</td><td></td></tr><tr><td>מספריים עדינים - ToughCut</td><td>Fine Science</td><td>Tools 14058-09</td><td></td></tr><tr><td>מספריים כירורגיים</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>14101-14</td><td></td></tr><tr><td>תפר ויקריל (5-0)</td>חוט תפר <td>Ethicon</td><td>J385</td><td></td></tr><tr><td>(משי 4/0)&nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>18020-40</td><td></td></tr><tr><td>קליפס תפר מישל</td><td>Fine Science</td><td>Tools 12040-02</td><td></td></tr><tr><td>מרחיב פצעים (ספקולת עיניים של לנקסטר)</td><td>KLS Martin</td><td>34-149-07</td><td></td></tr><tr><td>מעקר חרוזים חמים</td><td>Fine Science Tools</td><td>18000-45</td><td></td></tr><tr><td>מוליך קליפ תפר מישל</td><td>Fine Science Tools</td><td>112028-12</td><td></td></tr><tr><td>Insyte Autoguard 24 G IV קטטר</td><td>בקטון-דיקינסון</td><td>381412</td><td></td></tr><tr><td>2F קטטר פוגרטי</td><td>אדוארדס מדעי החיים</td><td>120602F</td><td></td></tr><tr><td>צינורות טפלון</td><td>Vention</td><td>041100BST</td><td></td></tr><tr><td>קטטר PTA</td><td>NuMed</td> הזמנה <td></td><td>מותאמת אישית</td></tr><tr><td>רפידות גזה</td><td>קנדל הלת'</td><td>9024</td><td></td></tr><tr><td>אפליקטורים כותנה</td><td>WOD1003</td> ייצור <td>סולון</td><td></td></tr><tr><td>מזרק בקסטר</td><td></td><td>281321</td><td></td></tr><tr><td>10 מ"ל (Luer-Lok)</td>מזרק <td>Beckton-Dickinson</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>1 מ"ל (Luer-Lok)</td><td>Beckton-Dickinson</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>Clippers עם להב #40</td><td>Oster&nbsp;</td><td>78005-314</td><td></td></tr><tr><td>סרט כירורגי Transpore</td><td>3M</td><td>MM 15271</td><td></td></tr><tr><td>משחה וטרינרית Puralube</td><td>Pharmaderm</td><td>אינו זמין</td><td></td></tr></tbody></table>

העברת כלי דם ג&#39;ין ממתכת סטנט משטחים באמצעות adenoviral וקטורי tethered דרך hydrolysable חוצה linkers

Vascular Gene Transfer from Metallic Stent Surfaces Using Adenoviral Vectors Tethered through Hydrolysable Cross-linkers

ב- סטנט restenosis מציג סיבוך משמעותי של נהלי revascularization מבוסס סטנט בשימוש נרחב כדי להקים מחדש את זרימת דם דרך מגזרים הצטמצמו באופן ביקורתי של עורקים הכליליים ופריפריה. סטנטים Endovascular מסוגלים שחרור מתכונן של גנים עם פעילות אנטי restenotic עשוי להציג אסטרטגיה חלופית למשמשים כיום סטנטים משחררי תרופה. על מנת להגיע לתרגום קליני, סטנטים משחררי גן חייבים להפגין קינטיקה הצפויה של שחרור-משותק סטנט גן וקטור ותמרת אתר ספציפי של כלי דם, תוך הימנעות תגובה דלקתית מוגזמת בדרך כלל מזוהית עם ציפוי הפולימר המשמש ללכידתו הפיסית של הווקטור. מאמר זה מתאר מתודולוגיה מפורטת לקשירה בלי מקטורן של וקטורי גן adenoviral לסטנטים המבוססים על הפיך מחייב של חלקיקי adenoviral לpolyallylamine בביספוספונטים (PABT) -modified משטח נירוסטה באמצעות linkers חוצי hydrolysable (HC). משפחה שלHC bifunctional (amine- ותיאול-reactive) עם t ממוצע 1/2 של הידרוליזה אסתר בשרשרת הנעה בין 5 ל 50 ימים שמשו לקשר הווקטור עם סטנט. הליך קיבוע הווקטור מתבצע בדרך כלל אותה במסגרת 9 שעות ומורכבת מכמה שלבים: 1) דגירה של דגימות המתכת בתמיסה מימית של PABT (4 שעות); 2) deprotection של קבוצות תיאול מותקנות בPABT עם טריס (phosphine 2-carboxyethyl) (20 דקות); 3 הרחבה) של קיבולת תגובת תיאול של משטח המתכת על ידי מגיב דגימות עם polyethyleneimine derivatized עם pyridyldithio (קבוצות) PDT (2 שעות); 4) המרה של קבוצות PDT לthiols עם dithiothreitol (10 דקות); 5) שינוי של adenoviruses עם HC (1 שעות); 6) טיהור של חלקיקי adenoviral שונה על ידי כרומטוגרפיה גודל הדרת טור (15 דקות) ו7) קיבוע של חלקיקי adenoviral תיאול-reactive על פני השטח thiolated הפלדה (1 שעה). טכניקה זו יש תחולה פוטנציאלית רחבה מעבר לסטנטים,על ידי הקלת הנדסה של התקני bioprosthetic פני השטח כדי לשפר את ההתאמה הביולוגית שלהם באמצעות מסירת הגן בתיווך המצע לתאי ממשק החומר הזר שהושתל.

ניסויי שחרור וקטור קשירה של וקטורי adenoviral אל פני השטח של שתלים, כולל מכשירים התערבותית כגון סטנטים endovascular, קרובה לווקטור לאתר המחלה, באופן חלקי מייתרת את חוסר המיקוד הפיזי &quot;הווקטורים. עם זאת, כדי להיות מסוגל להשיג את ההשפעות טיפוליות באמצעות התמרה של רקמת המטרה, הווקטור חייב להשתחרר מהשטח (איור 2). השימוש בlinkers הצולב hydrolysable השערה לאפשר 1, שתלים) קובץ מצורף...

מחקרים אלה מדווחים על הצמדה הפיכה של וקטורים של גנים אדנו-ויראלים למשטחי מתכת חסרי ציפוי של סטנטים ודיסקי רשת מודל. שחרור ממושך של חלקיקים נגיפיים בעלי יכולת התמרה המותנה בהידרוליזה של קישורים צולבים המשמשים לקיבוע וקטור מביא לביטוי טרנסגן עמיד ספציפי לאתר בתאי כלי דם ובעורקים סטנטים.

העברת כלי דם ג&#39;ין ממתכת סטנט משטחים באמצעות adenoviral וקטורי Tethered דרך Hydrolysable חוצה linkers

In-stent restenosis presents a major complication of stent-based revascularization procedures widely used to re-establish blood flow through critically ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא להשתיל סטנט שחרור גנים בעורק התרדמה המשותף (common carotid artery) של חולדת מעבדה, ולקבוע את היקפה ומיקומה של ביטוי הגן המועבר (transgene expression) עם הזמן. לשם כך, מבוצעת ארטרוטומיה (arterotomy) בענף התרדמה החיצוני כדי להשיג גישה וסקולרית לעורק התרדמה המשותף. קטטר Fogarty במידה של 2 French מנופח מועבר דרך עורק התרדמה המשותף כדי להסיר את האנדותל ולגרום לפגיעה בשכבה המדיאלית.לאחר מכן, מורכב סטנט המשחרר גנים על קטטר לאנגיופלסטיה המוחדר למקטע האמצעי של העורק התהומי המשותף הפגוע מהבלון, והוא נפרס לבסוף כדי לקבוע את ביטוי הלוסיפראז העורקי. לוסיפרין המנוסח יחד עם ג'ל אוניק מיושם באזור הפרי-וסקולרי ומבוצעת הדמיית ביולומינסנציה. לבסוף, ניתן להשיג תוצאות המאפשרות השוואה בין פורמולציות שונות של סטנטים המשחררים גנים ביחס להיקף ולמשך התעתוק של הרקמה הווסקולרית.היתרון של מניעת היצרות חוזרת (restenosis) מיידית ותסביך של תסביס בסטנט (stent thrombosis) באמצעות טיפול גנטי הוא שזוהי הדרך הישירה ביותר לניטור ביטוי גנים אקסוגניים מווקטורים מבחנה ועורקים עם סטנטים. בעוד שהאסטרטגיה שלנו לקישור וקטורים אדנו-ויראליים לסטנטים מובנת לחלוטין, הניואנסים הטקסטואליים של הפרוצדורה הכירורגית להשתלת סטנטים בחולדות הם ברורים. כאשר הדבר מודגם באופן ויזואלי, הכין והוסף סטנטים המצופים בוקטורים כפי שמתואר במסמך הכתוב המצורף.יש לאחסן את הסטנטים עם נגזרת הווירוס ב-PBS סטרילי בטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס למשך זמן שאינו עולה על 24 שעות לפני השימוש. לאחר הרדמה של חולדות Sprague Dawley זכרים, קבעו את עומק ההרדמה באמצעות תגובה לצביטה בכף הרגל ובבדיקת טונוס השרירים, ולאחר מכן גלחו את אזור הצוואר והחלק העליון של בית החזה. מרחו משחה וטרינרית לעין כדי למנוע התייבשות של הלובן (sclera), והעניקו אנטיביוטיקה, משכך כאבים ותמיסת מלח.בשלב הבא, בצעו קטטריזציה של וריד הזנב באמצעות קטטר 24 gauge והחדירו הפרין באופן אספטי. הכינו את אזור הצוואר והחלק העליון של בית החזה באמצעות פובידון ואתנול. לאחר מכן, הניחו את בעל החיים במצב שכיבה על הגב (supine), כאשר הראש פונה לעבר המנתח.לאחר מכן, יש להניח סביב האזור כיסויים סטריליים ולהשתמש בסכין מנתחים. בצעו חתך בקו האמצע דרך העור והפציה של הצוואר. השתמשו בטכניקות של דיסקציה קהה כדי לבודד את ה-external carotid Artery השמאלי.ההיבט הקריטי ביותר של הליך זה הוא הכנת העורק לצורך ה-ectomy. לשם כך, יש לבודד את העורק הקרוטידי החיצוני ולנקות אותו מכל רקמה מקיפה. יש לקשור את העורק הקרוטידי החיצוני בנקודה הדיסטלית ביותר שניתן להגיע אליה.לאחר מכן, יש להניח ליגטורה זמנית מחליקה של משי 4-0 במקור של העורק הקרוטידי הפנימי. לאחר מכן, באמצעות מספרי קפיץ, בצעו חתך עורקי של 2 mm בעורק הקרוטידי החיצוני השמאלי דרך החתך. הכניסו קטטר Fogarty במידה 2 French אל תוך העורק הקרוטידי המשותף.נפחו את קצה הקטטר בתמיסת סליין. לאחר מכן, כדי להסיר את האנדותל, העבירו את הבלון המנופח שלוש פעמים מקשת האורטה ועד לפיצול העורק הקרוטידי. החליקו קטע של צינור מעל קטטר fogerty וביתו לתוך העורק הקרוטידי המשותף.הוצא את תושבת קטטר Fogarty ואת הכלי למעיכה (crimp), והעבר את סטנט Luke Derivate מעל הבלון של קטטר לאנגיופלסטיה בקוטר 1.5 מילימטר. הכנס את הסטנט דרך צינור הטפלון והקדמו אותו אל המקטע המרכזי של העורק הקרוטיד המשותף. הימנע משפשוף של הסטנט כנגד הצינור או דופן כלי הדם.לפריסת הסטנט, חברו את קטטר האנגיופלסטיה למד לחץ של דה-אינפלטור (deflator) והפעילו לחץ של 12 atmospheres למשך 30 שניות. הוציאו את קטטר האנגיופלסטיה. לאחר מכן, קשרו את העורק הקרוטידי החיצוני פרוקסימלית לאתר ה-Arter Otomy, ושחררו את הקשירה הזמנית של העורק הקרוטידי הפנימי.סגרו את הפצע הניתוחי בשכבות באמצעות תפרים רצים של Vicryl 4-0 וסגרו את העור בעזרת סיכות. הניחו את בעל החיים על משטח חימום להחלמה עד שיהיה מסוגל להתנייד. לאחר מכן, החזירו אותו לכלוב המבודד שלו.בעוד שבדרך כלל בעלי החיים לאחר הניתוח אינם מפגינים סימני כאב או אי-נוחות מעבר ל-12 השעות הראשונות לאחר הפרוצדורה, שקלו להאריך את הטיפול ב-meloxicam למשך 72 שעות בנקודות זמן הנעות בין יום אחד לשלושה שבועות לאחר פריסת הסטנט. הכינו את המערכת לדימות ביולומינצנציה על ידי פתיחת תוכנת living image גרסה 4.2 ומעלה עבור מכשיר ה-ivus spectrum.אתחול חומרת הדימוג אורך כ-10 דקות. לאחר מכן, הכינו תערובת של 50 milligrams per milliliter Lucifer ב-PBS ו-25%onic F1 27 ב-PBS ביחס של אחת לארבעה, נפח לנפח, ואחסנו אותה על קרח. התמיסה צריכה להיות צמיגית.לאחר הרדמת החולדה באמצעות isof fluorine ובדיקת עומק ההרדמה, הסר את הסיכות הכירורגיות באופן אספטי. הכן את האתר ופתח מחדש את הפצע הניתוחי. מזן 3 mg/kg של meloxicam תת-עורית; באמצעות דיסקציה קהה, השג גישה מחדש לעורק התרדמה המשותף השמאלי (left common carotid artery) והפרד אותו מעצב הוגוס (vagus nerve) ומרקמת חיבור סמוכה.באמצעות פיפטה, יש למרוח 200 µL של תערובת הלוציפרין המקוררת ישירות על המקטע החשוף של העורק הקרוטיס המשותף (common carotid artery). במגע עם הרקמה בטמפרטורה של 37 °C, התמיסה אמורה להפוך לג'ל. לאחר מכן, יש להניח את החיה במצב שכיבה על הגב (supine position) בתא ההדמיה של מכשיר ה-ivus spectrum, ולהניח מסכת פנים לשמירה על הרדמה ב-isof fluorine.לאחר מכן, בחלון פאנל הבקרה של הרכישה (acquisition control panel) בתוכנה, בחרו בעמדה B, המתאימה למרחק של 6.6 centimeter בין המצלמה לאובייקט, מתוך התפריט הנפתח של שדה הראייה (field of view), בחרו ב-binning והגדירו את מקדם ה-binning ל-medium. לאחר מכן, בתיבת גובה הנבדק (subject height), הקלידו 2.5 centimeter ובתיבת זמן החשיפה (exposure time), בחרו בדקות כיחידת זמן ובחרו בערך המספרי שתיים.כווננו את מיקום בעל החיים בתא כך שהצוואר והחלק העליון של בית החזה של החולדה יהיו מוגבלים לחלוטין לתוך הריבוע המוקרן על קרקעית התא. שלוש דקות לאחר מריחת הג'ל הלומניסנטי, לחצו על כפתור ה-acquire במסך כדי להתחיל ברכישת התמונה. זמן הרכישה עשוי להשתנות בין דקה אחת לשיש דקות, בהתאם לעוצמת האות הצפויה.לאחר רכישת הדמות, השתמש במזרק כדי לשטוף את הג'ל בעזרת תמיסת סלין וטפח על המרווח הפרי-עורקי באמצעות גזה סטרילית ומקלונים של צמר גפן. סגור את הפצע באמצעות תפרי Vicryl וסגר את העור באמצעות סיכות (staples). לאחר מכן, אפשר לבעל החיים להתאושש והחזירו לכלובו.כמו קודם לכן, חזור על הליך הדימוג במועד מאוחר יותר. נקודות אלו נועדו לבחון את מהלך הזמן של הביטוי העורקי שנוצר על ידי וקטורים אדנו-ויראליים המקובעים לסנטן למתן סיסטמי. הכן תמיסה של 50 milligrams per milliliter Lucifer ב-PBS לאחר הרדמת בעל החיים והכנתו.כפי שבוצע קודם לכן, בצעו קטטרז של וריד הזנב באמצעות קטטר במידה 24 וקבעו אותו על ידי הנחת פיסת סרט הדבקה כירורגי בין הזנב לקטטר. לאחר מכן, קפלו את קצוות הסרט כלפי מעלה והלפיחו אותם סביב הזנב מספר פעמים. לאחר דקה מההזרקה, מזריקו מיליליטר אחד של התמיסה דרך הקטטר בפרק זמן של עשר שניות.התחל ברכישת תמונות. כפי שצוין קודם לכן, שים לב שקצב הזרקה מהיר מ-10 שניות עלול לגרום לפעילות אפילפטית ולדום נשימה, זאת כדי לבחון את ההשפעות הפוטנציאליות הקשורות לשימוש במקשרי צילוב הידרוליזיים שונים. בטרנסדוקציה עורקית, מוטמיעים בבעלי החיים סטינטים מסוג Luke eluding, והם נסרקו יום אחד ושמונה ימים לאחר פריסת הסטינט.כפי שניתן לראות כאן יום אחד לאחר השתלת הסטנט, בעלי חיים שטופלו בסטנטים המכילים crosslinker שעבר הידרוליזה מהירה עם add, Luke מראים בדרך כלל את אות הלומינסנציה הגבוה ביותר; חולדות שקיבלו crosslinker שעבר הידרוליזה בינונית הראו את אות הלומינסנציה הגבוה הבא, ואחריהן סטנטים המכילים crosslinker שעבר הידרוליזה איטית. לא נצפה אות מורגש בקבוצת החולדות שהושתלו בהן סטנטים שהוכנו באמצעות non hydrolyzed crosslinker tethered add Luke. דבר זה מדגיש את החשיבות של שחרור וקטור ללא הפרעה מהסטנט לצורך טרנסדוקציה יעילה של רקמה וסקולרית.עד היום השמיני, העצימות הממוצעת של ביטוי לוציפראז עם סטנטים המורכבים מ-RHC ירדה פי כמה. כאשר עצימויות היום הראשון והיום השמיני שורטטו בנפרד בסקאלה לוגריתמית, נראתה עלייה של 1.4 เท่า עם סטנטים המורכבים מקשר צולב שעבר הידרוליזה בינונית ועלייה של 1.8 เท่า נראתה עם סטנטים המורכבים מקשר צולב שעבר הידרוליזה איטית. ממצא זה עולה בקנה אחד עם ההשערה לפיה טרנסדוקציה וסקולרית עמידה יותר עם סטנטים המשחררי גנים תפגין קינטיקה איטית יותר של שחרור וקטור מפני השטח של הסטנט.לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי האופן שבו מטמיעים סטנט add Luke alluding בעורק הקרוטיד האחורי, וכיצד לדגם את הביטוי הווסקולרי העוקב של לוציפראז לאחר פריסת הסטנט. ניתוח הפריסה עשוי להימשך 20 עד 25 דקות, בעוד שהליך הדמיה עשוי להימשך 10 עד 15 דקות. אנו משתמשים באותה טכניקה כדי לחקור את ההשפעות האנטי-אוטיות של פורמולציות לטיפול גנטי ותרופות לא-גנטיות, וזאת על ידי קביעת מידת החסימה העורקית.שבועיים לאחר פריסת הסטנט.

vascular-gene-transfer-from-metallic-stent-surfaces-using-adenoviral

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

השיטה של ​​העברת גנים לטיפול באי ספיקת לב איסכמית מתואר באמצעות מודל החזירים של אוטם שריר הלב. שיטה פשוטה לשחזור שלנו מאפשר לנו בקלות להעריך את היעילות של העברת גנים שונים בצורה פשוטה מאוד לשחזור.

Gene Transfer לאי ספיקת לב איסכמי במודל פרה

אנו מתארים את השיטה של ​​תאי גזע תכנות לביטוי יתר גורמים טיפוליים לאנגיוגנזה באמצעות חלקיקים פולימריים מתכלים. תהליכים שתוארו כוללים סינתזת פולימר, transfecting בתאי גזע שמקורם בשומן במבחנה, ומאמת את היעילות של תאי גזע מתוכנתים לקדם אנגיוגנזה במודל איסכמיה hindlimb עכברי.

תאי גזע תכנות טיפולי אנגיוגנזה שימוש אורגניים פולימריים חלקיקים

דוגמה לטיפול גנטי אדנו-ויראלי בקרניות אנושיות בתרבית איברים סוכרתיים מוצגת לקראת נורמליזציה של ריפוי פצעים מושהה והפחתה ניכרת בביטוי סמני תאי גזע אפיתל בקרניות אלה. הוא גם מתאר את האופטימיזציה של תהליך זה בתרביות אפיתל לימבליות מועשרות בתאי גזע.

תרפיה adenoviral ג&#39;ין עבור סוכרתית keratopathy: השפעות על ריפוי פצע גזע ביטוי נייד מרקר ב קרניות אדם איברים בתרבית תאים לימבלית אפיתל

שיטה זו היא להציג את transgene לתוך אנדותל עורקי התרדמה ארנב. הקדמה של transgene מאפשר את ההערכה של תפקיד ביולוגי של המוצר transgene העורקים נורמלי או מחלת מודלים. השיטה שימושית גם למדידת פעילות של רצפי DNA תקינה.

אין ויוו העברה גנטית כדי אנדותל העורק נפוצות הארנב

שיטה זו מתארת את המיקום של שתלי העורק interposition בארנבים, את התמרה חושית של השתלים, ההישג של הביטוי transgene עמיד. דבר זה מאפשר החקירה של תפקידים פיזיולוגיים ופתולוגיים של transgenes ומוצרים שלהם חלבון בורידים המושתל, ובדיקות של ג'ין טיפולים למחלות שתל הווריד.

דגם ארנב של ביטוי Transgene עמיד ומוחלף כדי שתלי Interposition נפוצים של העורק הראשי

פרוטוקול זה נועד לתאר hepatocyte חזירי בידוד ו- ex-vivo המסירה הגן כדי לרפא את הדגמים של מחלות מטבוליות באמצעות השתלת תאים עצמיים. אף על פי המודל הזה נהנה יתרונות ייחודיים לטובת טיפול מוצלח, היישום הוא בסיס רלוונטי להתייחס אינדיקציות ומחלות נוספות.

Lentiviral בתיווך וקטור ריפוי גנטי של Hepatocytes לשעבר Vivo עבור השתלת עצמיים של החזירים

הפרוטוקול המתואר כאן מאפשר לחוקרים במיוחד לשנות capsids אדנו-אתרים נבחרים על-ידי כימיה פשוטה. אדנו מסוככים את המומנט חלקיקים וקטורים העברת גנים retargeted יכול להיווצר ו החרקי המארח יכול להילמד.

בשילוב שינויים Capsid גנטי וכימי של וקטורים המבוסס על אדנו העברה גנטית עבור הגנה ומיקוד

שיטות מתוארות ליצירת כמויות גדולות של אדנו-וירוסים רקומביננטיים, אשר לאחר מכן ניתן להשתמש בהם כדי להתמיר את המכרסם המקומי urothelium המאפשר ביטוי של transgenes או downregulation של תוצרי גנים אנדוגניים.

ביטוי טרנסגנים באורותליום טבעי של שלפוחית השתן באמצעות התמרה בתיווך אדנו-וירוס

פרוטוקול זה מתאר כיצד הזרקה תוך-טחולית של RNA סיכת ראש קטנה המועברת על ידי AAV8 משיגה את אותה יעילות הפלת גנים בכבד כמו הזרקת וריד פורטלי, המייצגת הליך פשוט יותר עם תמותה וסיבוכים נמוכים בהרבה סביב הניתוח ואחרי הניתוח.

הפלת גנים יעילה בכבד באמצעות הזרקה תוך-טחולית של RNA סיכת ראש קטנה המסופקת על ידי נגיף הקשור לאדנו Serotype 8 (AAV8)

כאן, מוצג פרוטוקול להשתלת שתל כלי דם מהונדס רקמות בעורק הצוואר של העכבר בטכניקת השרוול, המספק מודל בעל חיים מתאים לחקירת מנגנוני התחדשות רקמות כלי הדם.

השתלת שתל כלי דם מהונדס רקמות בעורק הצוואר של העכבר בטכניקת שרוול

למדו השתלת סטנט משחרר גנים בעורק הקרוטידי המשותף בעכברושי מעבדה. השיטה כוללת שימוש בקטטר פוגארטי לפגיעה באנדותל וביולומינסנציה להערכת ביטוי טרנסגן לאורך זמן.

העברת כלי דם ג'ין ממתכת סטנט משטחים באמצעות adenoviral וקטורי Tethered דרך Hydrolysable חוצה linkers

גלה סרטונים נוספים