Name: זריקות תוך ורידים בעכברים בילוד (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 17 s
Description: למד שיטה לא פולשנית לזריקות תוך ורידיות בעכברים בני יומיים לחקר מחלות פדיאטריות. הפרוטוקול מאפשר מסירת תרופות בדיוק גבוה עם מינימום לחץ על החיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות NINDS, FightSMA, ומשפחות של SMA לתמיכה כספית. SEGL נתמך על ידי מענק # הכשרת NINDS 5T32NS077984-02.

כל הנהלים המפורטים בפרוטוקול אושרו מכון לשימוש בבעלי חיים ובועדה לטיפול (IACUC) מאוניברסיטת מדינת אוהיו. 1. הכנת סביבת העבודה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף קרח רטוב כדי להרדים את גורי העכבר, כלוב ריק להפריד את הסכר מההמלטה, מיקרוסקופ לנתח, מקור אור שיכול להיות ממוקם בזווית להזרקה (שימוש במקור אור ב° 90 &#160; זווית על הזריקה מטשטשת את הווריד), משטח נקי למקום חי להזרקה, צמר גפן, 3/10 מזרק אינסולין סמ&quot;ק עם 3/8 &quot;30 מחט G (אחד לכל חיה) ו -1% אוונס הכחול צבע ( עשה עם מי מלח פוספט שנאגרו פתרון (PBS)) לאימונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הסכר לכלוב נפרד בעוד מניפולציה הגורים. </li></ol> נוהל 2. הזרקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח גור אחד ישירות על הקרח הרטוב במשך 30-60 שניות כדי להרדים את החיה. אל תשאיר tהוא חיה על זמן רב מדי קרח בשל סיכון לסיבוכים הקשורים היפותרמיה כוללים פרפור חדרים, היפוקסיה רקמות וחמצת מטבולית. הערה: הניסיון שלנו הוא ש30-60 שניות היא מספיק כדי להאט את תנועות הגור כדי לאפשר להזרקה. אם נדרש הרדמה עמוקה יותר, שאיפה כגון isoflurane 1-2% עשויה להיות מתאימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעוד החיה על קרח, לטעון את המזרק עם 30 μl של צבע הכחול אוונס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר בעלי החיים הוא בהרדמה מלאה, שאושר על ידי חוסר התנועה על הקרח בזמן שעדיין נושם, להעביר אותו מתחת למיקרוסקופ. להזרקה ימנית, ולהתמודד עם לועו של בעל החיים לצד ימין. הנח את האצבע שמאלה על הלוע וזנב האצבע אמצעית משמאל לניצן האוזן כך שניצן האוזן הוא בין האצבע ואמה (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבחון רק קדמי לניצן האוזן לנימים שטחיות שזז כאשר העור הוא מניפולציה. נימים זה לא היעד, אולםזיהוי הוא חשוב לזיהוי וריד זמני. בשלב הבא, אתר וריד כהה, צללים נחותים הנימים שנשארה קבוע, ללא קשר לעמדת עור. הווריד הזמני מופיע צללים, פועל גב אל הגחון, והזנות לוריד הצוואר (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזן את הווריד הזמני עם השיפוע עד המחט. אם הוכנס בצורה נכונה, ניתן להציג את זווית הטית המחט להתמלא בדם דרך העור. ואז לוחץ על המתג לאט ופתק לבן לווריד בצד של הפנים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר את המחט להישאר בווריד לשניות 10-15 הוסיפו כדי למנוע זרימה חוזרת של injectant. </li></ol> 3. לאחר הזרקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הזרקה נכונה, הגור צריך להפוך לכחול באופן כמעט מיידי. הסר את המחט ולהשתמש בכוח עדין ליישם מקלון צמר גפן לזריקה עד שקרישי הדם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג הגור לסימני מצוקה. לאפשר דקות הגור 2-3 להתאושש ולחמם, recognize כאשר הגור הוא בהכרה, זקוף ומרגש, לפני ההחזרה לכלוב. גביע הגורים בידיים בכפפות של החוקר כדי לספק חום מתאים כדי לסייע בהחלמה במידת צורך. לחלופין, הנח כרית חימום מתחת לכלוב בבית כדי להקל על התחממות הגור מוזרק. בדרך כלל לאחר הזרקת צבע הכחול אוונס, להרדים גורים. אינו כולל צבע כאשר הזרקת חומר למבחן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את הגור בחזרה לכלוב בבית ולהבטיח את הגור מצופה מצעים ו / או nestlet כדי להבטיח reacceptance על ידי הסכר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במזרק חדש וקלון צמר גפן לכל גור לשמור על סטריליות. </li></ol>

<ol><li>Foust, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravascular+AAV9+preferentially+targets+neonatal+neurons+and+adult+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Intravascular AAV9 preferentially targets neonatal neurons and adult astrocytes.</a> Nature. 27, 59-65 (2009).</li>
<li>Dominguez, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+scAAV9+delivery+of+a+codon-optimized+SMN1+sequence+rescues+SMA+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Human+molecular+genetics%22%5BJournal%5D)">Intravenous scAAV9 delivery of a codon-optimized SMN1 sequence rescues SMA mice.</a> Human molecular genetics. 20, 681-693 (2011).</li>
<li>Rahim, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+administration+of+AAV2%2F9+to+the+fetal+and+neonatal+mouse+leads+to+differential+targeting+of+CNS+cell+types+and+extensive+transduction+of+the+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+journal+%3A+official+publication+of+the+Federation+of+American+Societies+for+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Intravenous administration of AAV2/9 to the fetal and neonatal mouse leads to differential targeting of CNS cell types and extensive transduction of the nervous system.</a> FASEB journal : official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 25, 3505-3518 (2011).</li>
<li>Foust, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rescue+of+the+spinal+muscular+atrophy+phenotype+in+a+mouse+model+by+early+postnatal+delivery+of+SMN%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Rescue of the spinal muscular atrophy phenotype in a mouse model by early postnatal delivery of SMN.</a> Nat Biotechnol. 28, 271-274 (2010).</li>
<li>Duque, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+administration+of+self-complementary+AAV9+enables+transgene+delivery+to+adult+motor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Intravenous administration of self-complementary AAV9 enables transgene delivery to adult motor neurons.</a> Mol Ther. 17, 1187-1196 (2009).</li>
<li>Bostick, B., Ghosh, A., Yue, Y., Long, C., Duan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+AAV-9+transduction+in+mice+is+influenced+by+animal+age+but+not+by+the+route+of+administration%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Systemic AAV-9 transduction in mice is influenced by animal age but not by the route of administration.</a> Gene Ther. 14, 1605-1609 (2007).</li>
<li>Miyake, N., Miyake, K., Yamamoto, M., Hirai, Y., Shimada, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+gene+transfer+into+the+CNS+across+the+BBB+after+neonatal+systemic+delivery+of+single-stranded+AAV+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">Global gene transfer into the CNS across the BBB after neonatal systemic delivery of single-stranded AAV vectors.</a> Brain research. 1389, 19-26 (2011).</li>
<li>Porensky, P. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+administration+of+morpholino+antisense+oligomer+rescues+spinal+muscular+atrophy+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Human+molecular+genetics%22%5BJournal%5D)">A single administration of morpholino antisense oligomer rescues spinal muscular atrophy in mouse.</a> Human molecular genetics. 21, 1625-1638 (2012).</li>
<li>Hua, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+SMN+restoration+is+essential+for+long-term+rescue+of+a+severe+spinal+muscular+atrophy+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Peripheral SMN restoration is essential for long-term rescue of a severe spinal muscular atrophy mouse model.</a> Nature. 478, 123-126 (2011).</li>
<li>Kienstra, K. A., Freysdottir, D., Gonzales, N. M., Hirschi, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+neonatal+intravascular+injections%3A+modeling+newborn+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science+%3A+JAALAS%22%5BJournal%5D)">Murine neonatal intravascular injections: modeling newborn disease.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science : JAALAS. 46, 50-54 (2007).</li>
<li>Glascock, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delivery+of+therapeutic+agents+through+intracerebroventricular+%28ICV%29+and+intravenous+%28IV%29+injection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Delivery of therapeutic agents through intracerebroventricular (ICV) and intravenous (IV) injection in mice.</a> J. vis. Exp. (56), (2011).</li>
<li>Sands, M. S., Barker, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Percutaneous+intravenous+injection+in+neonatal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+animal+science%22%5BJournal%5D)">Percutaneous intravenous injection in neonatal mice.</a> Laboratory animal science. 49, 328-330 (1999).</li>
<li>Bevan, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+heart+failure+in+the+SMNDelta7+model+of+spinal+muscular+atrophy+and+correction+by+postnatal+scAAV9-SMN+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Human+molecular+genetics%22%5BJournal%5D)">Early heart failure in the SMNDelta7 model of spinal muscular atrophy and correction by postnatal scAAV9-SMN delivery.</a> Human molecular genetics. 19, 3895-3905 (2010).</li>
<li>Valori, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+delivery+of+scAAV9+expressing+SMN+prolongs+survival+in+a+model+of+spinal+muscular+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Science+translational+medicine%22%5BJournal%5D)">Systemic delivery of scAAV9 expressing SMN prolongs survival in a model of spinal muscular atrophy.</a> Science translational medicine. 2, (2010).</li>
<li>Foust, K. D., Poirier, A., Pacak, C. A., Mandel, R. J., Flotte, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+intraperitoneal+or+intravenous+injections+of+recombinant+adeno-associated+virus+type+8+transduce+dorsal+root+ganglia+and+lower+motor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Neonatal intraperitoneal or intravenous injections of recombinant adeno-associated virus type 8 transduce dorsal root ganglia and lower motor neurons.</a> Hum Gene Ther. 19, 61-70 (2008).</li>
<li>Guggenbuhl, P., Grosbois, B., Chales, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gaucher+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Joint%2C+bone%2C+spine+%3A+revue+du+rhumatisme%22%5BJournal%5D)">Gaucher disease.</a> Joint, bone, spine : revue du rhumatisme. 75, 116-124 (2008).</li>
<li>Daly, T. M., Vogler, C., Levy, B., Haskins, M. E., Sands, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+gene+transfer+leads+to+widespread+correction+of+pathology+in+a+murine+model+of+lysosomal+storage+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Neonatal gene transfer leads to widespread correction of pathology in a murine model of lysosomal storage disease.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 96, 2296-2300 (1999).</li>
<li>Daly, T. M., Ohlemiller, K. K., Roberts, M. S., Vogler, C. A., Sands, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+systemic+clinical+disease+in+MPS+VII+mice+following+AAV-mediated+neonatal+gene+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Prevention of systemic clinical disease in MPS VII mice following AAV-mediated neonatal gene transfer.</a> Gene Ther. 8, 1291-1298 (2001).</li>
<li>Wang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Juvenile+neuronal+ceroid+lipofuscinoses%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+experimental+medicine+and+biology%22%5BJournal%5D)">Juvenile neuronal ceroid lipofuscinoses.</a> Advances in experimental medicine and biology. 724, 138-142 (2012).</li>
<li>Forsythe, E., Beales, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bardet-Biedl+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22European+journal+of+human+genetics%22%5BJournal%5D)">Bardet-Biedl syndrome.</a> European journal of human genetics. 21, 8-13 (2013).</li>
<li>Bevan, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+gene+delivery+in+large+species+for+targeting+spinal+cord%2C+brain%2C+and+peripheral+tissues+for+pediatric+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Systemic gene delivery in large species for targeting spinal cord, brain, and peripheral tissues for pediatric disorders.</a> Mol Ther. 19, 1971-1980 (2011).</li>
<li>Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retro-orbital+injections+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+animal%22%5BJournal%5D)">Retro-orbital injections in mice.</a> Lab animal. 40, 155-160 (2011).</li>
<li>Saunders, N. R., Joakim Ek, C., Dziegielewska, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neonatal+blood-brain+barrier+is+functionally+effective%2C+and+immaturity+does+not+explain+differential+targeting+of+AAV9%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+biotechnology%22%5BJournal%5D)">The neonatal blood-brain barrier is functionally effective, and immaturity does not explain differential targeting of AAV9.</a> Nature biotechnology. 27, 804-805 (2009).</li>
<li>Foust, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+AAV9-mediated+suppression+of+mutant+SOD1+slows+disease+progression+and+extends+survival+in+models+of+inherited+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Therapeutic AAV9-mediated suppression of mutant SOD1 slows disease progression and extends survival in models of inherited ALS.</a> Mol Ther. 21, 2148-2159 (2013).</li>
</ol>

יש לי המחברים אין לחשוף.

משלוח תוך-סוכנים למערכת העצבים המרכזית או בכל הגוף קשה במודלים עכבריים יילודים של מחלה. הפרוטוקול המתואר הוא דרך מהירה, יחסית לא פולשנית לניהול לוריד פתרונות לעכברי יילודים עם דרישות ציוד מינימליות. למרות וריד הפנים הזמני ניתן לראות בעין בלתי מזוינת, ייתכן שיש לי זריקות דיוק רב יותר בשימוש במיקרוסקופ ומקור אור בסיבים אופטיים, במיוחד להזרקה בלתי מיומנת. יש זריקות תוך-בעכברים בילוד שיעור הצלחה גבוה 12, ואת הולכת AAV נצפתה בגורים מוקדמים, גם אם חלק מinjectant מנוהל תת עורי...

משלוח תרופות למערכת העצבים המרכזי (CNS) במודלים עכבריים למחלת ילדים עדיין מהווה אתגר. עכברים שמצבי מחלה שזה עתה נולדו מודל הם גוץ והתפתחותית בשלה, ולכן יכול להיות קשה להזריק ישירות במבנים מתאימים בתוך מערכת העצבים המרכזית. הזרקה תוך-של סוכנים טיפוליים היא שיטה לא פולשנית, נסבלת היטב כדי לספק תאים, תרופות, או וקטורים ויראליים לכל הגוף כולל מערכת העצבים המרכזית ו1-5 3,5-9 רשתית. פרסומים קודמים לתאר הזרקת פנים וריד זמנית באמצעות transilluminator 10,11, ללא מיקרוסקופ לנתיחה 11,12, או דורשים שני אנשים להזריק 10. טכניקת ההזרקה תוארה בפרוטוקול זה יש יתרון משום שאדם אחד יכול להזריק גורים, ומקור האור כדי לראות את הווריד הזמני לא נוגע בגור, ומבטל את הצורך בפלסטר או הקובץ המצורף של גור למשטח קבועכגון transilluminator 11. משלוח של סוג adeno הקשורים וקטור ויראלי 9 (AAV9) בעכברים מייצר ביטוי חזק בתאי עצב והאסטרוציטים ברחבי המוח וחוט השדרה (איור 1). משלוח תוך-של וקטורים ויראליים לוריד פנים הזמני השטחי נעשה שימוש באופן אמין במחקרים שונים בעכברים בילוד לטיפול בהפרעה עצבית-שרירית בילדים בעמוד השדרה שרירים ניוון (SMA) 2,4,13,14 וסופו של דבר הגדיל את תוחלת החיים של עכברים שטופלו. הזרקה תוך-של עכברים בילוד המטרה גם ביעילות מערכת עצבים ההיקפית ואיברים היקפיים (איור 2). בעקבות הזרקה של AAV, התמרה של גרעיני שורש הגבי, כבד, לב, שריר שלד, ריאות, ומקלעת myenteric של המעי נצפתה 1,3,6,7,15. התמרה נרחבת של מערכת העצבים המרכזית והפריפריה גורמת שיטה זו של אידאל הזרקה לטיפול במחלות הדורשות ביטוי הגלובלי שלtransgene, כגון המחלות של מחלת גושה 16 ואחסון lysosomal האחר 17,18, מחלת באטן וlipofuscinoses ceroid העצבי קשור, 19 ותסמונת Bardet-Biedl, הפרעה רבה מערכתית גנטית עם הופעת תסמינים המתרחשים בילדות המוקדמת 20. גם הזרקה תוך-לעכברים בילוד צריכה להיחשב כשיטת חדשנית למחלות ילדים מערכתיות דוגמנות. טכניקה זו תורגמה למודלים של בעלי חיים גדולים יותר 5,21 והזרקה תוך-כבר קיים כשיטת קלינית מקובלת של מתן תרופות. הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה פשוטה, יעילה של אספקת סוכנים לעכברים בילוד דרך וריד הפנים זמניים השטחי, לא יאוחר מיום הזרקת 2. לאחר לידה יכולה להסתיים באחת, התאמן פרט ונסבל היטב על ידי שני הגורים והסכרים. גורים חווים מצוקה מינימאלית ולהתאושש במהירות. Importantly, זריקה מוצלחת תביא לאספקה ​​הגלובלית של הסוכן מנוהל. פרוטוקול זה מתאים למשלוח של וקטורים ויראליים, סוכנים או תאי תרופות לעכברים שזה עתה נולד.

<table><tbody><tr><td>מזרק אינסולין Thinpro</td><td>Terumo</td><td>SS30M3009</td><td>3/10 סמ"ק, מחט 3/8 אינץ', 30 גרם, 1 לכל עכבר</td></tr><tr><td>צבע כחול אוונס</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>E2129</td><td>מדלל ל-1% עם 1x אפליקטורים עם קצה כותנה מלוח פוספט חוצץ</td></tr><tr><td></td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>23-400-101</td><td></td></tr><tr><td>מקור אור סיבים אופטיים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-562-36</td><td></td></tr><tr><td>ניתוח מיקרוסקופ</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

זריקות תוך ורידים בעכברים בילוד

Intravenous Injections in Neonatal Mice

הזרקה תוך ורידית היא אופן קליני רלוונטי כדי לספק תרופות. מכרסמים מבוגרים ובעלי חיים גדולים יותר, זריקות תוך-ורידית הן אפשריים מבחינה טכנית ושגרתיות. עם זאת, בחלק מדגמי העכבר יכול להיות התחלה מוקדמת של מחלה עם התקדמות מהירה שעושה ממשל של טיפולים פוטנציאליים קשה. הווריד הזמני (או פנים) הוא רק קדמי לניצן האוזן בעכברים והוא נראה בבירור ביומיים הראשונים שלאחר לידה בכל צד של הראש באמצעות מיקרוסקופ לנתח. במהלך חלון זה, הווריד הזמני יכול להיות מוזרק בנפחים של עד 50 μl. הזריקה היא בטוחה ונסבל היטב על ידי שני הגורים והסכרים. הליך הזרקה טיפוסי יושלם בתוך 1-2 דקות, לאחר שהגור חוזר לכלוב בבית. מהיום ליום שלאחר הלידה השלישי הווריד קשה לדמיין והליך ההזרקה הופך מבחינה טכנית לא אמין. טכניקה זו הייתה בשימוש למסירה של vect וירוס adeno הקשורים (AAV)ORS, אשר בתורו יכול לספק, ביטוי transgene יציב כמעט גוף-רחב לחייו של בעל החיים בהתאם לסרוטיפ הנגיפי נבחר.

במהלך הזרקה נכונה, הווריד לרגע להפוך, או לחלוט ברורים. אם הזרקה לצבוע כל הגור צריך להפוך לכחול בתוך שניות. אם הזרקה לא תקינה התרחשה, לעתים קרובות יש בולוס תת עורי מרוכז בראש או בצוואר וinjectant עלול לדלוף מאתר ההזרקה. זריקות לא נכונה יכולות גם לגרום להופעה של שטפי דם בצוואר. גורים המקבלים זריקות תת עורית (כלומר ההזרקה לא נמסרה באופן מלא בווריד) חווים בדרך כלל אין תופעות לוואי שליליות ובאופן שיגרתי מגיבים לטיפול כמו העכברים שהוזרקו כהלכה לעשות. <p class="jove_content"...

מודלים של בעלי חיים למחלות ילדים יכולים לחוות התפרצות מוקדמת והתקדמות מחלה אגרסיבית. מבחינה קלינית משלוח טיפול רלוונטי למודלים של עכברים צעירים יכול להיות קשה מבחינה טכנית. פרוטוקול זה מתאר שיטת הזרקה תוך ורידית לא פולשנית לעכברים שזה עתה נולדו בתוך שני הימים לאחר הלידה הראשונה של חיים.

Intravenous injection is a clinically applicable manner to deliver therapeutics. For adult rodents and larger animals, intravenous injections are ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא להעביר מאמר בדיקה תוך ורידי לעכבר יילוד. זה מושג על ידי זיהוי תחילה של העכברים בני יום עד יומיים שיש לטפל בהם. השלב השני הוא הכנת חומרי ההזרקה.לאחר מכן, ההזרקה מתבצעת. השלב האחרון הוא להחזיר את העכברים המטופלים והעירים לאמם. בסופו של דבר, נדרשת בדיקה במורד הזרם כדי לקבוע אם למאמר הבדיקה יש את האפקט הרצוי.בדרך כלל, אנשים חדשים בשיטה זו מתקשים ביותר בזיהוי ומיקוד הווריד המתאים. כדי להתחיל, אסוף את כל הציוד הדרוש להליך ההזרקה. בנוסף, הכינו צבע כחול של 1% אוונס ב-PBS ומזרק אינסולין אחד עם מחט בגודל 30 לכל בעל חיים להזרקה.לאחר מכן, הסר את הסכר לכלוב נפרד תוך כדי מניפולציה של הגורים. כשיהיה מוכן. הניחו גור בודד ישירות על קרח רטוב למשך 30 עד 60 שניות.להרדים. אל תשאיר את החיה על קרח זמן רב מדי בגלל הסיכון לסיבוכים הקשורים להיפותרמיה בזמן שהחיה על הקרח. מזרק לוטוס עם 30 מיקרוליטר של הצבע הכחול של אוון.כאשר החיה מורדמת לחלוטין, מאושרת על ידי חוסר תנועה על הקרח בזמן שהיא עדיין נושמת, הזיזו אותה מתחת למיקרוסקופ לזריקה ימנית, הניחו את הלוע של החיה למקום הנכון. האצבע המורה השמאלית על הלוע והאצבע האמצעית השמאלית התכרבלו לאוזניה כך שהאוזניה נמצאת בין האצבע המורה לאצבע האמצעית. בדוק רק את החלק הקדמי של האוזניה לאיתור נימים שטחיים שנעים בעת מניפולציה של העור.הנימים האלה אינם המטרה. עם זאת, זיהוי חשוב לזיהוי ורידים זמניים. לאחר מכן, אתר וריד כהה מוצל נחות מהנימים שנשאר קבוע ללא קשר למיקום העור.הווריד הטמפורלי נראה מוצל, עובר גב לגחון וניזון לווריד הצוואר. היכנס לווריד הטמפורלי עם שיפוע המחט כלפי מעלה. אם הוכנס כהלכה.אפשר לראות את מילוי שיפוע המחט בדם דרך העור. לאחר מכן לחץ על הבוכנה לאט, ושים לב להלבנה של הווריד במורד צד הפנים. אפשר למחט להישאר בתוך הווריד למשך 10 עד 15 שניות נוספות כדי למנוע זרימה חוזרת של ההזרקה.לאחר הזרקה נכונה, הגור צריך להפוך לכחול. כמעט מיד. הסר את המחט והשתמש בכוח עדין כדי למרוח צמר גפן על מקום ההזרקה עד שהדם נקרש.תנו לגור שתיים-שלוש דקות להתאושש ולהתחמם מחדש. ודאו שהגור בהכרה, זקוף וזז. לפני החזרה לכלוב, ניתן לכסות את הגורים בידיו עטויות הכפפות של החוקר כדי לספק חום מתאים כדי לסייע בהחלמה.לחלופין, הניחו כרית חימום מתחת לכלוב הביתי כדי להקל על חימום הגור המוזרק. החזירו את הגור לכלוב הביתי וכסו במצעים. כדי להבטיח את קבלת ה-Reac על ידי הסכר, השתמש במזרק חדש ובמקלון צמר גפן עבור כל גור כדי לשמור על סטריליות לאחר הזרקה תוך ורידית של A V nine Inod GFP ביטוי טרנסגן נראה בכל המוח, כולל הסטריאטום הקדמי, כמו גם הפונס והמוח הקטן.ביטוי GFP מזוהה גם בחוט השדרה ונראה הן בתאי עצב מוטוריים בעמוד השדרה והן בנוירונים של גרעיני השורש הגביים. ניתן לזהות אימונופלואורסצנציה של GFP בעכבר, בלב ובכבד הבוגרים לאחר הזרקה תוך ורידית של משלים עצמי A A V 9 GFP. לשם השוואה, ביטוי GFP נעדר בלב ובכבד של עכברים שהוזרקו לאחר ששולטו בהם.טכניקה זו אמורה להימשך שלוש עד חמש דקות לכל בעל חיים. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לבצע זריקות תוך ורידיות לעכברים יילודים.

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

מאמר זה מדגים שתי שיטות שונות של הזרקת מאוד: 1) לתוך המוח (intracerebroventricular) ו 2) מערכתית (תוך ורידי) כדי להציג את סוכני טיפולית לתוך מערכת העצבים המרכזית של עכברים הילוד.

מסירה של סוכני טיפולית באמצעות Intracerebroventricular (ICV) ו תוך ורידי (IV) הזרקה של עכברים

מקור: Seman, B. G. ואחרים. מודל הדמיה של יילודים של ספסיס חיידקי גראם שלילי. J. Vis. Exp. (2020)הסרטון מדגים מודל עכבר יילוד לחקר זיהום מערכתית באמצעות חיידקים ביולומינצנטיים מקופלים. גורים יילודים מוזרקים בתרופות חיידקיות במינון גבוה או נמוך ומוחזרים לאמם לטיפול לאחר הלידה. החיידקים המכוסים בכיסוי נמנעים מזיהוי חיסוני מוקדם, מתפשטים באופן מערכתית, ומוצגים לאורך זמן באמצעות הדמיית זוהר. מודל זה מאפשר מעקב לא פולשני אחר התקדמות הזיהום בעכברים יילודים.

מידול זיהום בעכברים יילודים באמצעות חיידקים ביולומינסנטיים עטופים

סרטון זה מדגים את תהליך ההזרקה התוך-מוחית לחקר התפלגות ציטומגלווירוס מורין (MCMV) במוח עכבר יילודים. MCMV, שתוכנן לבטא חלבון פלואורסצנטי ירוק משופר (EGFP) לנראות, מוזרק לחדר הצידי במוחו של גור עכברים. הנגיף המוזרק מסתובב דרך הנוזל השדרתי, מדביק תאים באזור periventricular, כולל אזור השוליים, מקלעת כורואיד ואזור subventricular.

הזרקה תוך-מוחית לניתוח התפלגות ציטומגלווירוס מורין במוח עכבר יילודים

ציטומגלווירוס זיהום (HCMV) אנושי של ילודים מייצג גורם חשוב של פיגור שכלי, אולם האירועים המולקולריים המובילים להיווצרות מחלה הנגרמת וירוס עדיין הם הבינו היטב. כדי לחקור את הדינמיקה של דלקת המוח, התאמנו כל הבעלים...

שימוש<em&gt; בvivo</em&gt; הדמיה למעקב אחר ההתקדמות של זיהום ציטומגלווירוס עכבר ניסיוני בילודים

כאן אנו מדגימים טכניקה להתמרה עצבית נרחבת על ידי הזרקה תוך-חדרית של נגיף הקשור לאדנו למוח העכבר היילוד.  שיטה זו מספקת דרך מהירה וקלה להשיג ביטוי לכל החיים של טרנסגנים המועברים באופן ויראלי.

הזרקת נגיפי Intracerebroventricular של ילודים עכבר המוח לתמרה עצבית מתמשכת ונרחבת

כאן, אנו מתארים שיטה פשוטה של הזרקה תוך חדרית ותוך וסקולרית של חלקיקים נגיפיים או מיקרו-חרוזים פלואורסצנטיים למוח העכבר היילוד. ניתן לזהות את דפוס הלוקליזציה של הנגיף והננו-חלקיקים על ידי הערכה מיקרוסקופית או על ידי הכלאה באתר.

הזרקת intracerebroventricular ו intravascular של חלקיקים נגיפיים ו פלורסנט microbeads לתוך המוח בילוד

אנו מתארים פרוטוקול לביצוע בתוך הרחם השתלת (דליה) דרך מסלולים תוך ורידי, אינטרה-שפיר של הזרקת במודל מאתר. פרוטוקול זה ניתן להציג תאים וקטורים ויראלי, חומרים אחרים לתוך לסביבה הייחודית של העובר החיסון-סובלנית.

תוך ורידי, אינטרה-שפיר בתוך הרחם השתלת במודל מאתר

כאן מתוארת גישה פשוטה ומהירה לביצוע הזרקות תוך-מוחיות בעכברים בגישה של יד חופשית (כלומר, ללא מכשיר סטריאוטקסי).

זריקות תוך-מוחיות ביד חופשית בעכברים

פרוטוקול זה נועד להדגים מסלול מתן ורידי הניתן לשחזור שניתן להשתמש בו בחולדות ובעכברים לאורך תקופת היילוד. הליך זה חשוב למחקרי מכרסמים פרה-קליניים המעוניינים לשקף מתן תרופתי ביחידות לטיפול בילודים בעיקר באמצעות מתן תוך ורידי.

מודל מכרסם יילוד של הזרקת ורידים רטרואורביטלית

הפרוטוקול הנוכחי מתווה הוראות שלב אחר שלב לביצוע זריקות תוך-תיקליות בעכברים יילודים לצורך עריכת גנים והעברת תרופות.

הזרקה תוך-תטית של עכבר שזה עתה נולד לצורך עריכת גנום ואספקת תרופות

פרוטוקול זה מדגים הזרקת וריד טמפורלי למתן תאי סרטן ילדים לתוך-ורידיים לעכברים יילודים, ומאפשר מודל מדויק וניתן לשחזור של תגובות חיסוניות בחיים המוקדמים נגד סרטן. השיטה מאפשרת הערכה של השפעת התערבויות, כגון אימונומודולציה או טיפול, כאשר הן מיושמות במהלך תקופת הניואונטל.

מודל השתלה תוך-ורידית יילודים להערכת פעילות חיסונית מוקדמת נגד תאי סרטן

למד שיטה לא פולשנית לזריקות תוך ורידיות בעכברים בני יומיים לחקר מחלות פדיאטריות. הפרוטוקול מאפשר מסירת תרופות בדיוק גבוה עם מינימום לחץ על החיות.

זריקות תוך ורידים בעכברים בילוד

גלה סרטונים נוספים