Name: מדידה של תפקוד של שריר חלק ברקמות מבודדות אמבט-היישומים למחקר פרמקולוגיה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 5 s
Description: למדו למדוד כיווץ איזומטרי של שריר חלק בעזרת מערכת אמבט רקמות מבודדות. השיטה מאפשרת הערכת תפקוד קולטנים ותגובתיות תרופתית בחישוף עורקי של עכברוש.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מעבדת ווטס לאורך השנים, וד"ר מרלן כהן וקתי שנק שלימדו אותנו את הבדיקה הזו לפני למעלה משני עשורים. NIGMS תמכה R25GM074119 בפיתוח מודול הוראה זה לקורס קצר בפרמקולוגיה אינטגרטיבית ומערכתית שנערך בקמפוס של MSU בין השנים 2005 ל-2013.

<ol><li>Kenakin, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+classification+of+drugs+and+drug+receptors+in+isolated+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Rev%22%5BJournal%5D)">The classification of drugs and drug receptors in isolated tissues.</a> Pharmacol. Rev. 36, 165-222 (1984).</li>
<li>Scheindlin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+brief+history+of+modern+pharmacology%5BTitle%5D)+AND+%22Modern+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">A brief history of modern pharmacology.</a> Modern Drug Discovery. 4, 87-88 (2001).</li>
<li>Christopoulos, A., El-Fakahany, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Qualitative+and+quantitative+assessment+of+relative+agonist+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Qualitative and quantitative assessment of relative agonist efficacy.</a> Biochem. Pharmacol. 58, 735-748 (1999).</li>
<li>Arunlakshana, O., Schild, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Some+quantitative+uses+of+drug+antagonists%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol.+Chemother%22%5BJournal%5D)">Some quantitative uses of drug antagonists.</a> Br. J. Pharmacol. Chemother. 14, 48-58 (1959).</li>
<li>Christopoulos, A., Kenakin, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((protein-coupled+receptor+allosterism+and+complexing%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Rev%22%5BJournal%5D)">protein-coupled receptor allosterism and complexing.</a> Pharmacol. Rev. 54, 323-374 (2002).</li>
<li>Braverman, A. S., Kohn, I. J., Luthin, G. R., Ruggieri, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prejunctional+M1+facilitory+and+M2+inhibitory+muscarinic+receptors+mediate+rat+bladder+contractility%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Prejunctional M1 facilitory and M2 inhibitory muscarinic receptors mediate rat bladder contractility.</a> Am. J. Physiol. 274, R517-523 (1998).</li>
<li>Singh, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoglobulins+from+scleroderma+patients+inhibit+the+muscarinic+receptor+activation+in+internal+anal+sphincter+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Gastrointest.+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Immunoglobulins from scleroderma patients inhibit the muscarinic receptor activation in internal anal sphincter smooth muscle cells.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 297, G1206-1213 (2009).</li>
<li>Goadsby, P. J., Adner, M., Edvinsson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+endothelin+receptors+in+the+cerebral+vasculature+and+their+lack+of+effect+on+spreading+depression%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Characterization of endothelin receptors in the cerebral vasculature and their lack of effect on spreading depression.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 16, 698-704 (1996).</li>
<li>Colquhoun, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agonist-activated+ion+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Agonist-activated ion channels.</a> Br. J. Pharmacol. 147, Suppl 1. S17-26 (2006).</li>
<li>Wyllie, D. J., Chen, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taking+the+time+to+study+competitive+antagonism%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Taking the time to study competitive antagonism.</a> Br. J. Pharmacol. 150, 541-551 (2007).</li>
<li>Schild, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((pA%2C+a+new+scale+for+the+measurement+of+drug+antagonism.+1947%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">pA, a new scale for the measurement of drug antagonism. 1947.</a> Br. J. Pharmacol. 120 (4), 29-46 (1997).</li>
<li>Oshita, M., Kigoshi, S., Muramatsu, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+characterization+of+two+distinct+alpha+1-adrenoceptor+subtypes+in+rabbit+thoracic+aorta%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Pharmacological characterization of two distinct alpha 1-adrenoceptor subtypes in rabbit thoracic aorta.</a> Br. J. Pharmacol. 108, 1071-1076 (1993).</li>
<li>Hiraoka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Binding+and+functional+characterization+of+alpha1-adrenoceptor+subtypes+in+the+rat+prostate%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Binding and functional characterization of alpha1-adrenoceptor subtypes in the rat prostate.</a> Eur. J. Pharmacol. 366, 119-126 (1999).</li>
<li>Cooke, P. H., Fay, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+between+fiber+length%2C+ultrastructure%2C+and+the+length-tension+relationship+of+mammalian+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Correlation between fiber length, ultrastructure, and the length-tension relationship of mammalian smooth muscle.</a> J. Cell Biol. 52, 105-116 (1972).</li>
<li>Davis, M. J., Gore, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Length-tension+relationship+of+vascular+smooth+muscle+in+single+arterioles%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Length-tension relationship of vascular smooth muscle in single arterioles.</a> Am. J. Physiol. 256, H630-H640 (1989).</li>
<li>Davis, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-month+serotonin+infusion+results+in+a+prolonged+fall+in+blood+pressure+in+the+deoxycorticosterone+acetate+%28DOCA%29+salt+hypertensive+rat%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">One-month serotonin infusion results in a prolonged fall in blood pressure in the deoxycorticosterone acetate (DOCA) salt hypertensive rat.</a> ACS Chem. Neurosci. 4, 141-148 (2013).</li>
<li>Heppner, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nerve-evoked+purinergic+signalling+suppresses+action+potentials%2C+Ca2%2B+flashes+and+contractility+evoked+by+muscarinic+receptor+activation+in+mouse+urinary+bladder+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Nerve-evoked purinergic signalling suppresses action potentials, Ca2+ flashes and contractility evoked by muscarinic receptor activation in mouse urinary bladder smooth muscle.</a> J. Physiol. 587, 5275-5288 (2009).</li>
<li>Burdyga, T. V., Wray, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+mechanisms+whereby+temperature+affects+excitation-contraction+coupling+in+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Physiol%22%5BJournal%5D)">On the mechanisms whereby temperature affects excitation-contraction coupling in smooth muscle.</a> J. Gen. Physiol. 119, 93-104 (2002).</li>
<li>Hyvelin, J. M., O'Connor, C., McLoughlin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+changes+in+pH+on+wall+tension+in+isolated+rat+pulmonary+artery%3A+role+of+the+RhoA%2FRho-kinase+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Lung+Cell+Mol.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effect of changes in pH on wall tension in isolated rat pulmonary artery: role of the RhoA/Rho-kinase pathway.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 287, L673-L684 (2004).</li>
<li>Tykocki, N. R., Thompson, J. M., Jackson, W. F., Watts, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ryanodine+receptors+are+uncoupled+from+contraction+in+rat+vena+cava%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Calcium%22%5BJournal%5D)">Ryanodine receptors are uncoupled from contraction in rat vena cava.</a> Cell Calcium. 53, 112-119 (2013).</li>
</ol>

לסופרים אין מה לחשוף.

מדידה של כוח איזומטרי ככלי מחקר היא בן למעלה מ -150 שנים, אבל היא ממשיכה להיות הטכניקה הטיפוסית לאפיון רצפטור ברקמות התכווצות 2. כוחה של טכניקה זו הוא בפשטות וברבגוניות שלו: על ידי הקלטת תגובות שהושרו על ידי הגדלת ריכוזים של אגוניסט בנוכחותו או היעדריו של יריבו, מספר עצום של מידע ניתן לגזור על המאפיינים תרופתיים של כל תרופה והקולט ש הוא נקשר 3-5. ניסויים מסוג זה גם לגייס מידע על התחרותי מול הטבע הלא תחרותי של היריבים משמשים, כמו גם ההטרוגניות קולט והשפעות תרופה שאינן ספציפיות 6-8. לפיכך, עם תמורות פשוטות לניסוי אמבטיה רקמה מבודד זה, פרופיל תרופתי יחסית מלא של קולטנים אשר מתווכים התכווצות שרירים הנגרם אגוניסט יכול להיות שנוצר. במונחים של agonism, הניתן לחשב דואר יעילות היחסית (E MAX) ועצמה (50 EC) של אגוניסט ברקמות נתון ובהשוואה לתגובות של אגוניסטים אחרים באותו הרקמה 1. בניסוי שלנו, אב העורקים החזי העכברוש הודגרה גם עם רכב או prazosin α אדרנרגיים 1 אנטגוניסט לרצפטור (5 ננומטר) במשך שעה אחת לפני הוספת phenylephrine אגוניסט אדרנרגי 1 α לאמבטיה הרקמה ויצירת התכווצות. איור 2 מתנות שונה תוצאות של איור 1. התגובות הירוקות סומנו בהתכווצות המרבית מושגת על ידי PE סומנו כמקסימום, ההתכווצות המרבית ½ מסומן ככאלה ולאחר מכן קשור עם ריכוז PE שגרמה שתגובה. זיהוי ערכים אלה הוא זיהוי הריכוז היעיל של אגוניסט שמשיג תגובת מחצית מקסימום (50%) או ערך EC 50. למרבה הצער, שימוש בפרמטר אגוניסט תלויזה לבד כדי לקבוע יכול להיות מסובכים מאפיינים מחייבים קולט 9. באופן אידיאלי, ניסויים נוספים באמצעות יריבים הקולטן לאפשר החישוב של שני פרמטרים חשובים, כי הם מפתח להגדרת האינטראקציה בין תרופה וקולט: 10 -log של דיסוציאציה אנטגוניסט הקבועה (PK B) ו-log 10 של היריב טוחנת ריכוז דרוש כדי לעורר שינוי הכפול ימינה בעקומת ריכוז התגובה (PA 2) 10. שני K B והרשות פלסטיני 2 רווח התועלת שלהם מהעובדה שהם ערכי אגוניסט-עצמאי, ויישארו קבוע גם בין רקמות שונות 11. מהנתונים בתרשים 2, PK B יכול להיות מחושב באמצעות המשוואה הבאה ומבוסס על EC 50 ערכים מחושבים במקום אחר: EC 50 בהעדר prazosin = 2 x 10 -8 M EC 50 במראשהיגיון של prazosin = 7 x 10 -6 M לפתור עבור K B במשוואה הבאה: יומן (dr-1) = להיכנס [B] - יומן K B איפה: [B] = ריכוז antagonist, או 5 x 10 מ &#39;-9 יומן (5 x 10 -9 M) = -8.3 dr = יחס מינון של ערך EC 50 בנוכחות של אנטגוניסט / 50 EC בהעדר. אם יש תזוזה ימינה, ערך זה יהיה גדול יותר מפעם אחת. כך: dr = 7 x 10 -6 M / 2 x 10 -8 M או 700 x 10 -8 M / 2 x 10 -8 M = 700/2 = 350 מחליף [B] וdr: יומן (350-1) = -8 - יומן K B 2.54 = -8 - להיכנס KB PK B = 10.54 ערך זה לprazosin עולה בקנה אחד עם הערכים שהתקבלו כאשר prazosin אינטראקציה עם recept adrenergic 1 αאו 12,13, דבר המצביע על כך שהקולטן adrenergic תיווך התכווצות לphenylephrine הוא קולטן adrenergic α 1. כמה צעדים הם קריטיים להצלחה של ניסויים אלה. רקמות חייבת להישאר בPSS לאחר נתיחה כדי למנוע אובדן של כדאיות רקמות. יש כל הכנת השרירים איזומטרי יחסי אורך-מתח אופטימלי שיוצר כוח מקסימאלי נגד מתח פסיבי 14,15. לניסוי המתואר בפרוטוקול זה, מתח פסיבי אופטימלי נקבע בעבר על ידי מרווחי הוספה בקצרה של 0.5 גרם של מתח פסיבי לרקמות. הרקמה צריכה להתחיל בלי טון ואז אחרי 30 דקות של איזון, הרקמה אותגרה עם ריכוז מקסימאלי של KCl (80 מ&quot;מ), שנוצר צליל פעיל. לאחר מכן, הרקמות נשטפו והורשו לחזור לטון בתחילת מחקר. אחרי 15 דקות בתחילת המחקר, 0.5 גר &#39;נוסף של מתח פסיבי הוצב והתהליך הזה שוב ושוב עד לרמה שלמתח פעיל הושג עם מתח פסיבי נוסף. בניסויים ראשוניים, 4 סך גרם של מתח הפסיבי היה נחוש להשיג דור מתח פעיל מקסימאלי בטבעות אב העורקים, ובכך סכום כולל זו של מתח מושם על הטבעות לפני האיזון. פרוצדורלית, עדיף להתמקד יישום מתח פסיבי לפני, אבל ניתן לעשות זאת בכל עת לפני הניסוי. המשתרע על פני-רקמות, בכל נקודה בניסוי או לנתיחה, תשפיע לרעה על כדאיות רקמות ותוצאות ניסוי. זה הכרחי ביותר בעת ביצוע רקמות באמבטיה, כצעד זה יש הסבירות הגבוהה ביותר של מתיחה מוגזמת. שטיפה נאותה, במספר ומשך נדרשת לאפקטים לשחזור. אתגר שני מוקדם מדי אחרי אתגר ראשוני, או לפני הרקמות חזרו למתח בסיסי, יגרום לתגובות חריגות. אם לומדים יריבים / מעכבים הפיכים, לא צריכים לשטוף רקמות לפני אגוניסט בנוסף, כinhibiריכוז טור יהיה ירידה. ישנם יתרונות וחסרונות בולטים למבחני אמבטיה רקמות המבודדים. חסרונות: רקמות עלולות להיתקל בדרגות שונות של נזק במהלך ניתוח להסרת או מיקום של טבעות על ווים. מאז התא האנדותל הוא הציפוי הפנימי של טבעת אב העורקים, יש להקפיד על המיקום של הטבעת על ווים, כדי שלא לפגוע בשכבת תאים זו. רקמות יכולות להיות גם באורכים שונים במובהק מהזמן שבו הם קיימא באמבטיה הרקמות, ואת זה יש שייקבע; לא כל הרקמות זהות. לאורך שורות אלה, רקמות עשויות להשתנות בהיענות שלהם לאורך כל היום כך שהבקרה בזמן הפכה לשליטה הנדרשת עבור כל ניסוי. דוגמא טובה לכך היא קנה הנשימה חזיר גינאה שמשפרת במקסימום התכווצות ב -100% במהלך ניסוי 8 שעות טיפוסיות. תרופות שהן מסיסים היטב במים עלולות לעורר בPSS. לבסוף, מצטברnd תוספות שאינן מצטברות של תרופה שהיא אגוניסט עלול לגרום לתוצאות שונות אם הפחתת רגישות הקולטן לאגוניסט מתרחשת; אנגיוטנסין II הוא תרופה אחת כזו שמראה tachyphylaxis המהיר. יתרונות: אחד היתרונות העיקריים של ניסויי אמבטיה רקמה הוא שזה בזמן אמת; ניתן לראות את ניסוי עת התרחשותה ומהירות יכולה לעשות את המסקנות ולתכנן את הצעדים הבאים, כמו גם פתרון בעיות במהלך ניסוי. ניסוי לוקח יום לעשות. בדרך כלל ניתן להכין רקמות מרובות מחיה אחת כזאת שחיה יכולה לשמש כשליטה שלו, וזה מוסיף כוח לניסוי. אפשר גם לבודד את הרקמה מגורמים אחרים כדי לבחון את התגובה טהורה יחסית של הרקמה לתרופה. בניסויים במבחנה, כגון מערכת האמבטיה הרקמות מאפשרים גם שימוש בכמות קטנה של תרופה בהשוואה לניסוי in vivo. עיצוב ניסיוני הבסיסי שתואר במסמך זה יכול להיותשינוי נרחב כדי לאפשר הקלטה של ​​פרמטרים נוספים או ההקדמה של גירויים חיצוניים אחרים. לדוגמא, תוספת של אלקטרודות לאפשר לגירוי שדה חשמלי של עצבי innervating 16,17. עם התוספת של בדיקות תרמית או pH, ניתן גם למדוד את ההשפעות של טמפרטורה ו- pH על תגובות התכווצות 18,19. באופן דומה, חמצן ניתן להחליף באופן חלקי או במלואו עם N 2 כדי לבדוק את ההשפעות מושרה היפוקסיה. יתר על כן, אותם העקרונות הבסיסיים של מדידת התכווצות איזומטרי בשימוש בוידאו זה יכול לשמש לפיתוח מערכות המאפשרות מדידה במקביל לפיתוח מתח איזומטרי ושינויים בסידן תוך תאי 20. התמרה אות היא גם למדה בקלות, שכן מערכות קיימות שיכול במהירות להקפיא דגימת רקמה בתגובה, כך שהפעילות של מערכת מסלול העברת אותות ניתן לאמת ביוכימית. הווריאציה של סוסיםipment שיכול לשמש כדי לעשות את זה הוא עצום. מערכת זו כולה, כל היד שנבנתה או אוטומטית, ניתן לרכוש מחברות שונות מרובות. אמבטיות הרקמה ובעלי רקמת שימוש בפרוטוקול זה היו מנופח ביד (אמבטיות רקמה) ויד שנבנתה (בעלים) על ידי מכונה חנויות אוניברסיטת מישיגן בבית.

המשמעת של פרמקולוגיה השתמשה במערכת האמבטיה רקמה המבודדת למעלה מ -150 שנה. צדדיות של מערכת זו אפשרה למדענים ברחבי העולם כדי לאפיין קולטנים והעברת אותות קולט, עם הידע הזה עומד בבסיס הטיפולים שטופלו מיליוני אנשים עם מחלות או הפרעות כגון יתר לחץ דם, אי ספיקת לב, סוכרת, מחלות במערכת העיכול, שלפוחית ​​השתן הפרעות בתפקוד, אסטמה, ובליעה, לשם רק כמה. עד עצם היום הזה, האמבטיה הרקמה המבודדת נשארה פן חשוב של פיתוח תרופות ומחקר בסיסי, שכן היא מאפשרת לרקמות לתפקד כרקמה. בשיעור זה יופיטר, פרוטוקול רשמי משותף להפגין ניסוי חזותי ווירטואלי ניצול נתונים מניסוי מבודד רקמת אמבטיה המודד כיווץ איזומטרי, המאפשר אפיון רצפטור. היתרון העיקרי של שיטה זו הוא שרקמת חייםפונקציות nd בכללותה רקמה, עם תוצאה פיזיולוגית (כיווץ או הרפיה) שהוא רלוונטי לגוף. זה הוא סינתזה של צעדים (אינטראקציה תרופה-קולטן, הולכים אותות, דור שליח שני, שינוי ברגישות שריר חלק, ושינוי בתפקוד רקמות). בעוד שיטות אחרות מאפשרות לימוד של כל אחד משלבים הבאים (לדוגמא radioligand מחייב לזיקת סמים, מדידה של שליחים שני), טכניקת האמבטיה רקמה המבודדת מאפשרת אינטגרציה של כל 1 את הפעולות הבאות. יתרון נוסף הוא ששמירה על תפקוד רקמות מאפשרת חישוב של משתנים תרופתיים חשובים, כי הם יותר משמעותיים ברקמה לעומת הגדרה סלולרית; מדובר קרוב יותר לאופן שבו התרופות שנבדקו היו עובדות בגוף כולו.

<table><tbody><tr><td>תוכנת LabChart</td><td>ADInstruments</td><td></td><td>7.2</td></tr><tr><td>PowerLab (4 ערוצים)&nbsp;</td><td>ADInstruments</td><td>ML760</td><td></td></tr><tr><td>QuadBridge (4 ערוצים)</td> <td>ADInstruments</td><td>ML112</td><td>ML112</td></tr><tr><td>כבל מתאם דשא</td><td>ADInstruments</td><td>MLAC11</td><td>MLAC11</td></tr><tr><td>מתמר כוח תזוזה</td><td>דשא Grass Instrument Co</td><td>FT03</td><td>FT03</td></tr><tr><td>מתמר דשא כבל</td><td>Grass Instrument Co</td><td>TAC-7 REV-1</td><td></td></tr><tr><td>BNC לכבל</td> <td>BNCADInstruments</td><td>MLAC01</td><td></td></tr><tr><td>IsoTemp 2100</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td>IC-2100</td></tr><tr><td>אמבט רקמות</td><td>מקורות מרובים&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr>תמיסת <td></td><td></td><td>מלח פיזיולוגית</td><td>PSS</td></tr><tr><td>תפר משי קלוע</td><td>הרווארד מכשיר</td><td>51-7615</td><td>SP104</td></tr><tr><td>מעמד טבעת</td><td>Humboldt MFG Co</td><td>H-2122 7</td><td></td></tr><tr><td>חיתוך כלים</td><td>בעבודת יד עם צינורות סיליקון</td><td></td><td></td></tr><tr><td>טיגון</td><td>VWR Scientific</td><td>63010-100</td><td>R-3603</td></tr><tr><td>מהדקי צינור</td><td>Cole-Parmer Instrument Co</td><td>06832-08</td><td>SNP-8</td></tr><tr><td>50 מ"ל אמבט שרירים</td><td>Eberhartglass נושבת</td><td>מותאם אישית</td><td></td></tr><tr><td>250 מ"ל תאי חימום</td><td>Eberhartglass נושבת</td> צינור פיזור גז <td>מותאם אישית</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Ace Glass</td><td>7202-06</td><td>7202-02</td></tr><tr><td>מיקרומטר</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מעמדים מותאמים</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>אישיתמהדקים תלת-שיניים</td><td>VWR בינלאומי</td><td></td><td>Talon</td></tr><tr><td>S-connector</td><td>VWR International</td><td></td><td>Talon</td></tr><tr><td>רקמות ווים</td><td>תוצרת יד תוצרת בית</td><td>מותאם אישית</td><td></td></tr><tr><td>רקמות</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>דיסקציה Leica סטריאומיקרוסקופ MZ6</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10447254 סטריאומאסטר מיקרוסקופ סיבים אופטיים מקור אור</td><td>פישר סיינטי</td><td>12562-36</td><td>12562-36</td></tr><tr><td>תרבות פטרי צלחת</td><td>פיירקס</td><td></td><td>7740 זכוכית</td></tr><tr><td>סילגארד סיליקון אלסטומר</td><td>דאו קורנינג</td><td></td><td>סילגארד 170 ערכת</td></tr><tr><td>ואנאס מספריים</td><td>ג'ורג 'טימן & Co</td><td>160-150</td><td>160-150</td></tr><tr><td>ספלינטר & מלקחיים קיבוע</td><td>ג'ורג' טימן & Co</td><td>160-55</td><td>160-55</td></tr></tbody></table>

מדידה של תפקוד של שריר חלק ברקמות מבודדות אמבט-היישומים למחקר פרמקולוגיה

Measurement of Smooth Muscle Function in the Isolated Tissue Bath-applications to Pharmacology Research

בדיקות אמבטיית רקמות מבודדות הן כלי פרמקולוגי קלאסי להערכת יחסי ריכוז-תגובה במספר עצום של רקמות מתכווצות. בעוד שטכניקה זו מיושמת כבר למעלה מ-100 שנה, הרבגוניות, הפשטות והשחזור של בדיקה זו עוזרות לה להישאר כלי הכרחי עבור פרמקולוגים ופיזיולוגים כאחד. מערכות אמבטיית רקמות זמינות במגוון רחב של צורות וגדלים, המאפשרות למדען להעריך דגימות קטנות כמו עורקי מזנטרי של עכברים וגדולות כמו אילאום חזירי - אם לא גדול יותר. מרכזית במבחן אמבטיית הרקמות המבודדת היא היכולת למדוד שינויים תלויי ריכוז להתכווצות איזומטרית, וכיצד ניתן לתמרן את היעילות והעוצמה של אגוניסטים מתכווצים על ידי הגדלת ריכוזים של אנטגוניסטים או מעכבים. למרות שהעקרונות הכלליים נותרו דומים יחסית, ההתקדמות הטכנולוגית האחרונה מאפשרת עוד יותר צדדיות לבדיקת אמבט הרקמות על ידי שילוב תוכנת הקלטה וניתוח נתונים מבוססת מחשב. סרטון זה ידגים את תפקידה של אמבטיית הרקמות המבודדת למדידת ההתכווצות האיזומטרית של שריר חלק מבודד (במקרה זה טבעות אבי העורקים של בית החזה של חולדות), וישתף את סוגי הידע שניתן ליצור בטכניקה זו. כלולים תיאורים מפורטים של חיתוך והכנת רקמת אבי העורקים, מיקום טבעות אבי העורקים באמבט הרקמות ושיווי משקל רקמות תקין לפני הניסוי, בדיקות של כדאיות רקמות, תכנון ויישום ניסויים וכימות נתונים. אבי העורקים יחובר למתמרי כוח איזומטריים, שהנתונים מהם יילכדו באמצעות ממיר אנלוגי לדיגיטלי זמין מסחרית ומגבר גשר שתוכנן במיוחד לשימוש בניסויים אלה. התוכנה הנלווית למערכת זו תשמש להמחשת הניסוי ולניתוח נתונים שנלכדו.

במונחים של agonism, היעילות היחסית (E MAX) והעצמה (50 EC) של אגוניסט ברקמות נתון יכולות להיות מחושבת ובהשוואה לתגובות של אגוניסטים אחרים באותו הרקמה 1. בניסוי שלנו, אב העורקים החזי העכברוש הודגרה גם עם רכב או prazosin α 1 adrenergic אנטגוניסט לרצפטור (5 ננומטר) לשעה אחת לפני הוספת phenylephrine אגוניסט אדרנרגי α 1 לאמבטיה הרקמה ויצירת התכווצות (איור 1). 2 מתנות איור שונה תוצאות של איור 1. התגובות הירוקות סימנו ההתכווצות המרבית מושגת על ידי PE סומנה כמקסימום, ההתכווצות המרבית ½ המסומן ככאלה ולאחר מכן קשורים עם ריכוז PE שגרם שתגובה. זיהוי ערכים אלה הוא זיהוי הריכוז היעיל של אגוניסט שמשיג תגובת מחצית מקסימום (50%) או EC <sUB&gt; 50 ערך. זה היה donegraphically בתוכנת example.Computer זה שמשתמש בפונקציות לוגיסטי לעקומות sigmoidal יכולים לשמש לעקומה ראויה וחישוב EC 50 ערכים. ביצירה ופירוש התוצאות הללו, חשוב להשתמש בשני ריכוזים נמוכים וגבוהים של אגוניסט ליצור עקומת ריכוז התגובה. בלי מספיק נקודות כדי להראות בסיס יציב ורמה המרבית, ניתן להעריך EC 50 ו- E MAX בלבד. זה נעשה בצורה גרפית בדוגמא זו. תוכנת מחשב שמשתמשת בפונקציות לוגיסטי לעקומות sigmoidal יכולה לשמש לעקומה ראויה וחישוב EC 50 ערכים. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/52324/52324fig1highres.jpg" /> איור 1:, ba רקמת מים במעייל רקמות אמבט סכמטי Cartoon מייצג טבעת של רקמה ממוקמת בקיר דו-.<html> ה. זרימת החיץ ויצוא מוסדרים על ידי ברזלים זכוכית 3-בדרך שולבו בבסיס של החדר. O 2 / CO 2 הוא מבעבע בבאמצעות aerator שהוא חתום עם אטם כדי למנוע דליפה של PSS או גז. קלט מחזור נמוך מהתפוקה כדי לשמור על מחזור תקין ולמנוע היווצרות של כיסי אוויר שיגרמו disregulation טמפרטורה. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/52324/52324fig2highres.jpg" /> איור 2:. עכברוש בית החזה אב העורקים + האנדותל איור לעיל מתאר ארבעה ניסויים נפרדים (בעלי חיים שונים ועל ידי חוקרים שונים על עליות להגדיר שונות כפי שהוא מיוצג על ידי צבעים שונים) כדי לבדוק את היכולת של prazosin להעביר התכווצות מושרה PE. Prazosin (5 ננומטר) באופן ברור העביר ימינה עקומת התכווצות מושרה PE באופן מקביל. &gt; <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/52324/52324fig3highres.jpg" /> איור 3: עכברוש בית חזה אב העורקים + האנדותל הערכה גרפית של EC 50 ערכים לPE בהעדר (הרכב) ונוכחות (prazosin) של אנטגוניסט.. קו ירוק (C קבוצה) רק מסומן. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" fo:keep-together.within-page="always" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מלח </td><td> MW (ז / שומה) </td><td> 5 ליטר </td><td> מ&quot;מ FINAL </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> (גרם) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 58.45 </td><td> 37.99 </td><td> 130 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> 74.56 </td><td> 1.75 </td><td> 4.7 </td></tr><tr><td> KH2PO4 </td><td> 136.1 </td><td> 0.8 </td><td> 1.18 </td></tr><tr><td> MgSO4• 7H20 </td><td> 246.5 </td><td> 1.45 </td><td> 1.17 </td></tr><tr><td> NaHCO3 </td><td> 84.21 </td><td> 6.25 </td><td> 14.9 </td></tr><tr><td> דקסטרוז </td><td> 180.16 </td><td> 5 </td><td> 5.5 </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> 380 </td><td> 0.05 </td><td> 0.03 </td></tr></tbody></table> מתכון רגיל פיזיולוגית תמיסת מלח (PSS) תוכן של PSS-נאגר ביקרבונט השתמש בניסוי זה: טבלה 1.. נכללים המשקל המולקולרי של כל המלחים והסכום נוסף ל5 L של DH 2 O כדי להשיג את הריכוז הרצוי. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> ריכוז באמבטיה </td><td> תוספת של אגוניסט עשתה לאמבטיה </td></tr><tr><td> 1 x 10 -9 M </td><td> 50 מיליליטר 1 x 10 -6 M </td></tr><tr><td> 3 x 10 -9 M </td><td> 100 מיליליטר 1 x 10-6 M </td></tr><tr><td> 1 x 10 -8 M </td><td> 35 מיליליטר 1 x 10 -5 M </td></tr><tr><td> 3 x 10 -8 M </td><td> 100 מיליליטר 1 x 10 -5 </td></tr><tr><td> 1 x 10 -7 M </td><td> 35 מיליליטר 1 x 10 -4 M </td></tr><tr><td> 3 x 10 -7 M </td><td> 100 מיליליטר 1 x 10 -4 M </td></tr><tr><td> 1 x 10 -6 M </td><td> 35 מיליליטר 1 x 10 -3 M </td></tr><tr><td> 3 x 10 -6 M </td><td> 100 מיליליטר 1 x 10 -3 M </td></tr><tr><td> 1 x 10 -5 M </td><td> 35 מיליליטר 1 x 10 -2 M </td></tr><tr><td> 3 x 10 -5 M </td><td> 100 מיליליטר 1 x 10 -2 M </td></tr><tr><td> 1 x 10 -4 M </td><td> 35 מיליליטר 1 x 10 -1 M </td></tr></tbody></table> טבלה 2:. רקמות אמבט תוסף אגוניסט ריכוזי הסכום של אגוניסט שיש להוסיף לכל אמבט לפרוperly לבנות עקומות ריכוז תגובה מצטברות. ריכוז האמבטיה הרצויה מושגת באמצעות תוספת הסכומים רציפים של ריכוזים גוברים של אגוניסט. כל תוספת לוקחת בחשבון את הריכוז של אגוניסט כבר מקיים באמבטיה. הדבר נעשה כדי למזער את הגידול בהיקף באמבטיה הרקמות שכתוצאת משימוש כרכים הולכים וגדל של ריכוז יחיד של אגוניסט.

פרוטוקול זה מתאר את מדידת ההתכווצות האיזומטרית בתכשיר שריר חלק מבודד, באמצעות מערכת אמבט רקמות מבודדת ורכישת נתונים מבוססת מחשב.

Isolated tissue bath assays are a classical pharmacological tool for evaluating concentration-response relationships in a myriad of contractile tissues.  ...

המטרה הכללית של הליך זה היא למדוד את טונוס השריר החלק. מטרה זו מושגת תחילה על ידי דיסקציה והכנה של רקמות. השלב השני הוא קיבוע הרקמה בתוך אמבט רקמה מבודל.לאחר מכן נבדקת חיוניות הרקמה ונלקחות מדידות של כיווץ איזומטרי. בסופו של דבר, הכנת אמבט הרקמה המבודדת משמשת לבדיקת תפקוד רצפטורים, שילוח אותות של רצפטורים ותגובתיות של שריר חלק. באופן כללי, היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם הגמישות של המערכת, המהירות בה מושגים תוצאות ושמירה על שלמות הרקמה.שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות מרכזיות בכל תחום המשתמש בתרופות כדי להפריע לאותות של רצפטורים או להתכווצות של שריר חלק. ישנן מספר הכנות שיש להדגיש. חיוני לחמם מראש את מערכת אמבט הרקמה ל-37 °C על ידי הפעלת אמבט המים המחומם בעל הסחרור. המים חייבים לזרום לכל רכיב בחיבור המסועף הנמוך ביותר ולזרום החוצה בחיבור המסועף הגבוה ביותר.יש לחבר כל רכיב. יש לכיול את מדי הכוח (force transducers) ולהפעילים לפחות 15 דקות לפני הניסוי כדי להביא את טמפרטורתם לשיווי משקל. לאחר מכן, בעת חיבור הגז, יש לבדוק אם קיימות דליפות, ולאחר מכן להגביר את הלחץ במערכת.לאחר מילוי המערכת בתמיסה, ודאו כי ביצעתם הילוח (priming) והסרתם את כל בועות האוויר. מומלץ גם לבדוק את מאווררי אמבט הרקמה. אוורור תקין יפיץ את התרופות ביעילות, אך לא יערער את יציבות הרקמה מיד לפני הניסוי.בצעו נתיחה של הרקמה. לאחר הרדמת החולדה, צרו פניומותורקס (חזה אוורירי) באמצעות מספריים. גזרו לאורך הסרעפת בחלקו התחתון של כלוב הצלעות.לאחר מכן, חתכו מהחלק התחתון של כלוב הצלעות אל העצם הסטרנום וחלקו את הרקמה לשניים. פנו את האיברים שמעל עמוד השדרה כדי לאתר את האאורטה, הנמצאת ישירות לאורך עמוד השדרה. כעת נתקו את כל החיבורים לאאורטה וחתכו את האאורטה בניצב לעמוד השדרה בגובה הסרעפת.בשלב הבא, החזיקו בעדינות את האורטה והפרידו אותה מהעמוד השדרה. התחילו באזור הסרעפת התחתון הסמוך לעמוד השדרה והתקדמו לכיוון הלב. היזהרו שלא למשוך או להדק את רקמת האורטה, שכן פעולה זו עלולה לגרום לנזק מיידי לרקמה.הניחו את האאורטה בתוך צלחת ניתוח המכילה PSS. כעת קחו תיל והכינו בו זווית קטנה של 90 מעלות. בקצה אחד, עגנו את הקצה הזוויתי של התיל לבסיס של צלחת הניתוח.לאחר מכן, השחילו בזהירות את תיל ההובלה לתוך לומן של האורטה והחליקו את האורטה על גבי התיל. כאשר הקצה החופשי של התיל הופך לנראה, כופפו אותו בעדינות ודחפו אותו אל תוך הבסיס, ובכך ייצב את הרקמה. כעת, בעזרת מספרי ונוס קטנים ופינצטה, הסירו את הרקמה השומנית הפרי-וסקולרית ורקמות זרות אחרות עד שהאורטה התורקית תיראה לבנה וסיבית למדי.לאחר ניקוי רקמות עודפות, הסר בזהירות את האורטה הנקייה מהחוט. סיים שלב זה על ידי חיתוך האורטה לטבעות ברוחב של שלושה עד חמישה מילימטרים. השג טבעת אורטלית אחת.הכינו שני ווים לרקמה עם תפריים להבטחתם בתא הרחצה. וו אחד צריך להכיל תפר עם לולאה קשורה קטנה לחיבור למוט. עבור הוו השני נדרשת פיסת תפר באורך 10 עד 14 סנטימטרים.כדי לקשור קשר, הצמידו בזהירות זוג של ווים לרקמות הללו לכל טבעת אאורטלית. היזהרו לא לסבך את הוויים. לאחר מכן, העבירו כל פיסת רקמה לצלחת עם PSS בטמפרטורת החדר, כאשר מחזיק רקמות מקובע למעמד טבעות.בשלב הבא, השחיל את הלולאה הקשורה על הפין של המוט והשתמש בחלק הארוך של התפר כדי להחזיק את הרקמה למעלה. לאחר מכן, הכנס את המוט אל התא וודא שהמוטיב מקובע היטב. כעת, קשור את התפר מהוווק השארי אל חיישן הכוח.השאירו מספיק רפיפות בתפר, כך שניתן יהיה לכוונן את המתיחות בין מד הכוח לרקמה באמצעות המיקרומטר. חזרו על תהליך זה עבור כל טבעת בכל תא. כעת, הגדירו את המתיחות הפסיבית.השתמשו במיקרומטר כדי להעלות את המתיחה לשני גרמים והמתינו עד שהמתיחה של הרקמה תחדל מלהעלות. לאחר מכן, העלו את המתיחה בשני גרמים נוספים, ושוב, המתינו לשינוי במתיחה. לסיום.המתח כעת צריך להיות סביב 3.2 גרם. חזור על תהליך זה עבור כל טבעת בכל תא. לאחר קביעת כל המתחים הפסיביים, אפשר לרקמות להגיע לשיווי משקל למשך שעה.במהלך זמן זה, יש להחליף את ה-PSS כל 15 דקות ולהכין את ההערכים הנוספים לניסוי, כגון הכנת התרופות לקראת סיום תקופת ההשבחה. שטפו את הרקמה פעם אחרונה, שמרו את הנתונים ואפסו את כל הקלטים. לאחר מכן, בהתאם לפרטים המופיעים בפרוטוקול הכתוב, בצעו את הגירוי הראשוני.הקפידו לתעד פעולות אלו בתוכנה. לאחר הגירוי הראשוני, השינוי במתיחות יגיע למישור (plateau). לאחר מכן, שטפו את תסמיך הגירוי כך שטון הרקמה יחזור לרמת הבסיס.הניחו לרקמה לנוח בטון בסיס זה למשך כ-10 דקות, כאשר אמבט אחד יכיל את הנשאי (במקרה זה, מים) והשני את החומר השני. הוסיפו prazocin בכמות מספיקה להשגת ריכוז של 5 nanomolar באמבט. הניחו לאמבטי הרקמה להדגיר למשך שעה ללא שטיפה.במקביל, הגדירו את ריכוז הפנול ריין (phenol rine) במגוון רחב של ריכוזים לאורך עקומה לוגריתמית. לאחר שעה, הוסיפו לאמבט אגוניסט של פניל ריין (phenyl rine) בריכוזים עולים כדי ליצור תגובה ריכוזית מצטברת. לאחר כל הוספה, המתינו עד שהתגובה של הרקמה תגיע למישור (plateau) לפני הוספת הריכוז הבא.המשיכו להוסיף תמציתים עד שלא יחול שינוי נוסף בטון של הרקמה או עד שעקומת התגובה השלמה תגיע למישור (plateau). במקום זאת, אורטה תורקית הוכשרה באינקובציה עם POZ sim, אנטגוניסט לקולטן אדרנרגי alpha one, למשך שעה אחת לפני הוספת הפנילרין (phenyl rine), אגוניסט אדרנרגי alpha one, לאמבט הרקמה ויצירת עקומות תגובה מצטברות של התכווצות למקסום והחצי ממקסום ההתכווצויות של הפנילרין. רקמות ביקורת שחשפו את נשאי התמיכה (vehicle) בלבד מסומנות בירוק.החצי המקסימלי מזהה את הריכוז האפקטיבי של התרופה. אותן מדידות עבור הרקמה שעובדה ב-razin מופיעות בשחור. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיו בעלי הבנה טובה לגבי אופן מדידת תפקוד שריר חלק באמבט רקמה מבודד.

measurement-smooth-muscle-function-isolated-tissue-bath-applications

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

מדידות של Kv7 פעילות ערוץ (KCNQ) אשלגן בmyocytes העורק המבודד (באמצעות תיקון לצבוט טכניקות אלקטרו) במקביל למדידות של תגובות הכווץ / מרחיב (באמצעות myography לחץ) יכולות לחשוף פרטים חשובים על התפקידים של Kv7 ערוצים בפיזיולוגיה של שריר חלק של כלי דם ו פרמקולוגיה.

היכרות עם פונקצית עורקי שריר חלק Kv7 אשלגן ערוץ באמצעות אלקטרופיזיולוגיה קלאמפ תיקון וMyography לחץ

בmyography לחץ, קטע קטן בשלמות של כלי הוא רכוב על גבי שני cannulas קטן ודחוס כדי luminal לחץ מתאים. כאן, אנו מתארים את השיטה כדי למדוד את התגובה של vasorelaxation העכבר...

הערכת תפקוד עורקי התנגדות Murine באמצעות לחץ Myography

כתב יד זה מציג פשוט, אך רב עוצמה, בשיטה חוץ גופית להערכת התכווצות שריר חלק בתגובה לסוכנים תרופתיים או גירוי עצב. יישומים עיקריים הם הקרנת סמים ופיזיולוגיה רקמת הבנה, פרמקולוגיה, ופתולוגיה.

שריר חלק בשלפוחית ​​השתן רצועת התכווצות כשיטה להערכת נמוכה יותר בדרכי שתן פרמקולוגיה

שריר פפילרי חדרית עזב Murine יכול לשמש כדי לחקור התכווצות לב במבחנה. מאמר זה מתאר בפירוט את הבידוד ופרוטוקולי ניסוי ללמוד מאפייני התכווצות לב.

מדידות התכווצות שרירים בpapillary מבודדים לחקירת הלב Inotropy בעכברים

מאמר זה מתאר בפרוטוקולים ניסיוניים ללמוד שמחוץ התכווצויות של האדם myometrium ויישומם גילוי סמים. טכניקה זו משמשת כדי לשפר את ההבנה של פיזיולוגיה myometrial, פתופיזיולוגיה גם באשר לאמת נתונים תרופתי של הגששים מחקר חדשניים או סמים הפניות.

Contractility המידות של האדם הרחם שריר חלק לפיתוח התרופה עזרה

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את המושגים והיישום הטכני של טכניקת המיוגרפיה הטנסומטרית באמצעות מערכת מיוגרף רב-תאית בהערכת ex vivo ניסיונית של תפקוד אנדותל אבי העורקים של עכבר.

מדידה של כלי דם תלויי אנדותל באבי העורקים החזי של העכבר באמצעות מיוגרפיה של תא נפח קטן טנסומטרי

אנו מציגים שיטה לבידוד צינורות מעיים של חולדות ולהערכת ההשפעה של תרופות על המתח, התדירות והמשרעת שלהן במבחנה. שיטה זו מציעה גישה רבת ערך לחוקרים החוקרים את צינורות המעי.

שימוש במערכת זילוח רקמות חוץ גופית כדי לזהות את הפעילות התפקודית של צינורות מעי מבודדים בזמן אמת

פרטים שיטות ברזולוציה גבוהה...

מיקוד Ca 2 + איתור חלוף של שריר חלק

הכנת רקמות מתואר עבור להדמיה של מניפולציה ניסויית בזרימת הדם החי. בעכברים מורדמים זכר, רזה, שרירי מאוד vascularized cremaster מוכן מיקרוסקופיה intravital ללמוד רשתות כלי הדם כולל arterioles, נימים venules. הכנה זו היא מותאמת בקלות לחולדות ואוגרים.

Cremaster עכבר הכנה שריר עבור הדמיה של Intravital microcirculation

הקרינה מבוסס מדידה הכניסה חנות המופעל הסידן בתאים חיים: מתא הסרטן תרבותי כדי סיב שריר שלד

למדו למדוד כיווץ איזומטרי של שריר חלק בעזרת מערכת אמבט רקמות מבודדות. השיטה מאפשרת הערכת תפקוד קולטנים ותגובתיות תרופתית בחישוף עורקי של עכברוש.

מדידה של תפקוד של שריר חלק ברקמות מבודדות אמבט-היישומים למחקר פרמקולוגיה

גלה סרטונים נוספים