Name: השפעה של זכר אבזר בלוטת מוצרים בהטלת ביצים ברכיכות חלזון (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-22T15:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 19 s
Description: חקור את השפעת חלבוני הנוזל הזרעי על התנהגות ההטלה בחלזון Lymnaea stagnalis. פרוטוקול זה מדגים שיטה לאינסמינציה מלאכותית וביואסהי לבחינת מנגנוני ברירה מינית בהרמפרודיטים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

אנו מודים למר Helmus לקריינות, CM Popelier, ס &#39;Ypenburg וג ווסק לקבלת סיוע טכני. מחקר זה נתמך כלכלית על ידי הארגון ההולנדי למחקר מדעי (NWO), רויאל הולנד האקדמיה לאמנויות ולמדעים (KNAW) והארגון ליפן סטודנטים השירותים (JASSO). פרסום זו נתמכה על ידי מענק פתוח פתוח של NWO לJMK.

1. מתקן רבייה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשיג דגימות בוגרות של stagnalis Lymnaea (ל) מתרבות מעבדה כמו זו באוניברסיטת VU. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על המים נמוך נחושת ב20 מעלות צלזיוס בשני מתקן הרבייה (molluscarium) וטנקים ניסיוניים, שבו יש תחלופת מים רציפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את מחזור האור / חושך בשעות 12: שעות 12. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרבייה, להאכיל כרצונך מודעת חסה נקיה מחומרי הדברת חלזונות הבוגרים, להאכיל את בני הנוער הצעירים עם TetraPhyll פתיתים (מזון לדגים). שמור על חלזונות במיכלים נפרדים על פי גילם, החל מהמוני ביצה שמונחים בתוך מסגרת זמן 24 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שחלזונות יוסרו מן טנקי הרבייה הם לא חזרו, כדי למנוע תופעות של שנשמר בתנאים מעט שונים, כמו גם כדי למנוע pseudoreplication. </li></ol> 2. Dissection <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבודד את החלזונות במשך שבוע 1, ולהאכיל אותם כרצונך מודעה, על מנת להבטיח thaלא צריכים שהם זרע מלא וחנויות נוזל זרע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן מיקרוסקופ סטריאו, צלחת לנתיחה עם סיכות, מספריים כירורגיות קטנים, מלקחיים גסים ועדינים, מזרק מיליליטר 10 מלאים עם פתרון 50 מ&quot;מ MgCl 2, מחטי הזרקה (0.3 מ&quot;מ x 13 מ&quot;מ) וכמה מגבות נייר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים חילזון על ידי הזרקת MgCl 2 פתרון (בדרך כלל 3 מיליליטר או יותר לחלזונות בוגרים באורך קונכייה של 31.6 ± 2.1 מ&quot;מ ומשקל רטוב של 2.89 ± 0.55 ז). לחדור את הרגל עם מחט הזריקה בזווית של ° 45 ולהזריק בעדינות על ידי הפעלת לחץ ברציפות עד החילזון מרגיע ונשאר מורחב (תוך שניות). הסר את מחט הזריקה ולבדוק אם החילזון הוא מורדמים (לדוגמא, על ידי בדיקה האם רפלקס נסיגת זרוע חסר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוציא בזהירות את הקליפה הבאה העקמומיות שלה על ידי שימוש במלקחיים גסים. באמצע הדרך, בעדינות לנתק את השרירים columellar מהמעטפת על ידי גירוד עם המלקחיים. בעדינות לא לעקםהוא החילזון מתוך הקונכייה שלו, הבא לכיוון המתפתל של הפגז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את השבלול על הצלחת לנתיחה ולהצמיד את הקצה האחורי של כף הרגל. ואז, במקום סיכה דרך הראש ולשים קצת מתח על החילזון כדי להקל על נתיחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתרגום הנשי gonopore, אשר מאוחר יותר על להיות נקודת התייחסות לנתיחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות המספריים כירורגיות ומלקחיים בסדר, להפיק את החתך הראשון, בדיוק מתחת לקצה של המעטפת ולחתוך לכיוון הנשי gonopore. כאשר אחד מהלהבים &#39;המספריים נדחף מתחת לקיר הגוף, להרים אותו מעט כדי להבטיח שרק קיר הגוף, ואף אחד מהאיברים הפנימיים, הוא לחתוך. המשך חיתוך מעל gonopore לכיוון הראש ולחתוך בקו ישר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למקם את בלוטת הערמונית (אחורי) ושלפוחית ​​זרע (קדמית). לנתח אלה בזהירות ולשמור אותם על קרח. השתמש בם כדי להפוך את פתרונות בדיקה המכילים נוזל ו / או זרע זרע. השתמש סאל Lymnaea הפיזיולוגיine (5.83 מילימול / ליטר CaCl 2 · 2H 2 O, 3.76 מילימול / ליטר MgCl 2 · 6 שעות 2 O, 42.69 מילימול / ליטר NaCl, 37.53 מילימול / ליטר KCl) כמדיום מוביל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף את נוזל הזרע שנמצא בלומן של בלוטת הערמונית, כמו גם את הזרע משלפוחית ​​הזרע. בהמשך לכך, להשעות את שניהם במלח בבקבוקונים נפרדים בעדינות על ידי המבטא את תוכנם והסרת רקמות האיבר עם מלקחיים. שמור על קרח ולהשתמש באותו היום. מאוחר יותר, לערבב השעיות אלה כדי ליצור פתרונות טיפול השונים. </li></ol> 3. הזרקת intravaginal <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני שמתחיל הליך ההזרקה intravaginal, להכין פגז-תבנית סיליקון (עשה כדי להתאים את קצה הקליפה), מזרקים 1 מ&quot;מ, 10-12 צינורות סיליקון סנטימטר בקוטר של 1 מ&quot;מ, הקהו מחטי הזרקה (0.3 מ&quot;מ x 13 מ&quot;מ ), מלקחיים גסים ואותו מזרק מיליליטר 10 מלא מצוידים במחט הזרקה חדה פתרון 2 מ&quot;מ MgCl 50. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף את הזרע, צריך להוסיף לנוזל הזרע (או חלבוני נוזל זרע בודדים) בכמה טיפולים; מינון רלוונטי מבחינה ביולוגית שווה 1/3 של בלוטת ערמונית ושלפוחית ​​זרע לכל זריקה. הערה: בסעיף תוצאות הנציג (איור 1) התוצאות של ניסוי עם שלושה טיפולים שונים מוצגות: בקרה (מדיום מוביל, כלומר, מי מלח), Ovipostatin (אחד מחלבוני נוזל זרע המזוהים) לבד וOvipostatin מלוות עם זרע. בנוסף, כדי להעריך את המינון הרלוונטי מבחינה ביולוגית במינים אחרים, לקבוע את ההבדל במשקל של בלוטת הערמונית של אנשים שהזדווגו ואנשים שנותרו מבודד מבחינה מינית 16 לאחרונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 1 מיליליטר מזרקים עבור כל אחד מפתרונות הבדיקה מוכנים. ממלא כל מזרק עם פתרון אחד ולהבטיח כי אין בועות אוויר בתוכו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תתאים מחט זריקה קהה בכל מזרק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזרקה להשתמש 1צינור בקוטר מ&quot;מ סיליקון באורך מינימאלי של 10 סנטימטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחליק בזהירות את צינור סיליקון מעל מחט הזריקה, כדי לוודא שלא לנקב את הצינור, ולהסיר את האוויר מהצינור בעדינות על ידי יישום הלחץ על המזרק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטשטש חילזון על ידי ביצוע אותו הפרוטוקול כמו בנקודה 2.3. הפעם לוודא שלא להזרים יותר מ 2-3 מיליליטר של 50 מ&quot;מ MgCl 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את החילזון בקליפת עובש כדי לשמור אותו במצב יציב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאתר את נקבת gonopore, שנראה בבירור כנקודה לבנה בצד ימין של בעל חיים, קדמי לזרוע ימין וgonopore זכר (מיקום זה חל גם על מינים אחרים של חלזונות מים מתוקים). לוודא שיש גישה בלא הפרעה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במלקחיים כדי להחזיק את קצה צינורית סיליקון ועדינות להכניס כ 2-4 מ&quot;מ של צינור סיליקון לתוך נקבת gonopore. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות להחיל לחץ למזרק ולהזריק 0.03 מיליליטר של פתרון המבחן. חכה חצי דק &#39;אוטה כדי לאפשר את הלחץ בצינור כדי להפיץ לנקבת דרכי לפני הסרת הצינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחזיר את החילזון שטופל למכל הבידוד שלה, שבו ניתן לנטר אותו, ולאפשר לו להתאושש מהרדמה בטנק הניסיוני. </li></ol> 4. מבדק <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל תווית חילזון לזיהוי ומדידת אורך שריונו. האחרון הוא אינדיקטור טוב לגודל, שהוא רלוונטי כאשר כימות תפוקת רבייה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור על כל חילזון מבודד במכל מיליליטר 460 כי הוא מחורר כדי לאפשר תחלופת מים בתוך מיכל הניסיוני. חשוב למקם את כל המכולות בכיוון הנכון, עם הנקבים בכיוון זרימת המים, כדי לאפשר תחלופת מים יעילים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך המבדק, להאכיל את החלזונות באופן קבוע עם כמות סטנדרטית של חסה. השתמש אגרופן עגול, מתכת לחתוך חסה. בפרוטוקול זה דיסקי חסה של 19.6 סנטימטר 2 משמשים, המדמה אתהר הם יכולים מקסימאלי לאכול ביום אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף המוני ביצה בצד החלק של מרית ולגרד את מסת הביצה מהקיר מיכל. השתמש בצד הכף לאיסוף המוני הביצה. הערה: המוני ביצה אטומים שזה עתה הניח לא יכולים לשמש לסריקה (שהם הופכים שקופים בתוך כמה שעות לאחר הנחה). למיני מודל בפרוטוקול זה, stagnalis Lymnaea, לבדוק להמוני ביצה בכל יום, שכן הם מייצרים 2-3 המוני ביצה בשבוע. זה יכול להיות שונה במינים אחרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סרוק את המוני ביצה שנאספו באופן דיגיטלי, באמצעות מחשב (מחשב נייד) המכיל את מנהל ההתקן של הסורק, סורק למיטה שטוח, בקנה מידה מילימטר סטנדרטי, מרית, העברת צלחות ואריחי זכוכית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים כל מסת ביצה על צלחות העברה וחזור עד לצלחות מלאות. לאחר מכן, מורחים את המוני ביצה יבשים על מגבת נייר ולהעביר אותם על גבי אריחי הזכוכית באותו סדר כמו בצלחות העברה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל כל אריח במהופך (המוני ביצה ידבקו אריחי הזכוכית) והניחו אותו בזהירות ובסורק, ממש מתחת לקנה מידת המילימטר. להחיל קצת בלחץ כדי לשטח את המוני ביצה, שתפיץ את הביצים באופן שווה, כך שהם כולם נראים לעין באותו מישור הפוקוס. התאם את האריחים עם כמות סטנדרטית של קלטת סביב שני קצוות כדי להבטיח שכל הביצים שטוחות באותה מידה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם את ההגדרות של הסורק. חשוב להתאים את הרזולוציה למקסימום שלה, לבצע סריקה מקדימה, לחתוך את אזור העבודה, ולהתאים את הבהירות והניגודיות. סרוק את המוני ביצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים כל מסת ביצה בבקבוקון שלו שכותרתו 20 מיליליטר הזכוכית להמשך פיתוח ובקיעה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רענן המים בבקיעת בקבוקונים בכל יום אחר כדי לשמור אותו מחומצן כראוי. לעשות את זה על פי מספרי גוזל וגודל לפי הסדר הבא: decanting / לשפוך את (אין גוזלים), עולה על גדותיו (תחילת בקיעה), וחילוץ מתוך המים עם טפטפת (גוזלים רבים). </li></ol> &lt;כיתת p = &quot;jove_title&quot;&gt; 5. מדידה וספירה ביצים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התקן את ImageJ באופן חופשי, זמין תוכנת ניתוח תמונה (NIH, ארה&quot;ב) ותוסף דלפק תא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ImageJ הפתוח, כמו גם תכנית גיליון אלקטרוני כדי להעביר את הנתונים ל. ואז לפתוח תמונה סרוקה של המוני ביצה בImageJ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את קנה המידה על ידי שימוש בכלי הזום כדי לנווט לקנה מידת המילימטר. קרב ולהתאים את החלון ל1 מ&quot;מ כדי למלא את המסך. לצייר קו באמצעות כלי השורה בין שני הקווים המצביעים על 1 מ&quot;מ. נווט לניתוח, וקבע בקנה מידה. בתפריט המוקפץ אפשרות האורך המדודה הופכת לגלויה, להתאים את המרחק ידוע 1 ויחידת האורך למ&quot;מ. סמן את התיבה הגלובלית, ולסגור את החלון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את המדידות המועדפות (אורך, רוחב, היקף) על ידי ניווט לניתוח, וקבע מדידות על ידי בחירת אזור והקוטר של Feret (אורך ורוחב). לחץ על אישור כדי לאשר ולהמשיך עם דמותו מנתח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למדוד את הביצים, zoאום בביצה של מסת הביצה הראשונה שצריכה להיות מדודים. הזום של 800% מומלץ. לאחר מכן, באמצעות הכלי הסגלגל לצייר אליפסה בדיוק סביב הביצה, לחץ על CTRL + D כדי לצייר את ההיקף על התמונה (כדי למנוע מדידה אותה הביצה פעמיים). לאחר מכן לחץ על Ctrl + M כדי להקליט את המדד למאפיינים של סגלגל (אורך, רוחב, היקף); מסך מוקפץ נפתח בו מוצגות המדידות. הערה: השימוש בכלי אליפטי למדוד ביצים אינו חל על כל המינים. עבור מינים עם ביצים בצורה לא אחיד, השתמש בבחירות חופשי במקום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למדוד כמו ביצים רבות במידת צורך ולאחר מכן שמור את האמצעים כ. גיליון xls. לחלופין, להעתיק את הנתונים ישירות לתוך גיליון עבודה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהמשך לכך לספור את הביצים בתוך מסת ביצים, על ידי שימוש בחלון הדלפק ולשים את הספירה באופן ידני לגיליון העבודה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחלופין, לספור את הביצים בודדות למסת ביצה בעזרת דלפק התוספת התא. לשם כך, לנווט לתוספות,לאחר מכן, לנתח ובחר דלפק תא. חלון דלפק התא יופיע, סמנו את &quot;לשמור על מקורית&quot; תיבה ולחץ על &#39;אתחול&#39;. חלון דלפק חדש מופיע, בחר בכלי הכוונת מסרגל הכלים ולבחור סוג דלפק בתפריט דלפק תא. לספור את הביצים על ידי לחיצה על הביצים בודדות בחלון דלפק תא. שים לב למספר הכולל ליד סוג הדלפק בתפריט דלפק תא. העתק מספר זה באופן ידני לגיליון אלקטרוני או לקבל את התוצאות על ידי לחיצה על תוצאות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רוזן המוני ביצה מרובים בתוך אירוע נספר אחד על ידי הוספת סוגי דלפק, במידת צורך. </li></ol>

<ol><li>Mann, T., Lutwak-Mann, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMann%2C+T+%22Male+reproductive+function+and+semen%22">Male reproductive function and semen</a>. , Springer-Verlag. (1981).</li>
<li>Arnqvist, G., Rowe, L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aArnqvist%2C+G+%22Sexual+Conflict%22">Sexual Conflict</a>. , Princeton University Press. Princeton, New Jersey. (2005).</li>
<li>Birkhead, T. R., Hosken, D. J., Pitnick, S. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBirkhead%2C+TR+%22Sperm+Biology%2C+an+Evolutionary+Approach%22">Sperm Biology, an Evolutionary Approach</a>. , Elsevier. (2008).</li>
<li>Koene, J. M., Ter Maat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allohormones%22%3A+A+class+of+bioactive+substances+favoured+by+sexual+selection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Physiology+A%22%5BJournal%5D)">Allohormones": A class of bioactive substances favoured by sexual selection.</a> Journal of Comparative Physiology A. 187 (5), 323-326 (2001).</li>
<li>Parker, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sperm+competition+and+its+evolutionary+consequences+in+the+insects%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Sperm competition and its evolutionary consequences in the insects.</a> Biological Reviews. 45 (4), 525-567 (1970).</li>
<li>Perry, J. C., Sirot, L., Wigby, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+seminal+symphony%3A+how+to+compose+an+ejaculate%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Ecology+%26+Evolution%22%5BJournal%5D)">The seminal symphony: how to compose an ejaculate.</a> Trends in Ecology & Evolution. 28 (7), 414-422 (2013).</li>
<li>Baldini, F., Gabrieli, P., Rogers, D. W., Catteruccia, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+and+composition+of+male+accessory+gland+secretions+in+Anopheles+gambiae%3A+a+comparison+with+other+insect+vectors+of+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens+and+Global+Health%22%5BJournal%5D)">Function and composition of male accessory gland secretions in Anopheles gambiae: a comparison with other insect vectors of infectious diseases.</a> Pathogens and Global Health. 106 (2), 82-93 (2012).</li>
<li>Xu, J., Baulding, J., Palli, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomics+of+Tribolium+castaneum+seminal+fluid+proteins%3A+identification+of+an+angiotensin-converting+enzyme+as+a+key+player+in+regulation+of+reproduction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Proteomics of Tribolium castaneum seminal fluid proteins: identification of an angiotensin-converting enzyme as a key player in regulation of reproduction.</a> Journal of Proteomics. 78, 83-93 (2013).</li>
<li>Jarne, P., Auld, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animals+mix+it+up+too%3A+The+distribution+of+self-fertilization+among+hermaphroditic+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Animals mix it up too: The distribution of self-fertilization among hermaphroditic animals.</a> Evolution. 60 (9), 1816-1824 (2006).</li>
<li>Nakadera, Y., Koene, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproductive+strategies+in+hermaphroditic+gastropods%3A+conceptual+and+empirical+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+Zoology%22%5BJournal%5D)">Reproductive strategies in hermaphroditic gastropods: conceptual and empirical approaches.</a> Canadian Journal of Zoology. 91 (6), 367-381 (2013).</li>
<li>Chase, R., Blanchard, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+snail%E2%80%99s+love-dart+delivers+mucus+to+increase+paternity%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Royal+Society+of+London+B%22%5BJournal%5D)">The snail’s love-dart delivers mucus to increase paternity.</a> Proceedings of the Royal Society of London B. 273 (1593), 1471-1475 (2006).</li>
<li>Koene, J. M., Chase, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+reproductive+system+of+the+snail+Helix+aspersa+caused+by+mucus+from+the+love+dart%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Changes in the reproductive system of the snail Helix aspersa caused by mucus from the love dart.</a> Journal of Experimental Biology. 201 (15), 2313-2319 (1998).</li>
<li>Van Duivenboden, Y. A., Pieneman, A. W., Ter Maat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+mating+suppresses+fecundity+in+the+hermaphrodite+freshwater+snail+Lymnaea+stagnalis%3A+a+laboratory+study%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Multiple mating suppresses fecundity in the hermaphrodite freshwater snail Lymnaea stagnalis: a laboratory study.</a> Animal Behaviour. 33, 1184-1191 (1985).</li>
<li>Koene, J. M., Brouwer, A., Hoffer, J. N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+egg+laying+caused+by+a+male+accessory+gland+product+opens+the+possibility+for+sexual+conflict+in+a+simultaneous+hermaphrodite%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Biology%22%5BJournal%5D)">Reduced egg laying caused by a male accessory gland product opens the possibility for sexual conflict in a simultaneous hermaphrodite.</a> Animal Biology. 59 (1), 435-448 (2009).</li>
<li>Hoffer, J. N. A., Schwegler, D., Ellers, J., Koene, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mating+rate+influences+female+reproductive+investment+in+a+simultaneous+hermaphrodite%2C+Lymnaea+stagnalis%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Mating rate influences female reproductive investment in a simultaneous hermaphrodite, Lymnaea stagnalis.</a> Animal Behaviour. 84 (3), 523-529 (2012).</li>
<li>Koene, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Male+accessory+gland+protein+reduces+egg+laying+in+a+simultaneous+hermaphrodite%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Male accessory gland protein reduces egg laying in a simultaneous hermaphrodite.</a> PLoS ONE. (5), (2010).</li>
<li>Nakadera, Y., Swart, E. M., Hoffer, J. N. A., Den Boon, O., Ellers, J., Koene, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Receipt+of+seminal+fluid+proteins+causes+reduction+of+male+investment+in+a+simultaneous+hermaphrodite%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Receipt of seminal fluid proteins causes reduction of male investment in a simultaneous hermaphrodite.</a> Current Biology. 24, 1-4 (2014).</li>
</ol>

יש המחברים אין לחשוף.

הפרוטוקול המובא מראה כיצד לאסוף נוזל זרע ואיך לבדוק את זה בצורה משמעותית מבחינה ביולוגית. למרות שהליך זה כאן מוצג באמצעות תמצית בלוטת הערמונית, ההשפעה של חלבון נוזל זרע מטוהר יחיד יכולה להיות גם נבדקה באותו האופן. כמובן, בבדיקות כגון זה תמיד חיוני לכלול בקרות נאותות (טיפולי דמה) כדי להבטיח שההליך ו / או בינוני הספק אינו משפיע על הפרמטרים בשאלות 14,16. באמצעות שיטה זו, שהיא כבר הראתה כי קיימת חלבון יחיד נוזל זרע, כלומר Ovipostatin, שמתווך בירידה בהטלת ביצים 14,16. חלבון זה, המיוצר בבלוטת הערמונית והועבר במהלך הזדווגות יחד עם תאי הזרע, מייצג את המרכיב הראשון המאופיין במלואו נוזל הזרע באנדרוגינוס בו זמנית ואין, עד כה, לא הראה שום דמיון לחלבונים ידועים. הממצא שOvipostaפח מפחית ייצור המוני ביצה בנמען מאשש עבודה קודמת מצביע על כך שחומרים בזרע עשויים להשפיע על הטלת ביצי 13-15. על ידי העברת סכומים רלוונטיים מבחינה ביולוגית (ראה 3.2 16), אפשר באופן משכנע להוכיח כי מדובר בחלבון נוזל זרע, ולא הנוכחות של תאי זרע עצמם, שמתווך את הירידה שנצפתה בהטלת ביצים (איור 1). בהתחשב בכך שקבלה חוזרת של נוזל זרע דרך הזדווגויות טבעיות מגדילה את ההשקעה לביצה 15, עכשיו זה הופך להיות רלוונטי מאוד לכמת פרמטרים אחרים של הטלת ביצים. הפרוטוקול הציג החברה מספק את השיטות הדרושות כדי לעשות זאת. למרות שלא נמצאה השפעה של Ovipostatin על בקיעת הצלחה של הביצים שהונחו על ידי הנמען 16, ייתכנו חלבוני נוזל זרע אחרים שיפעלו בתיאום עם חלבון זה. לפיכך, פרמטרים שצריכים לכמת בהקשר זה - בסמוך לנחת מספרי תדירות וביצה - כוללים גודל ביצה, hatcזמן הינג, פיתוח גוזל וגודל גוזל. בנוסף, אפשר להסתכל על השפעות על תהליכים אחרים נשיים מאשר הנחת ביצה, כגון אחסון זרע ושימוש, כמו גם הקצאת משאבי רבייה כלפי התפקוד הנשי וגברי 14,17. ברור שהשיטה שהוצגה היא סייע בטיפול בנושאי מעקב אלה, הן בLymnaea stagnalis ובחלזונות מים מתוקים אחרים. לסיכום, ניסויים באמצעות הצגת פרוטוקול זה שהעביר את חלבוני נוזל זרע משפיעים על ביצועי רבייה הנשיים של הנמען בהרמפרודיטים בו זמנית אלה. בהתחשב בכך שמספר מחקרים התייחסו הזה, זה עשוי להיות הרבה יותר נפוץ באופן פנימי דישון הרמפרודיטים מאשר כיום משתקף בספרות המדעית. במיוחד כאשר אחד מבין שבחירת בן זוג לפני הזדווגות ותחרות הזרע הוכחו לשחק תפקיד חשוב בהרמפרודיטים אלה 14, שhighlights הפוטנציאל של חלבוני בלוטת אבזר גבריים כגון להיבחר מיני במערכת זו. לבסוף, מחקר זה מסייע לתמיכה ברעיון הפיתוח שחלבוני נוזל זרע הם בעלי חשיבות שווה להרמפרודיטים בו זמנית כפי שהם למיני דחף מיניים נפרדים.

עם ההעברה, תאי זרע הם בדרך כלל מלווים בנוזל זרע מיוצר על ידי בלוטות אבזר מין זכר. בעוד כמה רכיבי שפיכה לשחק תפקידים בזרע מזין והפעלת 1, אחרים להשפיע על פיזיולוגיה נשית כדי להגדיל את ההצלחה של הפריה של תורם הזרע 2-4. השפעות אלה נבחרו במיוחד עבור, דרך ברירה מינית, כאשר מינים הוא מופקרים ביותר ויש לו אחסון זרע יעיל ועיכול זרע. בתנאים אלה, תורמי זרע להתחרות בכבדות להפריה של ביצים 5. אמנם יש ראיות בשפע מתאמים לחשיבות של חומרי נוזל זרע להצלחת הפריה ממין זכר, עדות ישירה היא יותר נדירה וכמה מחקרים התעמקו בפרטים של השינוי ו / או חומרים מעורבים 6 הפיסיולוגיים. במינים עם מינים נפרדים (כלומר, זכרים ונקבות; gonochorists) יש speci מודל חקר היטב כמהes כשזה מגיע להרכב נוזל זרע ואת ההשפעות שלהם. דוגמאות כוללות את זבוב הפירות, דרוזופילה melanogaster 6, יתושים המלריה, אנופלס 7 gambiae, וחיפושית הקמח האדומה, castaneum Tribolium 8. מחקרי נוזל זרע כאלה הם נדירים הרבה יותר כשמדובר במינים שהם בו זמנית hermaphroditic (כלומר, אנשים הם מבחינה פונקציונלית זכר ונקבה באותו הזמן), למרות שהמצב של רבייה זו הוא נפוץ בכל רחבי הממלכה 9 בעלי החיים. דוגמא hermaphroditic הבולטת ביותר של העברת חומר בלוטת אבזר היא כנראה הירי של מה שנקרא אהבה בחצי שבלולי היבשה 2,10, שבו החומר מועבר על ידי תורם הזרע באמצעות הזרקת מזרק 11,12, כלומר, לא יחד עם תאי הזרע. אבל יש הרבה הרמפרודיטים בו זמנית, כי העברת מוצרי בלוטת אבזר גבריים יחד עם הזרע שלהם,כגון מיני המודל משמשים כאן, הברכה הגדולה חילזון Lymnaea stagnalis. המחקרים קודמים כבר הוכיחו כי קבלת נוזל הזרע משפיעה על תפוקת הרבייה הנשית של מין זה 13-15, וכמה מחלבוני נוזל זרע המעורבים זוהו 16,17. המטרה הכללית של פרוטוקול זה, שהוא שלוחה של השיטות שדווחו בKoene אח&#39; 16, היא לבדוק את ההשפעות של חלבוני נוזל זרע על פרמטרים שונים של הטלת ביצים ברכיכות חלזון. המטרה זו מושגת על ידי נתיחה של בלוטת הערמונית (כלומר, בלוטת האבזר הגברית ייצור נוזל הזרע) של חלזונות תורם מבודדים מבחינה מינית מתרבות מעבדה סטנדרטית. שנית, הזרע של התורם נאסף משלפוחית ​​הזרע ופתרונות טיפול שונים עשויים. בהמשך לכך, חלזונות מבחן הם מורדמים וintravaginally הוזרקו פתרון מבחן (לדוגמא,תמצית בלוטת ערמונית לבד, תמצית בלוטת ערמונית עם זרע, זרע לבד, בינוני נושאת לבדה). אז חלזונות מבחן אלה במעקב במשך הימים הבאים לשבועות, בתנאים סטנדרטיים, להקליט הטלת ביצים. המוני ביצה נאספים, באופן דיגיטלי שנסרקו לספירה ומדידת פרמטרים שונים, ולאחר מכן לשים בצלוחיות אישיות לבקיעה. לאחר כשבועיים, הגוזלים נספרים ונסרקו באופן דיגיטלי. כל הסריקות, שבשני המוני ביצה וגוזלים, לאחר מכן נותחו באמצעות חבילת תוכנת ניתוח תמונה באופן חופשי, זמינה. לפרוטוקול זה משמש זן המעבדה של החילזון הגדול בריכה, stagnalis Lymnaea,, שהוא גידל באוניברסיטת VU באמסטרדם. מין זה משמש כמערכת מודל לחקר שאלות על בחירה ורבייה בהרמפרודיטים מיניות. הגודל הגדול יחסית של בעלי החיים עושה את זה באופן ניסיוני מאוד נגיש. בנוסף לכך, משום שהוא משמש כמיני מודל ברבים בדיסציפלינות iological אנחנו כבר יודעים הרבה על הביולוגיה הבסיסית של בעלי חיים אלה. שיטה זו תעזור לשאלות מחקר על תהליכים של ברירה מינית שמתווכים באמצעות חלבוני נוזל זרע באופן כללי. בנוסף, מכיוון שמדובר בהרמפרודיטים בו זמנית, זה אפשרי כדי לטפל באם חלבונים כגון לפעול בדרכים דומות ו / או שונות כפי שהם עושים במינים שבם המינים מופרדים 16,17.

<table><tbody><tr><td>פתיתי מזון דגים</td><td>TetraPhyll</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ</td><td></td><td></td><td></td>סטריאו</tr><tr><td>מספריים כירורגיים קטנים</td><td>WPI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים גסים ועדינים</td><td>WPI</td> מזרק <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>WPI 10 מ"ל</td></tr><tr><td>מחטי הזרקה (0.3 מ"מ x 13 מ"מ)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>50 מ"מ MgCl2 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>5.83 מילימול/ליטר CaCl2&#183; 2H2O</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3.76 mmol/L MgCl2&#183; 6H2O</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>42.69 mmol/L NaCl</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>37.53 mmol/L KCl</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>שני רכיבים סיליקון</td><td></td> סילגארד <td></td><td></td></tr><tr><td>1 מ"מ</td> צינורות סיליקון (קוטר 1 מ"מ) מחטי הזרקה קהות (0.3 מ"מ x 13 מ"מ)<td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>שפופרות</td><td>Eppendorff</td><td></td><td></td></tr><tr>מיכלים <td></td><td></td><td></td><td>מחוררים 460 מ"ל</td></tr><tr><td>מנקב עלי מתכת (19.6 ס"מ2)</td><td></td><td></td><td></td></tr>מחשב <tr><td></td> מרית/כפית <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>(מחשב נייד)</td> סורק שטוח בקנה מידה מילימטרי <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>העברת צלחות אריחי</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td>זכוכית</tr><tr><td>בקבוקוני</td><td></td><td></td><td></td> זכוכית 20 מ"ל</tr></tbody></table>

השפעה של זכר אבזר בלוטת מוצרים בהטלת ביצים ברכיכות חלזון

Effect of Male Accessory Gland Products on Egg Laying in Gastropod Molluscs

באופן פנימי דישון בעלי חיים, נוזל זרע הוא הוסיף בדרך כלל לתאי הזרע, יחד ויוצרים את הזרע או שפיכה. חוץ מזרע מזין והפעלה, הרכיבים בנוזל הזרע יכולים גם להשפיע על פיזיולוגיה נשית כדי להגדיל את ההצלחה הפריה של תורם הזרע. בעוד שמחקרים רבים דיווחו על תופעות כאלה במין עם מינים נפרדים, מעט מחקרים עסקו זה בבעלי החיים בו זמנית hermaphroditic. פרוטוקול וידאו זה מציג שיטה ללמוד השפעות של נוזל זרע בחלזונות, באמצעות חילזון בו זמנית hermaphroditic מים מתוקים, stagnalis Lymnaea חילזון הברכה הגדול, כמו אורגניזם מודל. בעוד ההליך מוצג באמצעות תמציות בלוטת ערמונית שלמות, רכיבים בודדים (כלומר, חלבונים, פפטידים, ותרכובות אחרות) של נוזל הזרע, ניתן לבדוק באותו אופן. השפעות של קבלת רכיבי שפיכה בנחת ביצה ניתן לכמת במונחים של תדירות של הטלת ביצים והערכות עדינות יותר של ביצועי רבייה נשיים כגון מספרי ביצה בתוך כל המוני ביצה. תוצאות מראות כי חלבוני נוזל זרע משפיעים על פלט רבייה נשי באנדרוגינוס בו זמנית זו, המדגיש את החשיבות שלהם לברירה מינית.

איור 1 מציג את האחוז של בעלי חיים להטיל ביצים לאחר הזרקת intravaginal של או חומר השליטה (מי מלח), Ovipostatin, או Ovipostatin מלווה עם זרע. N = 15 עבור כל טיפול; לראות Koene אח&#39; 16 לפרטים ונתונים סטטיסטיים (מקור: איור 3 מKoene אח&#39; 2010, PLoS ONE.).. <img alt="איור 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51698/51698fig1highres.jpg" width="500" /> איור 1. השפעת Ovipostatin בייצור המוני ביצה של Lymnaea stagnalis. הגרף מראה את האחוז של בעלי חיים להטיל ביצים לאחר הזרקת intravaginal של או חומר השליטה (מי מלח), Ovipostatin, או Ovipostatin מלווה עם זרע. N = 15 עבור כל טיפול; לראות Koene et al. פרטים 2010 ונתונים סטטיסטיים. להדפיס מחדש באישור Koene אח&#39; 2010 PLoS ONE 5:. E10117.

פרוטוקול וידאו זה מדגים שיטה לחקר השפעות נוזל הזרע בגסטרופודים, באמצעות חילזון המים המתוקים ההרמפרודיטי Lymnaea stagnalis.

In internally fertilizing animals, seminal fluid is usually added to the spermatozoa, together forming the semen or ejaculate. Besides nourishing and ...

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא לאפיין את השפעותיהם של חלבוני נוזל הזרע על התנהגות הטלת הביצים של מין הרמאפרודיט סימולטני. דבר זה מושג תחילה על ידי בידוד פרטים מתרבית מעבדה סטנדרטית, ולאחר מכן על ידי ניתוח של האיברים המטרה. בשלב השני, נאספים התאי זרע ומוכן תמיסת טיפול.לאחר מכן, ההליצות עוברות הפריה מלאכותית. לאחר מכן הן מוכנסות לבדיקה ביולוגית (bio assay). בתנאים סטנדרטיים, מסות הביצים נאספות, נסרקות ומונחות ב-BS אישיים להבקה.לאחר מספר שבועות, סופרים וסורקים את השבבים, ולאחר מכן ניתן לנתח את כל התמונות באמצעות תוכנה חינמית. פרוטוקול זה יכול לסייע במתן מענה לשאלות בנוגע לתהליכים של ברירה מינית המתווכים על ידי חלבוני נוזל הזרע. מכיוון שבמקרה זה אנו בוחנים הרמאפרודיטים סימולטניים, נוכל לבחון גם אם תהליכים אלו פועלים בדרכים דומות או שונות מאשר במינים בעלי מין נפרד.עבור פרוטוקול זה, השתמשנו ב-great IL in les, אותו אנו מחזיקים באוניברסיטת VU באמסטרדם. אנו משתמשים במין זה כדי לחקור שאלות הנוגעות לברירה מינית ולרבייה. בקרב הרמפרודיטים, בשל גודל גופו הגדול יחסית, הוא נגיש מאוד מבחינה ניסויית.בנוסף, מכיוון שהיא משמשת כמין מודל בדיסציפלינות ביולוגיות רבות ושונות, אנו יודעים רבות על הביולוגיה הבסיסית של בעלי חיים אלו. שמי יומי, ואני דוקטורנטית במחלקה למדעי האקולוגיה.במסגרת האוניברסיטה, אני אדגים את הפרוטוקולים הבאים. בואו נתחיל. כדי לבצע ביסא (biosa) מהימנה, נהוג להשתמש בתרבית מעבדה כדי לשלול משתנים מתערבים.מים דלי נחושת נשמרים בטמפרטורה של 20 °C, ומחזור האור והחושך הוא 12 שעות על 12 שעות. באוניברסיטת VU, תרבית המעבדה מתוחזקת במכלי מתקן רבייה עם החלפת מים רציפה. בתנאים סטנדרטיים, חלקיות בוגרות מוזנות בחסלה באופן חופשי ומופרדות לפי קבוצת הגיל שלהן.ברגע שהחלזונות מוצאים ממתקן הרבייה, הם ייחשבו כבשימוש ולא ניתן יהיה להחזירם למכלי הרבייה. לפני תחילת הפרוצדורה, יהיה ברשותכם מיקרוסקופ סטריאו, לוח ניתוח עם סיכות, מספריים כירורגיים קטנים, פינצטה, מזרק מלא בתמיסת magnesium chloride ומגבות נייר. כדי להקלי את החלזון, חדרו לרגל עם מחט ההזרקה בזווית של 45 מעלות, והפעילו לחץ עדין ורציף עד שהחלזון נרגע ונשאר פרוס. הוציאו את מחט ההזרקה וודאו שהחלזון הוקלה.בשלב הבא, השתמשו בפינצטה והסירו בזהירות את הקונכייה. תוך כדי מעקב אחר הקימור, גרדו בעדינות את השריר המקבע (ular muscle) מהקונכייה עד למחציתה. לאחר מכן, סובבו בעדינות את החלזון החוצה מקונכייתו, בהתאם לכיוון הלפית של הקונכייה.כעת, לאחר שהחלזון הוצא מהקונכייה, ניתן להשליכה. לאחר מכן, הניחו את החלזון על לוח הניתוח ונעצו סיכה דרך הקצה האחורי של הרגל. לאחר מכן, נעצו סיכה דרך הראש.יש למתוח מעט את החלזון ולנעץ את הסיכה בתוך הפלטה. כעת החלזון מוכן לנתיחה. הדליקו את התאורה של מיקרוסקופ הסטריאו וכווננו את המיקרוסקופ.לפני ביצוע החתך הראשון, חשוב לאתר את הפור הנקבי (female por). נקודה זו תשמש מאוחר יותר כנקודת ייחוס. בצעו חתך ראשון ממש מתחת לקצה המעטפת (mantle) וחתכו לכיוון הפור הנקבי.בצעו חיתוך סיבובי סביב נקב ה-bonno לכיוון הראש. ודאו שאתם חותכים רק את העור מבלי לפגוע באיברים כלשהם, וחתכו בקו ישר. לצורך מחקר זה, נבצע דיסקציה של בלוטת הערמונית ושל שלפוחית הזרע כדי להפיק נוזל זרע ותאי זרע, בהתאמה.שימו לב כי כדי להבטיח מאגרים מלאים של זרע ונוזל זרע, יש לבודד את החלזונות למשך שבוע אחד ולהאכילם ad libido. הניתוח מתבצע כפי שהוסבר קודם לכן. השקיקיות הזרעיות (seminal vesicles) ממוקמות בחלק האחורי של בעל החיים.בשלב הבא, תלויית בלוטת הערמומי תושה בתמיסת סלין ותונח על קרח. מאוחר יותר, אלו יערבבו עם תמיסות הטיפול.לפני הזרקה תוך-נרתיקית, תתווסף הזרע שנאספה לנוזל הזרע או לחלבונים בודדים במינון רלוונטי. עבור טכניקה זו של הדשאה מלאכותית, תזדקקו למזרק של 1 ml המכיל את תמיסת הבדיקה; חברו מחט להזרקה למזרק, תוך וידוא שאין בועות אוויר כלואות במזרק. להזרקה, השתמשו בזהירות בצינור סיליקון; החליקו את צינור הסיליקון על מחט ההזרקה.יש לוודא שהמבחנה ננקבה ולהוציא את האוויר ממנה. לפני ההזרקה, יש להרגיע את החלזון. פעולה זו תתבצע בהתאם לפרוטוקול המפורט בפרק שני.החלזון יקבל מנה של 2-3 milliliters של 50 micro molars של מגנזיום כלוריד. כאשר החלזון מסומם ורגוע כראוי, הנח אותו בתבנית כדי לשמור אותו במנח יציב. לאחר מכן, אחוז בקצה צינור הסיליקון באמצעות פינצטה עדינה ודחף אותו בעדינות אל תוך הנקבה.לאחר מכן, הפעל לחץ עדין על המזרק והזרק בזהירות את הנפח שנקבע של תמיסת הבדיקה. המתן חצי דקה כדי שהלחץ בתוך הצינור יתפזר אל תוך איבר הנקבה. לאחר מכן, הוצא את הצינור בזהירות והעבר את החלזון למכל ייעודי משלו.לאחר מכן, החלקיקים הופרו באופן מלאכותי. ניתן להעבירם למכלי הניסוי שלהם ולהתחיל בביו-בדיקה (bioassay). החלקיקים יתאוששו מהסדציה לאחר מספר שעות. ביו-בדיקות.עבור ברירה מינית, ניסויים נמשכים בדרך כלל שבועיים לפני שניתן להתחיל ב-biosa. חשוב להניח את כל הפרטים במכלים נפרדים ולסמן אותם. לאחר מכן, מדדו את אורך הקונכייה של כל חלזון.זהו מדד טוב לגודלם, שעשוי להשפיע על ההתנהגות המינית. לאחר מכן, ההליצות מועברות למכל ניסוי. מכל זה כולל את אותם תנאי סטנדרט כפי שקיימים במתקן הרבייה.כפי שנדון בפרק הראשון, חשוב להציב את המכלים בכיוון הנכון כך שהפתחים יעקבו אחר זרימת המים במיכל. במהלך הבדיקות הביולוגיות, יש להאכיל את החלזונות באופן קבוע. כמות סטנדרטית של דיסקית חסה נחתכת באמצעות מחורר ניירות מתכתי.מינון מספיק הוא שתי דיסקיות בכל יום שני. במינים המודל, *lumia stauss*, יש לבדוק את החלזונות לאיתור מסות ביצים מדי יומיים. מסות ביצים אלו ייאספו לצורך מדידות.לצורך סריקת הביצים, תזדקקו למחשב נייד הכולל את מנהל ההתקן (driver) של הסורק, סורק שטוח, סרגל מילימטרים סטנדרטי, כף להעברת גושי ביצים, פלטות ולוחות זכוכית להנחה מעל גושי הביצים. ראשית, השתמשו בכף כדי לגרד את גושי הביצים מדפנות המכל. גושי ביצים עכורים הוטלו זה עתה ואינם ניתנים לשימוש.בשלב מדידה זה, הניחו את מסות הביצים על לוחיות ההעברה וחזרו על שלבים אלו עד שהלוחיות יתמלאו. לאחר מכן, הניחו את מסות הביצים על אריחי הזכוכית באותו הסדר שבו הן הונחו על לוחיות ההעברה. מסות הביצים יידבקו לאריח הזכוכית; הפכו אותו והניחו אותו בזהירות על הסורק השטוח, בדיוק מתחת לסרגל.לאחר מכן, הפעל לחץ על הפלטות כדי למעוך את מסות הביצים. פעולה זו תפרוס את כל הביצים באופן אחיד, כך שייסרקו ביעילות שווה. לפני הסריקה, מומלץ להתאים את ההגדרות כדי להשיג את התוצאה המיטבית.לצורך הסריקה, חשוב לכוון את הרזולוציה למקסימום כדי לבצע סריקת תצוגה מקדימה, לאחר מכן לחתוך את אזור העבודה, ולבסוף לכוון את הבהירות והניגודיות לפני ביצוע הסריקה הסופית. לאחר הסריקה, מסות הביצים יוכנסו למבחנות מסומנות בנפרד לצורך הבשלה ובקיעה. המים במבחנות אלו יוחלפו מדי יומיים כדי לשמור על רמת חמצן תקינה.ככל שחלזונות נוספים בוקעים, יש להשתמש בטכניקות שונות כדי לרענן את המים. הסדר המומלץ הוא מזיגה או שפיכה בתחילה, ומאוחר יותר שאיבת המים באמצעות פיפטה. כדי לתעד את הנתונים ולצלם תמונה מתוך ImageJ, השתמשו תחילה בכלי הזום כדי לנווט אל סרגל המילימטרים.בצעו זום פנימה והתאימו את החלון כך ש-one Millimeter ימלא את המסך. שרטטו קו באמצעות כלי הקו בין שני קווי האינדיקציה. לאחר מכן, נווטו ל-analyze, ואז ל-set scale.בתפריט הפופ-אפ, תראו את Measured length (אורך נמדד); שנו את known distance (מרחק ידוע) ל-one ואת unit of (יחידה של) ל-millimeters. סמנו את תיבת ה-global וסגרו את החלון. כעת, לאחר שהקנה נקבע, ניתן לבצע זום לכיוון מסות הביצים הראשונות עד ל-800%. השתמשו בכלי האליפסה כדי לצייר את היקף הביצים.לחצו על D כדי לסמן את ההיקף. פעולה זו תסייע במניעת מדידה כפולה של אותה ביצה. לחצו על M כדי למדוד את ההיקף.חלון ייפתח לאחר איסוף נתונים מספיקים. ניתן לשמור את חלון הנתונים כקובץ Excel. כמו כן, ניתן להעתיק את הנתונים ישירות לגיליון עבודה.אם המדידות המועדפות אינן מופיעות בחלון הקופץ, ניתן להתאים ולנתח אותן. ניתן לבצע מדידות קבועות, כולל ספירה של הביצים הבודדות בכל מסת ביצים, גם בעזרת תוסף ספירת התאים (cell counter plugin). נווטו לתפריט התוספים (plugins).לאחר מכן יש לנתח ולבחור את מונה התאים. חלון מונה התאים יקפוץ. סמן את תיבת "keep original" ולחץ על initialize.חלון מונה חדש הופיע. בחר בכלי ה-cross here מסרגל הכלים. לאחר מכן, בחר סוג מונה בתפריט מונה התאים.לחיצה בחלון ספירת התאים תבצע את ספירת הביצים. ניתן למצוא את הספירה הכוללת לצד סוג המונה בתפריט ספירת התאים. ניתן לספור מספר מאסות של ביצים באמצעות סופר התאים.ניתן להוסיף ולהסיר סוגי מונים במידת הצורך. יש להעתיק מספר זה ידנית לגיליון אלקטרוני, או ללחוץ על results (תוצאות), ואז ייפתח חלון המציג את כל התוצאות. באמצעות שיטה זו, הדגמנו כיצד לאסוף חלבונים מנוזל זרע וכיצד לבחון אותם באופן משמעותי.הדגמנו זאת באמצעות תמצית מלאה של בלוטת הערמונית, אך כמובן שניתן לבחון חלבונים בודדים מנוזל הזרע באותה הדרך. בנוסף, ניתן לבחון תהליכים אחרים והטלת ביצים. תוצאות הניסויים שלנו הראו כי קיים חלבון בודד בנוזל הזרע הנקרא avios statin המתווך הפחתה בהטלת ביצים.בנוסף, מצאנו כי העברה של נוזל זרע מגדילה את הגודל או את מספר הפוסטים. Statin הוא החלבון הראשון שאופיין באופן מלא בנוזל זרע של הרמפרודיט סימולטני. בעוד שהשפעות של נוזל זרע דווחו לעיתים קרובות במינים בעלי מינים נפרדים, תוצאותינו מדגישות כי נוזלי זרע חשובים באותה מידה גם בהרמפרודיטים.

effect-male-accessory-gland-products-on-egg-laying-gastropod

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

הביצים של Xenopus laevis שלם, lysed, ו / או מופרדים שימושיים עבור מגוון רחב של ניסויים. פרוטוקול זה מראה כיצד לגרום הנחת ביצה, לאסוף את הביצים dejelly, ולמיין את הביצים כדי להסיר ביצים פגומות.

קבלת ביצים Xenopus laevis נקבות

ביצים ציפוי תאית סביב ביצים לעתים קרובות שחרור פפטידים, חלבונים ומולקולות קטנות אשר לתקשר עם זרע כדי להנחות אותם אל הביצה ובכך לקדם את ההפריה. שימוש בזרע צפרדע אנו מתארים ולהשוות שני מעמדות של מבחני לשמש כדי לזהות chemoattraction זרע - הצטברות זרע מבחני ומעקב מבחני הזרע.

שני סוגים של מבחני עבור Chemoattraction גילוי זרע צפרדע

סרטון זה מתאר את הדיסקציה של בלוטות האביזרים מזבובים זכרים ומציג דוגמה שבה הבלוטה המבודדת תנותק לתרחיף של תא יחיד.

דרוזופילה דיסקציה של בלוטת האביזר הגברי: שיטה לבידוד תאים משניים

C. התנהגות הטלת ביצים של elegans יכולה לספק מידע חשוב במחקרים התפתחותיים, פוריותיים ואנטומיים. סרטון זה מציג את השלבים החשובים של בדיקת הטלת ביצים ומציג ניסוי לדוגמה שבו תרופה נבדקת לרעילות רבייה.

בדיקת הטלת ביצים: שיטה לכימות התנהגות הטלת הביצים של C. elegans

שינויים הנגרמים לדיג דיג סרטנים מנוצל, כגון דיג הלובסטר האמריקאי, שעלולים להשפיע על דינמיקת הרבייה שלהם, מה שמוביל לירידה בהצלחת הזדווגות. מטרתו של מחקר זה הייתה לפתח שיטה לא פולשנית לבירור ההצלחה ההזדווגות של לובסטרים נשיים שיכול להיות מבחינה פיזיולוגית או תפקודי בוגר.

שיטה לא פולשנית ל<em&gt; באתרו</em&gt; קביעת ההצלחה זיווג בלובסטרים אמריקאים נקבה (<em&gt; Americanus Homarus</em&gt;)

פרוטוקול זה מתאר בדיקת תפוקה גבוהה לבדיקת העדפות הטלת ביצים של Drosophila melanogaster ברזולוציה של בעל חיים יחיד.  בדיקה זו מספקת פלטפורמה פשוטה, יעילה וניתנת להרחבה לזיהוי גנים ורכיבי מעגלים השולטים בתהליך קבלת החלטות פשוט.

Assay תפוקה גבוהה לבחינת העדפות הטלה של פרט<em&gt; תסיסנית</em

מטרת פרוטוקול זה היא לספק למשתמשים סט של שיטות לפירוק קפסולציה בתפוקה גבוהה של עוברים וזחלים של Lymnaea stagnalis כהכנה להכלאה שלמה באתר, ולטיפולים הבאים לפני ואחרי הכלאה.

הר שלם<em&gt; באתרו</em&gt; כלת שיטה עבור חלזון הרכיכות<em&gt; Stagnalis Lymnaea</em

שימור מוסמי מים תלוי בניטור דפוסי הרבייה ותהליכי המינים. מחקר זה מתקן פרוטוקול שאינו קטלני לדגימת תוכן הגיל, אפיון פיתוח זחל ואספקת מאגר דיגיטלי למידע שנאסף. זה פרוטוקול-חבילת מסד הנתונים יהיה כלי חשוב עבור חוקרי מולים בהתאוששות מינים מחויילים.

סטנדרטיזציה של שיטה שאינה קטלנית לאפיון מעמד הרבייה והתפתחות הזחל של מולים מים מתוקים (ביובלויה: Unionida)

מאמר זה מדווח על שיטה פשוטה לבודד את שכבות המשנה החיצוניות והפנימיות של ביצי עוף תוך מזעור השינוי המבני ולייעל את סולביליזציה של חלבונים של כל שכבת משנה לניתוחים פרוטאומיים.

הפרדה מכנית וסלוביליזציה של חלבון של שכבות המשנה החיצוניות והפנימיות של פריוויטלין מביצי חן

כאשר שינוי גורם גדילה ß חלבונים מבשר המשפחה באים לידי ביטוי חוץ רחמי בעוברים קסנופוס laevis, הם עמעם, לקבל מבקעים ומופרשים לתוך blastocoele, אשר מתחיל בפיצוץ מאוחר לשלב gastrula מוקדם. אנו מתארים שיטה לשאיפה של מוצרי מחשוף מחלל הפיצוץ לניתוח אימונובלוט.

ניתוח של שינוי גורם גדילה ß מוצרי מחשוף משפחתי מופרש לתוך Blastocoele של קסנופוס laevis עוברים

שני פרוטוקולי אבלציה של דיבור עיניים (כלומר, גישות צריבה וניתוח) בוצעו על נקבות סרטנים מורדמות. אבלציה של סרטני בוץ זירזה את הבשלת השחלות מבלי להפחית את שיעור ההישרדות.

אבלציה של דיבור עיניים להגברת התבגרות השחלות בסרטני בוץ

חקור את השפעת חלבוני הנוזל הזרעי על התנהגות ההטלה בחלזון Lymnaea stagnalis. פרוטוקול זה מדגים שיטה לאינסמינציה מלאכותית וביואסהי לבחינת מנגנוני ברירה מינית בהרמפרודיטים.

השפעה של זכר אבזר בלוטת מוצרים בהטלת ביצים ברכיכות חלזון

גלה סרטונים נוספים