השפעה של זכר אבזר בלוטת מוצרים בהטלת ביצים ברכיכות חלזון

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא לאפיין את ההשפעות של חלבוני נוזל הזרע על התנהגות הטלת הביצים של מין הרמפרודיטה בו זמנית. זה מושג תחילה על ידי בידוד אנשים מתרבית מעבדה סטנדרטית, ולאחר מכן דיסקציה של איברי המטרה. שנית, הזרעונים נאספים ונוצר פתרון לטיפול.

לאחר מכן, החלזונות מוזרעים באופן מלאכותי. ואז מכניסים אותם למאמר ביוגרפי. בתנאים סטנדרטיים, מסת הביצים נאספת, נסרקת ומוכנסת ל-BS בודד כדי לבקוע.

לאחר מספר שבועות, האבקועים נספרים ונסרקים, ולאחר מכן ניתן לנתח את כל התמונות באמצעות תוכנה חופשית. פרוטוקול זה יכול לעזור לענות על שאלות לגבי תהליכי ברירה מינית המתווכים באמצעות חלבוני נוזל הזרע. מאחר שאנו מסתכלים כאן על הרמפרודיטים בו-זמניים, אנו יכולים גם להתייחס לשאלה אם התהליכים האלה פועלים בדרכים דומות או שונות כפי שהם פועלים במינים נפרדים.

עבור פרוטוקול זה, השתמשנו ב-IL הנהדר ב-les, אותו אנו מתחזקים באוניברסיטת VU באמסטרדם. אנו משתמשים במין הזה כדי לחקור שאלות על ברירה מינית ורבייה. אצל הרמפרודיטים, בגלל גודל הגוף הגדול יחסית שלו, הוא נגיש מאוד מבחינה ניסויית.

בנוסף, מכיוון שהוא משמש בדיסציפלינות ביולוגיות רבות ושונות כמין מודל, אנו יודעים הרבה על הביולוגיה הבסיסית של בעלי החיים האלה. שמי יומי. אני דוקטורט במחלקה למדעי הסביבה.

באוניברסיטה המלאה, אדגים את הפרוטוקולים הבאים. בואו נתחיל. כדי לבצע ביוזה אמינה, תרבית מעבדה משמשת לרוב כדי לא לכלול משתנים אורבים.

מי נחושת נמוכים נשמרים ב-20 מעלות צלזיוס, ומחזור החושך הבהיר הוא 12 על 12 שעות. באוניברסיטת VU, תרבית המעבדה נשמרת במיכלי מתקני גידול עם חילופי מים רציפים. בתנאים סטנדרטיים, חלזונות בוגרים ניזונים מחסה בחשק המיני ומופרדים לפי שכבת הגיל שלהם.

לאחר הוצאת החלזונות ממתקן הרבייה, הם ייחשבו לשימוש ולא ניתן להחזירם למיכלי הרבייה. לפני שתתחיל בהליך, תזדקק למיקרוסקופ סטריאו, צלחת דיסקציה עם סיכות, מספריים כירורגיות קטנות, מלקחיים, מזרק מלא בתמיסת מגנזיום כלוריד וכמה מגבות נייר כדי להמית את החילזון, לחדור לכף הרגל עם מחט ההזרקה בזווית של 45 מעלות, ולהפעיל בעדינות לחץ ברציפות עד שהחילזון נרגע ונשאר מורחב. הסר את מחט ההזרקה וודא שהחילזון מורדם.

לאחר מכן, קח את המלקחיים והסר בזהירות את הקליפה. בעקבות העקמומיות באמצע הדרך מגרדים בעדינות את השריר האולרי מהקליפה. לאחר מכן סובב בעדינות את החילזון מתוך הקליפה שלו בהתאם לכיוון המתפתל של הקליפה.

כעת החילזון הוסר מקליפתו וניתן להשליך את הקליפה. לאחר מכן, הניחו את החילזון על צלחת החיתוך והניחו סיכה דרך הקצה האחורי של כף הרגל. לאחר מכן הניחו סיכה דרך הראש.

שים קצת מתח על החילזון והניח את הסיכה בצלחת. עכשיו החילזון מוכן לנתיחה. הפעל את האור למיקרוסקופ הסטריאו והתאם את המיקרוסקופ.

לפני ביצוע החתך הראשון, חשוב למקם את הנקבה הנקבית. זו תהיה בהמשך נקודת התייחסות. בצע חתך ראשון ממש מתחת לקצה המעטפת וחתוך לכיוון הנקבה.

בצע סיבוב סביב נקבוביות הבונו לכיוון הראש. הקפידו רק לחתוך את העור ולא לפגוע באיברים כלשהם ולחתוך בקו ישר. לצורך מחקר זה, ננתח את בלוטת הערמונית ואת שלפוחיות הזרע עבור נוזל הזרע והזרע בהתאמה.

שימו לב כי עבור מאגרי זרע ונוזלי זרע מלאים, יש לבודד את החלזונות למשך שבוע אחד כשהם מוזנים אד ליבידו. הנתיחה זהה לזו שהוסברה קודם לכן. שלפוחיות הזרע ממוקמות בחלק האחורי של החיה.

לאחר מכן, בלוטת הערמונית תושעה במי מלח ותניח על קרח. מאוחר יותר. אלה יתערבבו עם פתרונות הטיפול.

לפני הזרקה תוך נרתיקית, הזרע שנאסף יתווסף לנוזל הזרע או לחלבונים בודדים במינון רלוונטי. עבור טכניקת הזרעה מלאכותית זו, תזדקק למזרק מיליליטר אחד המכיל את תמיסת הבדיקה התקן מחט הזרקה על המזרקים, וודא שאין בועות תקועות במזרקים להזרקה, השתמש בצינור הסיליקון בזהירות. החלק את צינור הסיליקון מעל מחט ההזרקה.

ודא שהצינור מנוקב והסר את האוויר מהצינור. לפני ההזרקה יש להרגיע את החילזון. זה יעקוב אחר אותו פרוטוקול כמו בפרק השני.

החילזון יקבל מינון של שניים עד שלושה מיליליטר של 50 מיקרו טוחנות של מגנזיום כלוריד. כאשר החילזון מורדם ונינוח כראוי, הניחו אותו בתבנית כדי לשמור אותו במצב יציב. לאחר מכן, תפוס את קצה צינור הסיליקון עם זוג מלקחיים עדינים ודחף אותו בעדינות לנקבה הנשית.

לאחר מכן הפעל בעדינות לחץ על המזרק והזריק בזהירות את הנפח שנקבע של תמיסת הבדיקה. המתן חצי דקה עד שהלחץ בצינור יתפשט לאיבר הנשי. לאחר מכן, הסר בזהירות את הצינור והכניס את החילזון למיכל הספציפי שלו.

אחרי הכל, חלזונות הוזרעו באופן מלאכותי. ניתן להעביר אותם למכלי הניסוי שלהם והבדיקה הביולוגית של הביוס יכולה להתחיל. החלזונות יתאוששו מהרדמה לאחר מספר שעות. מבחנים ביולוגיים.

לברירה מינית, ניסויים נמשכים בדרך כלל שבועיים לפני שניתן להתחיל את הביוזה. חשוב לשים את כל האנשים במיכלים משלהם ולתייג אותם. לאחר מכן, מדוד את אורך הקליפה של כל חילזון.

זהו אינדיקטור טוב לגודלם, שיכול להשפיע על ההתנהגות המינית. לאחר מכן, החלזונות מוכנסים למיכל ניסיוני. למיכל זה יש את אותם תנאים סטנדרטיים כמו מתקן הרבייה.

כפי שנדון בפרק הראשון, חשוב למקם את המיכלים בכיוון הנכון כך שהפתחים יעקבו אחר זרימת המים במיכל. במהלך הבדיקות הביולוגיות, יש להאכיל את החלזונות באופן קבוע. כמות סטנדרטית של דיסקיות חסה של חסה נחתכות בעזרת אגרוף חורים ממתכת.

מינון מספיק הוא שני דיסקים כל יומיים. עם מין המודל, lumia stauss, יש לבדוק את החלזונות לאיתור מסת ביצים כל יומיים. מסות ביצים אלה ייאספו למדידות.

לסריקת הביצים תצטרך מחשב נייד המכיל את מנהל ההתקן של הסורק, סורק שטוח, סולם מילימטר סטנדרטי, כף מסת ביצה המעבירה צלחות וצלחות זכוכית להניח על גבי המוני הביצים. ראשית, קח את הכף וגרד את המוני הביצים מקירות המיכל. גושי ביצים אטומים הוטלו זה עתה ולא ניתן להשתמש בהם.

באירוע מדידה זה, הניחו את המוני הביצים על צלחות ההעברה וחזרו על שלבים אלה עד שהצלחות מלאות. לאחר מכן, הניחו את המוני הביצים על אריחי הזכוכית באותו סדר כמו לוחות ההעברה. המוני הביצים יידבקו לאריח הזכוכית, יהפכו אותו ויניחו אותו בזהירות על הסורק השטוח ממש מתחת לסולם.

ואז הפעל לחץ על הצלחות כדי למעוך את המוני הביצים. זה אפילו עכשיו יוסיף את כל הביצים כך שהן ייסרקו באותה מידה. לפני הסריקה, מומלץ להתאים את ההגדרות לקבלת התוצאה הטובה ביותר.

לסריקה, חשוב להתאים את הרזולוציה למקסימום שלה כדי לבצע סריקת תצוגה מקדימה כדי לחתוך לאחר מכן את אזור העבודה, ולבסוף, להתאים את הבהירות והניגודיות לפני ביצוע הסריקה הסופית. לאחר הסריקה, מסת הביצים יונחו בבקבוקונים המסומנים בעצמם כדי להתבגר ולבקוע. בקבוקונים אלה מרעננים את המים שלהם כל יומיים כדי לשמור על החמצן ברמה נאותה.

ככל שיותר חלזונות בוקעים, יש להשתמש בטכניקות שונות כדי לרענן את המים. הסדר הטוב ביותר הוא לשפוך או לעלות על גדותיו בהתחלה ובהמשך לשאוב את המים החוצה עם תוכנית גיליון אלקטרוני JA תמונה פתוחה. כדי להקליט תחילה את הנתונים ואת התמונה מתוך תמונה J, השתמשו בכלי הזום כדי לנווט לקנה המידה של המילימטר.

הגדל את התצוגה והתאם את החלון כך שמילימטר אחד ימלא את המסך. צייר קו באמצעות כלי הקו בין שני קווי המחוון. לאחר מכן, נווט לניתוח ולאחר מכן הגדר קנה מידה.

בתפריט הקופץ, תראה את אורך נמדד התאם מרחק ידוע לאחד ויחידה של למילימטרים. סמן את התיבה גלובלית וסגור את החלון. כעת, לאחר שהסולם נקבע, נוכל להתקרב לכיוון מסת הביצים הראשונות עד 800%השתמש בכלי האליפטי כדי לצייר את היקף הביצים.

הקש D כדי לצייר את ההיקף. זה יעזור למנוע מדידה של אותה ביצה פעמיים. הקש M כדי למדוד את ההיקף.

חלון יופיע לאחר איסוף מספיק נתונים. ניתן לשמור את חלון הנתונים כקובץ אקסל. ניתן גם להעתיק נתונים ישירות לגליון עבודה.

אם המדידות המועדפות אינן מופיעות בחלון המוקפץ, ניתן לכוונן ולנתח זאת. מדידות מוגדרות, ספירת הביצים הבודדות לכל מסת ביצים יכולה להיעשות גם בעזרת תוסף מונה התאים. נווט אל תוספים.

לאחר מכן נתח ובחר מונה תאים. חלון מונה התאים יופיע. סמן את התיבה שמור את המקור ולחץ על אתחול.

חלון מונה חדש הופיע. בחר בכלי הצלב כאן מסרגל הכלים. לאחר מכן בחר סוג מונה בתפריט מונה התאים.

על ידי לחיצה על חלון מונה התאים, הביצים ייספרו. ניתן למצוא את הספירה הכוללת ליד סוג המונה בתפריט מונה התאים. ניתן לספור מסות ביצים מרובות עם מונה התאים.

ניתן להוסיף ולהסיר סוגי מונים אם רוצים, יש להעתיק את המספר הזה באופן ידני לגיליון אלקטרוני או לפרסם תוצאות, וחלון יופיע. מציג את כל התוצאות. בשיטה זו, הראינו כיצד לאסוף חלבוני נוזל זרע, כיצד לבדוק אותם בצורה משמעותית.

הראינו זאת באמצעות תמצית בלוטת הערמונית השלמה, אך כמובן שניתן לבדוק את חלבוני נוזל הזרע הבודדים באותו אופן. בנוסף, ניתן להסתכל על תהליכים אחרים והטלת ביצים. תוצאות הניסויים שלנו הראו שיש חלבון נוזל זרע יחיד הנקרא אוויוס סטטין המתווך הפחתה בנתיב הביצים.

בנוסף, אנו מוצאים כי העברת נוזל הזרע מגדילה את הגודל או העמודים. סטטינים הם חלבון נוזל הזרע הראשון המאופיין במלואו בהרמפרודיטה בו זמנית. בעוד שהשפעות של נוזל הזרע דווחו לעתים קרובות במינים עם מינים נפרדים, התוצאות שלנו מדגישות כי נוזלי זרע חשובים באותה מידה אצל הרמפרודיטים.