העברת כלי דם ג'ין ממתכת סטנט משטחים באמצעות adenoviral וקטורי Tethered דרך Hydrolysable חוצה linkers

המטרה הכוללת של הליך זה היא להשתיל סטנט חומק של גן בעורק הצוואר המשותף של חולדת מעבדה ולקבוע את ההיקף והמיקום של ביטוי הטרנסגנים הנובע מכך לאורך זמן. לשם כך, נעשית אוטומיה של העורקים בענף הצוואר החיצוני כדי לקבל גישה לכלי הדם לעורק הצוואר המשותף. צנתר פוגרטי צרפתי מנופח מועבר על פני עורק הצוואר המשותף כדי לשלול את האנדותל ולפגוע בשכבה המדיאלית.

סטנט נוסף של לוק חומק מותקן לאחר מכן על צנתר אנגיופלסטיקה המוחדר לחלק האמצעי של עורק הצוואר המשותף הפגוע בבלון ונפרס לבסוף כדי לקבוע את ביטוי הלוציפראז העורקי. נוסחה לוציפרית משותפת עם ג'ל אוניק מוחלת על האזור הפרי-וסקולרי ומתבצעת הדמיה ביולומינסנציה. בסופו של דבר, ניתן להשיג תוצאות המאפשרות השוואה בין ניסוחים שונים של סטנטים חומקים מגנים ביחס להיקף ומשך העברת רקמת כלי הדם.

היתרון במניעת רסטנוזיס מיידי ופקקת סטנטים באמצעות ריפוי גנטי הוא שזו הדרך הישירה ביותר לנטר ביטוי גנים אקסוגני מווקטורים של בקבוקונים ועורקים סטנטים. בעוד שהאסטרטגיה שלנו לקשירת וקטורים אדנו-ויראליים לסטנטים מובנת לחלוטין שכן ניואנס הטקסט של ההליך הכירורגי להשתלת סטנט בחולדות ברור. כאשר מודגם, הכן חזותית, הוסף סטנטים חומקים של לוק כמתואר במסמך הכתוב הנלווה.

אחסן את הסטנטים שמקורם בנגיף ב-PBS סטרילי בטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס לא יותר מ-24 שעות לפני השימוש. לאחר הרדמה, חולדות ספראג דולי זכרים קובעות את עומק ההרדמה על ידי תגובת צביטת כפות וגילוח שרירים באזור הצוואר והחזה העליון. יש למרוח משחה וטרינרית עיניים למניעת יובש של הסקלרה, לתת אנטיביוטיקה, משכך כאבים ומי מלח.

לאחר מכן, צנתר את וריד הזנב עם קטטר מד 24 ומתן הפרין אספטי. הכן את אזור הצוואר והחזה העליון עם פובידון ואתנול. לאחר מכן הניחו את החיה שוכבת כשהראש מצביע על המפעיל.

לאחר מכן הניחו וילונות סטריליים בעזרת אזמל. בצע חתך בקו האמצע דרך העור וצוואר. השתמש בטכניקות דיסקציה קהות כדי לבודד את עורק הצוואר החיצוני השמאלי.

ההיבט הקריטי ביותר בהליך זה הוא הכנת העורק לכריתת העורקים שלנו. לשם כך יש לבודד את עורק הצוואר החיצוני ולנקות אותו מכל אופנה. קשרו את עורק הצוואר החיצוני באתר הנגיש ביותר.

לאחר מכן יש למרוח קשירה זמנית הזזה של ארבעה משי הו על מקור עורק הצוואר הפנימי. לאחר מכן, בעזרת מספריים קפיציים, בצע חתך עורקי של שני מילימטר בעורק הצוואר החיצוני השמאלי דרך החתך. הכנס שני קטטר ערפל צרפתי לעורק הצוואר המשותף.

נפחו את קצה הקטטר במי מלח. לאחר מכן, כדי לשלול את האנדותל, העבירו את הבלון המנופח שלוש פעמים מקשת אבי העורקים לפיצול הצוואר. החלק חתיכת צינור מעל קטטר הערפל ולתוך עורק הצוואר המשותף.

משוך את תושבת הצנתר של פוגארטי ולחץ והוסף סטנט Luke Derivate מעל הבלון של צנתר אנגיופלסטיקה בקוטר 1.5 מילימטר. הכנס את הסטנט דרך צינור הטפלון וקדם אותו לקטע האמצעי של עורק הצוואר המשותף. הימנע משפשוף הסטנט על הצינור או דופן הכלי.

כדי לפרוס את הסטנט, חבר את צנתר האנגיופלסטיקה למד לחץ בדפלטור והפעל לחץ של 12 אטמוספרות למשך 30 שניות. משוך את צנתר האנגיופלסטיקה. לאחר מכן, קשרו את עורק הצוואר החיצוני הפרוקסימלי לאתר Arter Otomy, ושחררו את הקשירה הזמנית בעורק הצוואר הפנימי.

תקן את הפצע הניתוחי בשכבות עם ארבעה תפרי ויקריל רצים והדק את העור. הניחו את החיה על כרית חימום להתאוששות עד שהיא אמבולטורית. לאחר מכן החזירו אותו לכלוב המבודד שלו.

בעוד שבעלי החיים לאחר הניתוח אינם מראים בדרך כלל סימני כאב או אי נוחות מעבר ל-12 השעות הראשונות לאחר ההליך, שקול להאריך את הטיפול במלוקסיקם למשך 72 שעות בכל פעם. נקודות שנעות בין יום אחד לשלושה שבועות לאחר פריסת הסטנט. התכוננו להדמיית ביולומינסנציה על ידי פתיחת תוכנת Live Image גרסה 4.2 ומעלה עבור מנגנון ספקטרום ה-ivus.

אתחול חומרת ההדמיה נמשך כ-10 דקות. לאחר מכן, הכינו תערובת של 50 מיליגרם למיליליטר לוציפר ב-PBS ו-25% אוניק F1 27 ב-PBS אחד עד ארבע, נפח לנפח, ואחסנו אותה על קרח. הפתרון צריך להיות צמיג.

לאחר הרדמת החולדה באיזוף פלואור ובדיקת עומק ההרדמה, הסר את הסיכות הכירורגיות באופן אספטי. הכן את האתר ופתח מחדש את הפצע הניתוחי. יש לתת שלושה מיליגרם לק"ג מלוקסיקם באופן תת עורי באמצעות דיסקציה קהה, להחזיר את הגישה לעורק הצוואר המשותף השמאלי ולהפריד אותו מהעצב התועה ורקמת החיבור הסמוכה.

בעזרת פיפטה, מרחו 200 מיקרוליטר מתערובת האוניקים הלוציפריאנית המצוננת ישירות על הקטע החשוף של עורק הצוואר המשותף. במגע עם הרקמה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, התמיסה אמורה לג'ל. לאחר מכן, הנח את החיה במצב שכיבה בתא ההדמיה של מנגנון ספקטרום ה-ivus, והנח מסכת פנים כדי לשמור על הרדמת isof fluorine.

לאחר מכן, בחלון לוח הבקרה של הרכישה של התוכנה, בחר מיקום B, המתאים למצלמה של 6.6 סנטימטר למרחק אובייקט מהתפריט הנפתח של שדה הראייה, בחר binning והגדר את גורם ה-binning לבינוני. לאחר מכן, בתיבה גובה הנושא, הקלד 2.5 סנטימטרים בתיבת זמן החשיפה. בחר דקות כיחידת זמן ובחר ערך מספרי של שתיים.

התאם את מיקום החיה בתא כך שהצוואר והחזה העליון של החולדה יהיו מוגבלים לחלוטין לריבוע המוקרן בתחתית החדר. שלוש דקות לאחר מריחת הג'ל האוניק לוציפריאן, לחץ על כפתור הרכישה על המסך כדי להתחיל ברכישת התמונה. זמן הרכישה יכול לנוע בין דקה לשש דקות בהתאם לעוצמת האות הצפויה.

לאחר רכישת התמונה, השתמש במזרק כדי לשטוף את הג'ל במי מלח ולטפוח את החלל הפרי-עורקי עם גזה סטרילית ואפליקטורים מכותנה. סוגרים את הפצע בתפרי ויקריל ומהדקים את העור. לאחר מכן אפשר לבעל החיים להתאושש ולהחזיר אותו לכלוב שלו.

כמו קודם, חזור על הליך ההדמיה במועד מאוחר יותר. נקודות לחקור את מהלך הזמן של ביטוי העורקים שנוצר על ידי וקטורים אדנו-ויראלים משותקים למתן מערכתי. הכינו תמיסה של 50 מיליגרם למיליליטר לוציפר ב- PBS לאחר הרדמה והכנת החיה.

כמו קודם, צנתר את וריד הזנב עם קטטר בגודל 24 ואבטח אותו על ידי הנחת פיסת סרט כירורגי בין הזנב לקטטר. לאחר מכן סובב את קצוות הקלטות כלפי מעלה וסובב אותם סביב הזנבות מספר פעמים. יש להזריק מיליליטר אחד של התמיסה דרך הצנתר במרווח של עשר שניות דקה אחת לאחר ההזרקה.

התחל ברכישת תמונות. כמו קודם, שימו לב שקצב הזרקה מהיר יותר מ-10 שניות יכול לעורר פעילות התקפים ודום נשימה כדי לבחון את ההשפעות הפוטנציאליות הקשורות לשימוש בקישורים צולבים שונים שעברו הידרוליזה. בהתמרה עורקית, בעלי חיים הושתלו עם סטנטים שהתחמקו מלוק וצולמו יום ושמונה ימים לאחר פריסת הסטנט.

כפי שניתן לראות כאן יום אחד לאחר השתלת הסטנט, בעלי חיים שטופלו בהידרוליזה מהירה נוסחו בנוסף, סטנטים של לוק מציגים בדרך כלל את אות הזוהר הגבוה ביותר חולדות שקיבלו קרוסלינקר שעבר הידרוליזה בינונית היו עם אות הזוהר הגבוה הבא, ואחריו סטנטים שנוסחו בהידרוליזה איטית. לא נצפה אות מורגש בקבוצת החולדות שהושתלו בהן סטנטים שהוכנו באמצעות קרוסלינקרים ללא הידרוליזה הקשורים להוספת לוק. זה מדגיש את החשיבות של שחרור וקטור ללא הפרעה מהסטנט להעברה יעילה של רקמת כלי הדם.

ביום השמיני, העוצמה הממוצעת של ביטוי לוציפראז עם סטנטים בנוסחת RHC ירדה פי כמה. כאשר עוצמות היום הראשון והיום השמיני תווו בנפרד בקנה מידה לוגריתמי, נצפתה עלייה של פי 1.4 עם סטנטים שנוסחו בהידרוליזה בינונית ועלייה של פי 1.8 נצפתה עם סטנטים שנוסחו בהידרוליזה איטית. ממצא זה עולה בקנה אחד עם ההשערה של התמרת כלי דם עמידה יותר עם סטנטים חומקים מגנים המציגים קינטיקה איטית יותר של שחרור וקטור משטח הסטנט.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להשתיל סטנט המרמז על לוק בעורק הצוואר האחורי ולדמיין את הביטוי כלי הדם של לוציפראז כאשר שולטים בסטנט. ניתוח פריסה יכול להימשך 20 עד 25 דקות ואילו הליך ההדמיה יכול להימשך 10 עד 15 דקות. אנו משתמשים באותה טכניקה כדי לחקור את ההשפעות האנטיוטיות של פורמולציות ריפוי גנטי ותרופות לא גנטיות על ידי קביעת היקף חסימת העורקים.

שבועיים לאחר פריסת הסטנט.