קרוב אינפרא אדום (ניר) אור מגביר את הביטוי של דה מרקר של פונקצית מיטוכונדריאלי בעכבר שיווי המשקל החושי האפיתל

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא לחקור את ההשפעה הנוירו-פרוטקטיבית הפוטנציאלית של אור אינפרא אדום קרוב על אפיתל חושי שיווי משקל של עכבר. זה מושג על ידי יישום טרנס-גולגולתי פשוט וקצר טווח של אור אינפרא אדום קרוב לעכברים בשלבי התפתחות שונים. כשלב שני, מנותחים המבוך הגרמי של בעלי החיים המטופלים, מה שמאפשר בידוד של האפיתל החושי הווסטיבולרי.

לאחר מכן, הביטוי של הגן נוגד החמצון המעניין נמדד על ידי R-T-P-C-R כדי להעריך את השפעת הטיפול על ביצועי המיטוכונדריה. לבסוף, דנסיטומטריה מבוצעת כדי להעריך את ההשפעה של טיפול קצר באור קרוב לאינפרא אדום על ביטוי גנים נוגדי חמצון ספציפיים בעכברים. היתרון העיקרי של טכניקת טיפול אינפרא אדום קרובה זו הוא שהיא פשוטה ולא פולשנית, ומאפשרת ניתוח פיזיולוגי, מולקולרי והתנהגותי בהמשך הזרם לאחר הטיפול.

ההשלכות של טכניקה זו משתרעות על ההגנה העצבית הפוטנציאלית של מערכת שיווי המשקל ההיקפית במהלך הזדקנות נורמלית, או לשיפור ביצועים מאוזנים לאחר מחלה או גירעון שיווי משקל. יומיים-שלושה לפני תחילת הניסוי, גלחו את הפרווה באזורי הראש והצוואר של כל עכבר קרוב ככל האפשר כדי למנוע צמיחה מחודשת של שיער החיה לפני השלמת משטר הטיפול. כדי לשמור על מצב נקי מפתוגן של בעלי החיים, יש לנקות את המכשירים עם 70% אתנול בין כל גילוח.

לאחר מכן, ביום הטיפול עבור כל מתמחה בעל חיים, הרימו את העכבר בקצה הפרוקסימלי של הזנב ואפשרו לו להירגע בכף יד אחת כדי למזער את הלחץ עבור בעלי החיים שטופלו באינפרא אדום. עבור כל בעל חיים, החזק מכשיר LED בגודל 670 ננומטר, במרחק של סנטימטר עד שני סנטימטרים מהאזור המגולח, והפעל את המכשיר למשך 90 שניות. עבור קבוצת הדמה, חזור על הליך הטיפול באותו אופן, אך כאשר המכשיר כבוי לקבוצה החסומה האינפרא אדום הקרוב, התייחס לבעלי החיים באותו אופן כמו הקבוצה המטופלת באינפרא אדום הקרוב, אך כשהמכשיר מכוסה בנייר אלומיניום.

לאחר חזרה על הטיפולים לכל קבוצה במרווחים של 24 שעות במשך חמישה ימים רצופים, יש להקפיא נוזל מוח מוחי מלאכותי טרי על בסיס גליצרול, או CSF במקפיא מינוס 80 מעלות צלזיוס למשך 45 דקות עד שנוצר תמיסת קרח. הבא. עבור כל עכבר, השתמש בסכין גילוח מעוגל מספר 22 כדי לבצע חתך לאורך העור הסגיטלי של הגולגולת, תוך שמירה על מוח קמרון הגולגולת ומנגנון שיווי המשקל הבסיסי קריר ככל האפשר עם מריחה קבועה של קר קרח A CSF על הרקמה. לאחר מכן השתמש בזרוע המחודדת של זוג מספריים בדוגמה סטנדרטית כדי לבצע חתך קטן בגולגולת בלמבדה ולחתוך לאורך התפר הסגיטלי.

לאחר מכן החלק בעדינות זרוע אחת של URS רדוד מתחת לעצם הקודקודית, ולאחר מכן אבטח ומשוך את העצם הקודקודית לרוחב ואת העצם העורפית לאחור עד שהמוח נחשף. לאחר מכן השתמשו במרית קטנה מנירוסטה כדי להרים את המוח הרחק מהפוסה הקדמית והאמצעית של הגולגולת. כדי לחשוף את עצב השבלול הווסטיבולרי, יש לחצות את העצב כדי למנוע מתח מיותר על האקסונים הראשוניים המעצבבים ישירות את תאי השיער הווסטיבולריים.

לאחר מכן הסר את המוח בטוטו והתבונן במבוך הגרמי המכיל את השבלול ואת איברי שיווי המשקל ההיקפיים בפוסה הגולגולתית האמצעית. כעת בצע שני חתכים קטנים ליד כל מבוך גרמי והחזק ומשוך את התעלה החצי עגולה הקדמית לרוחב כדי לכרות את כל המבנה. לאחר מכן טבלו מיד את המבוך הכרות בכלי חיתוך המכיל את תמיסת ה-CSF הקרה כקרח תוך כדי החדרה רציפה של קרבוגן.

החלק המסובך ביותר בהליך זה הוא השגת כמויות עקביות של רקמה בת קיימא עבור כל בעל חיים, אנו ממליצים לתרגל התבוננות קפדנית ותאורה ספציפית של הרקמה. לאחר מכן, תחת מיקרוסקופ סטריאו, החזיקו את המבוך ליד השבלול והשתמשו במלקחיים כדי להדק את הרקמה לתחתית הכלי באמצעות מלקחיים עדינים ישרים. מגרדים פתח קטן בעצם מעל התעלה החצי עגולה הקדמית.

לאחר מכן הושיטו יד מיד מתחת לעצם והחליקו החוצה הרחק מה-ULA כדי להגדיל בעדינות את הפתח. המשך בצורה זו עד לחשיפת הרחם והפולה הקדמית והרוחבית. לאחר מכן השתמש במלקחיים עדינים כדי להרים בעדינות את הרחם והפולה הרחק מהמבוך הגרמי עד שהם מנותקים לחלוטין.

לבסוף, אחוז היטב באיברי שיווי המשקל בין קצה המלקחיים והנח אותם לליזה שזה עתה הוכנה. חוצץ בצינור מיקרו עליון בורג, סובב בעדינות את המלקחיים במאגר כדי לנתק את האיברים הווסטיבולריים. לאחר מכן, לאחר אישור שהמלקחיים נקיים מרקמה תחת מיקרוסקופ הסטריאו, הברג את מכסה המיקרו-צינורית והקפיא מיד את הדגימה בחנקן נוזלי כדי להשוות את ההשפעה של טיפול אינפרא אדום קרוב בין עכברים צעירים ומבוגרים.

שליח, RNA הפוך, תומלל ל-DNA משלים, ואז הביטוי של נוגד החמצון סופראוקסיד דיסמוטאז אחד או SOD אחד נותח כפי שנמדד על ידי צפיפות נצפתה עלייה משמעותית בביטוי בטא אקטין מנורמל של יותר מפי שניים בבעלי חיים צעירים שטופלו באינפרא אדום בהשוואה לבעלי חיים צעירים שטופלו בזימה ובעלי חיים צעירים חסומים ליד אינפרא אדום. בעלי חיים מבוגרים יותר שטופלו באינפרא אדום הראו גם יותר מפי שניים של ויסות הסודה בהשוואה לבעלי חיים מבוגרים יותר חסומים באינפרא אדום. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע ניסויים התנהגותיים, מולקולריים או פיזיולוגיים כדי לענות על שאלות נוספות כמו, האם אור אינפרא אדום קרוב מגביר את ביטוי הגנים או החלבונים האחרים באפיתל החושי הווסטיבולרי?

או שמא אור אינפרא אדום קרוב משפר את ביצועי שיווי המשקל הכוללים של עכברים מטופלים?