הערכה של יכולת הקיום של הזרקת שומן האנושי בעכברי עירום עם מיקרו-טומוגרפיה ממוחשבת

המטרה הכוללת של הליך זה היא לתאר מודל עכבר המשתמש במיקרו CT כדי להשוות את שימור הנפח בין טכניקות דחייה של הכנת השתלת שומן ומסירתו. זה מושג על ידי עיבוד ראשון של שאיבת שומן אנושית כדי להשיג שומן מוכן להשתלה. השלב השני הוא למקם שתלי שומן בקרקפת של עכברים עירומים מסוג CD one.

לאחר מכן, הישרדות השתלת השומן מנותחת מדי שבוע על ידי עכברי סריקת CT, שחזור תמונות וכימות שימור נפח. השלב האחרון הוא לתכנן השתלת שומן בתום שמונה שבועות ולהשוות אותם לפי משקל והיסטולוגיה. בסופו של דבר, מיקרו CT והיסטולוגיה משמשים כדי להראות הבדלים באיכות השתלת השומן ובהישרדות.

היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות כמו שקילת השתלות שומן, הוא שהיא מאפשרת הדמיה וכימות אובייקטיבי של נפח השתלת השומן במספר נקודות זמן לאחר ההשתלה הראשונית מבלי להקריב את חיית המחקר. הרעיון לשיטה זו עלה לנו לראשונה כשהתחלנו להשתמש במיקרו CT כדי לנתח פגמים בקלבה. ההשלכות של טכניקה זו הן שהיא מציעה מודל כירורגי לכל המחקרים המעריכים השתלת שומן, שימור וכדאיות.

בדרך כלל, אנשים חדשים בשיטה זו יתקשו מכיוון שקשה להכיל את שתל השומן במיקום הנכון מעל הקרקפת. הדגמה חזותית של טכניקה זו היא קריטית מכיוון שקשה ללמוד את שלבי ההשתלה והשחזור מכיוון שישנם שלבים רבים שבהם סטייה קטנה בטכניקה יכולה לשנות את התוצאה. באמצעות הליך קולמן, השג רקמת שומן אנושית מאזורי הבטן, האגף והירך של מטופלות בריאות העוברות שאיבת שומן אלקטיבית.

כדי לעבד את שאיבת הליפו להשתלה, התחל בכך שתאפשר לשומן להתיישב למשך 30 דקות. שואב ליפו בדרך כלל מתיישב בשלוש שכבות עם שמן בחלק העליון, שומן באמצע ודם בתחתית. שואבים וזורקים את שכבת השמן העליונה ואחריה את שכבת הדם התחתונה.

כדי להסיר עוד יותר את כל הנוזל הגועש או פסולת התאים שנותרו, צנטריפוגה את השומן למשך חמש דקות בטמפרטורה של 350 גרם וארבע מעלות צלזיוס. לאחר הצנטריפוגה יש לשאוב את שכבת הדם התחתונה ואת שכבת השמן העליונה. כדי לחשב את כמות השומן הדרושה להשתלה כמתואר בפרוטוקול הטקסט, כדי לבצע השתלת שומן, השיגו CD הומוזיגוטי נקבה עכברים עירומים אחד.

למחקר הניסיוני, בחרו עכברים בגילאי שמונה עד 12 שבועות כדי לגרום להרדמה. הנח את העכבר בקופסה עם תערובת חמצן פלואור של 2.5% בשני ליטר לדקה למשך כ-10 דקות כאשר קצב הנשימה של העכבר הואט. יש לאשר טשטוש הולם עם צביטה בבוהן.

מרחו משחת עיניים סיכה וטרינרית על שתי עיני העכבר והנחו את אף העכבר בקונוס האף, ומספקים תערובת חמצן פלואור 2.5% ISO בליטר עד שני ליטר לדקה. לאחר מכן, הגדר שדה סטרילי מתחת לעכבר. לאחר מכן יש לעקר קרקפת עם 2.5% פובידון יוד, ואחריו תמיסת אתנול 70%.

חזור על העיקור פעמיים נוספות. טען לאחור מזרק נעילת פיתיון של מיליליטר אחד עם מיליליטר אחד של שומן אשר התאזן לטמפרטורת החדר. חבר צינורית השתלת שומן בגודל 14 באורך שמונה סנטימטרים לקצה המזרק.

יש להפעיל את המערכת על ידי לחיצה על בוכנת המזרק עד שנשארים בין 200 ל -400 מיקרוליטר שומן במזרק. תוך כדי לחיצה על בוכנת המזרק, ודא שהצינורית התמלאה במלואה בשומן על ידי התבוננות בשומן היוצא מחור הצינורית הדיסטלי באמצעות מלקחיים עדינים. הרם את עור הגב בקו האמצע המכסה את ההיבט הגדול ביותר של הגולגולת.

בצע חתך של 1.5 מילימטר בעור בעזרת מספריים עדינים. מניחים תפר ניילון של שש או באמצע החיתוך שישמש מאוחר יותר לקירוב קצוות הפצע. לאחר ביצוע ההשתלה, אין לקשור את התפר.

לאחר מכן צור כיס תת עורי מעל הגולגולת על ידי החדרת הצינורית דרך חתך העור והעברת הצינורית קדימה ואחורה בתבנית בצורת מניפה מעל הגולגולת כדי לשחרר את כל חיבורי רקמת החיבור לעור שמעל לאחר יצירת הכיס, מקם את הצינורית בקו האמצע של העכבר ישירות מעל הגולגולת עד שהקצה מונח בהיבט התרמוס של הכיס, שאמור להיות ממש מאחורי קו משורטט בין העיניים. הזריק לאט את השומן בצורה לאחור, מקדם את הבוכנה תוך משיכת הצינורית לאחור. בעזרת מלקחיים, קירבו את קצוות הפצע והרימו אותם כדי למנוע דליפת שומן מהכיס.

קושרים את התפר שהונח בעבר, ומוודאים שהקשר הראשון מונח קלות על העור. קושרים עוד שלושה קשרים מרובעים וחותכים את התפר בזנב של שלושה מילימטרים. הסר את העכבר מההרדמה והמשך בהחלמה כמפורט בפרוטוקול הטקסט.

לפני ביצוע הסריקה הראשונה, כייל את המיקרו CT עם פנטום הדמיה המבחין בין אוויר, מים ועוצמת עצם. לאחר הכיול. הכניסו ארבעה עכברים לסורק במיקום הגחון עם שני עכברים למעלה ושניים למטה.

יש להניח על מיטת סריקה. נבנה בעבר ממזרקים של 60 מיליליטר כדי להחזיק את גוף העכבר ומזרקים של 10 מיליליטר כקונוסים לאף. ודא עם תמונת סקאוט שכל הגולגולת של העכבר מהאף ועד לחוליה הצווארית הראשונה ומהחלק העליון של הגולגולת לבסיס הגולגולת תצולם.

המשך בסריקה כמפורט בפרוטוקול הטקסט. פתח את התמונות המשוחזרות עם תוכנת ניתוח הדמיה מיקרו CT המאפשרת יצירת אזורי עניין או החזר ROI על ידי בחירת ווקסלים באמצעות סף לעוצמת פיקסלים. התחל בטעינת תמונות ה-CT המשוחזרות בתצוגות דו-ממדיות, קורונליות, ציריות וסגיטליות.

השתמש בפרוסה הצירית כמדריך, נווט אל הפרוסה הסגיטלית המתאימה להיבט השמאלי ביותר של שתל השומן. בחר סף עליון ותחתון לעוצמת פיקסלים הלוכד את כל הווקסלים המתאימים לשתל השומן, אך אינו כולל את הרקמה והעצם שמסביב. הגדר החזר ROI בתצוגה הסגיטלית המתאימה לשתל השומן.

באמצעות ספי עוצמת פיקסלים שהוגדרו בעבר, חזור על הליך זה בכל פרוסה סגיטלית חמישית המנווטת עד להגעה להיבט הימני ביותר של השתל. לאחר מכן: אינטרפולציה של ווקסלים נבחרים מכל החזר ה-ROI הדו-ממדי לתוך החזר ROI תלת-ממדי משולב אחד, מתעדים את נפח ההחזר על ההשקעה המחושב על-ידי התוכנה. עבד את האיזו-משטח התלת-ממדי כדי לדמיין את נפח השתלת השומן הסופי.

בניתוח שלאחר מכן, הקפד לשמור על ערכי הסף המקסימליים והמינימליים של עוצמת הפיקסלים זהים לאלה המשמשים לניתוח הבסיס לאחר סריקת עכברים לנקודת הזמן השמינית בשבוע. המתת חסד של העכברים כמתואר בפרוטוקול הטקסט. הנח את העכבר בשדה הניתוחי באמצעות מספריים לטנוטומיה פתח בזהירות את הכיס ואת העור שמעליו וחיבורי רקמת החיבור משתל השומן.

בשלב זה, זה עשוי לעזור לכרות טלאי של עור הגב שמעליו כדי לסייע במיצוי השתל. הישאר קרוב ככל האפשר לשתל בעת הכריתה כדי למזער את רקמת החיבור שנלקחה מהשתל לאחר כריתת השתל. מדוד את המסה בסולם קרוע המדויק עד 0.01 גרם לפחות.

שתלי שומן ירדו בהדרגה בנפח במהלך המחקר וכתוצאה מכך הישרדות ממוצעת של 62.2% בשבוע השמיני. בסיום הסריקה בשבוע השמיני, כל שתל שומן חולץ בחתיכה אחת. נעשה שימוש במבחן סכום דרגת קוקסין WIL כדי להשוות את ההבדל בין מדידות נפח של שתל שומן המתקבלות על ידי מיקרו CT או מחושבות מהמסה הפיזית.

לא נמצא הבדל משמעותי בין שתי השיטות הללו. לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך שעתיים לכל מפגש אם היא מבוצעת כראוי. כאשר מנסים הליך זה, חשוב לזכור לבצע את הניתוחים והשחזורים באותו אופן בכל פעם לאחר הליך זה.

ניתן לבצע שיטות אחרות כמו צביעה חיסונית ו-Q-R-T-P-C-R כדי לענות על שאלות נוספות כמו כיצד כלי דם וביטוי גנים מושפעים משיטות שונות של השתלה. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להיות בעל הבנה טובה כיצד לעבד שאיבת שומן להשתלה סדרתית שתלי סריקת CT in vivo, להעריך את הישרדות השתל ולפרט שתלים להיסטולוגיה של משקל וניתוח עתידי לאחר פיתוחו. טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום הכירורגיה הפלסטית לחקור השתלת שומן במודל השיקוף.