Name: הערכת היעילות של תרופות למלחמה בסרטן רגישות במבחנה ו In vivo (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-02-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 19 s
Description: למדו הערכת רגישות תרופות בסרטן באמצעות מדידת מטבוליזם תאי ותדירות גרורות. השיטה משתמשת במודל עוברי עוף וביוסנסורים לבחינת יעילות טיפולים נוגדי סרטן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו התאפשרה על ידי מענקים לJK ממרכזי אונטריו של אקסלנס וקרן המחקר לאונטריו. ברצוננו להודות לSiddika Pardhan וד&quot;ר פיטר פרגוסון לקבלת סיוע טכני בזמן צילומים.

הערה: הפרוטוקול הבא נועד לשימוש עם תאים חסיד. שינויים נדרשים ליישם את השיטה שלאינם חסיד תאים שגודלו בהשעיה. ניסויי CAM המתוארים בפרוטוקול מיועד לשימוש עם תאים המבטאים את סמן פלואורסצנטי (למשל, GFP, RFP, וכו &#39;). עוברי עוף בן תשעה יום נדרשים ביום 2 לפרוטוקול הניסוי לניסויי CAM. 1. הכנה וTransfection של תאים סרטניים עם Oligonucleotides antisense (ASOs) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בינוני לשאוב מבקבוק T75 (ים) המכיל תאים של עניין, לשטוף עם 1XPBS, ולהוסיף 2 מיליליטר של 0.25% טריפסין / EDTA. הוסף 10 מיליליטר של מדיום גידול מלא לכל בקבוק ולהעביר את התאים בפתרון לשפופרת 50 מיליליטר. ספירת התאים ולהתאים את עוצמת הקול, כך שהריכוז הסופי הוא 1.0x10 5 תאים לכל מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תווית שתי קבוצות של צלוחיות T25: קבוצה אחת תכיל שמונה צלוחיות, שכותרתו 1-8, ויהיה uSED לניסוי מדידת חילוף חומרים בזמן אמת; והקבוצה השנייה גם תכיל 8 צלוחיות ותשמש לניסוי CAM עובר עוף. הוסף 2 מיליליטר של תאים בפתרון לכל בקבוק ומקום בחממה (37 ° C, 5% CO 2 O / N). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למחרת בבוקר (יום 0, הזמן 0), תווית שלושה 5 מיליליטר צינורות כדלקמן: (ASO ללא מיקוד או siRNA) שליטה, &quot;היעד של עניין&quot; (כלומר, ASO מיקוד או siRNA), וLipofectamine 2000 (או דומה מגיב transfection). לדלל את פתרונות המניות ASO לריכוז המתאים עם מדיום חופשי בסרום בצינור המתאים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף את הסכום הנדרש של מגיב transfection לצינור המתאים ודגירה במדיום סרום ללא למשך 5 דקות. מוסיף את הפתרון מגיב transfection לצינורות ASO דגירה במשך 20 דקות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 250 μl של פתרון מגיב transfection שליטת ASO לכל אחד מצלוחיות 1-4 בכל קבוצה, ו- 250μl של פתרון &quot;היעד של עניין&quot; ASO מגיב transfection לכל אחד מצלוחיות 5-8 בכל קבוצה. דגירה של 4 שעות (37 ᵒC, 5% CO 2). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך דגירה, לבצע את הפעולות מתוארות בסעיף 2.1. לאחר הדגירה, להוסיף 3 מיליליטר של מדיום מלא לכל בקבוק בקבוצת ניסוי CAM ולחזור לO החממה / N (37 ᵒC, 5% CO 2). לעבד את קבוצת ניסוי חילוף חומרים לפי התיאור בסעיף 2.2. לעבד את ניסוי CAM נקבע לפי התיאור בסעיף 4. </li></ol></li></ol> 2. biosensor צ&#39;יפ הכנה וזריעת תאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסביבת סטרילית, בזהירות לשטוף שישה שבבי biosensor עם 400 μl של PBS. לעקר את השבבים עם 400 μl של 70% אתנול עבור 20 דקות. לשטוף שלוש פעמים עם 400 μl של PBS. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את השבבים בתוך cultur רקמות סטרילייםמנות דואר על מנת למנוע זיהום. הנח שלושה שבבים בצלחת שכותרתו &quot;שליטה&quot;, ושלוש בצלחת שכותרתו &quot;יעד של עניין&quot;. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תווית שני צינורות 50 מיליליטר כ &#39;שליטה&#39; ו &#39;יעד של עניין &quot;. לשטוף את התאים עם PBS ולהוסיף נפח מתאים של 0.25% טריפסין / EDTA. חכה עד שמתנתק monolayer ולאסוף את התאים מבקבוק אחד. להפקיד את הפתרון לתוך הצינור המתאים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת התאים ולהתאים את עוצמת הקול, כך שהריכוז הסופי הוא 6.0x10 5 תאים / מיליליטר. צנטריפוגה ו resuspend התאים אם הריכוז הראשוני הוא נמוך מדי. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 250 μl של פתרון התא לכל שבב biosensor בקבוצה המתאימה (עבור הסכום כולל של 1.25x10 5 תאים לכל שבב). בצע קבוצה אחת המשימה זו בכל פעם כדי למזער את הסיכון של מבלבל את השבבים. מניחים את הכלים סטריליים המכילים שבבים בתוך תא לחות על מנת למנוע אידוי, ולמקם את צ&#39;ה לחותmber בחממה O / N (37 ᵒC, 5% CO 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למחרת בבוקר (יום 1), לשאוב בזהירות בינונית מכל שבב ולהחליף אותו עם 250 μl של מדיום גידול בתוספת סרום 0.2% שור עוברי (FBS) ו1x פניצילין וסטרפטומיצין (P / S). דגירה של 4 שעות (37 ᵒC, 5% CO 2). </li></ol> הכנת מערכת 3. מטבוליזם מדידה ופתרון הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך הדגירה, להכין את הפתרונות הנדרשים סמים ומערכת מדידת חילוף חומרים לassay הקרוב. הערה: מערכת מדידת חילוף חומרים מכילה בסך הכל שישה מודולים. כל מודול מכיל שבב אחד לכל ניסוי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחלק את assay לקבוצות הניסוי הבא: שבב אחד מכל אחת מ&#39;השליטה &#39;ו&#39; היעד של העניין &quot;קבוצות לקבל רכב למשך assay; שני שבבים מכל קבוצה על מנת לקבל טיפול תרופתי לתקופה מוגדרת של זמן במהלךssay, ואחריו רכב במהלך תקופת המתנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ללימודי רגישות סמים, לשנות את האורך, עיתוי, וריכוז של טיפול תרופתי כדי להתאים את התרופה המסוימת בשאלה. הערה: לציספלטין, השלבים הבאים נקבעו באופן אמפירי עם תאי A549, ועשויה להשתנות בהתאם לשורת תאים. לבצע את כל השלבים עם קצב זרימת ברירת המחדל של 4 μl / min. 6 שעות של מדיום + FBS 0.2% הצמיחה ו1x P / S 24 שעות של 6 מיקרומטר ציספלטין במדיום + 0.2% FBS 1x P / S 24 שעות של מדיום + FBS 0.2% הצמיחה ו1x P / S 18 שעות של מדיום + FBS 0.2% הצמיחה ו1x P / S 4 שעות של 0.1% Triton-X הערה: סטיות מהפעולות הבאות תדרוש חישוב כדי לקבוע את הנפח הנדרש של פתרונות בינוניים ותרופה המבוססת על קצב הזרימה ומשך הניסוי הרצויים. הסעיפים שלהלן מבוססים על הצעדים שתוארו לעיל. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תווית ולמלא ארבע עשרה צינורות 50 מיליליטר עם 50 מיליליטר של 0.2% FBS מדיום גידולד 1x P / S. מניחים שישה במתלות צינור מערכת מדידת חילוף חומרים אחד, שש באחר, ושני הנותרים במתלים צינור שלישי שמכיל גם צינורות עם ציספלטין. לאטום את שני המדפים הראשונים עם קרום חדיר אוויר על מנת למנוע אידוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון של 6 ציספלטין מיקרומטר (בנפח המתאים) בFBS + 0.2% בינוניים עם 1x P / S. לוותר הנפח הנדרש של פתרון ציספלטין לארבעה 50 מיליליטר צינורות שכותרתו. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הצינורות בארבעת חריצים שנותרו במתל צינור מדידת חילוף חומרים שלישיים. ודא שהצינורות ממוקמים בחריצים המתאימים שמתאימים לbiomodules הרצוי. לאטום את הצינורות עם קרום חדיר אוויר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן ולתייג שישה צינורות 50 מיליליטר ולמלא אותם עם 20 מיליליטר כל אחד מ0.1% פתרון Triton-X במדיום. פתרון Triton-X יהיה lyse כל תאים הנותרים ולספק ערך &#39;אפס&#39; לכל שבב. מניחים את הצינורות במתלים צינור יחידת מדידת חילוף החומרים רביעי ולאטום שנינותh קרום permable אוויר על מנת למנוע אידוי מוגזם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען את השבבים לbiomodules וליזום את הניסוי. </li></ol> ניסוי CAM 4. טיפול תרופתי והזרקה הערה: השלבים והליך הכנת עוברי עופות לניסוי CAM מתוארים במקום אחר 19 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בגין עיבוד CAM ניסוי 48 לאחר transfection שעות (יום 2). תת-לחלק את &quot;שליטה&quot; ו- &quot;היעד של העניין&quot; קבוצות לשתי צלוחיות לרכב, ושניים לציספלטין. לשאוב את המדיום מהצלוחיות ולחדש עם או 3 מיליליטר של מדיום חדש, או 6 מיקרומטר ציספלטין. דגירה של 6 שעות (37 ᵒC, 5% CO 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב את המדיום, ולאחר מכן לשטוף וtrypsinize התאים; לאסוף את תאי trypsinized בפתרון לארבעה 15 מיליליטר צינורות שכותרתו כראוי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה ולשטוף את התאים שלוש פעמים עם PBS. להשעות מחדש את התא גלולה ב 5 מיליליטר של PBSd לספור את התאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כוון את עוצמת הקול, כך שריכוז התא הסופי הוא 1.0x10 6 תאים / מיליליטר. מעביר את פתרון התא לתוך 5 מיליליטר צינורות שכותרתו להזרקה, ומניח על קרח. להפוך את הצינורות בעדינות לפני הזרקה כדי להבטיח שהתאים מתערבבים היטב. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להפריש סכום כולל של 24 עוברי עופות (בן 9 ימים) להזרקה (6 בכל קבוצה). לבצע ההזרקה באמצעות מחט זכוכית מחוברת לצינור גמיש מחובר למזרק 1 מיליליטר. פרט ביצוע ההזרקה צריך להיות עיוור כדי קבוצת הטיפול. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מיקרוסקופ סטריאו, להזריק 1.0x10 5 תאים בנפח של 100 μl למחזור דם הוורידים של CAM. השתמש בטכניקה איטית, פועמת להזריק נפח המלא של תאים. בעדינות טיפת אתר ההזרקה עם רך לנגב לבלום את זרימת הדם ולספוג כל דליפה. כל תווית מיכל עובר כראוי לאחר כל הזרקה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאשר את קיומו וdistribution של תאי ניאון בכלי הדם של CAM לאחר הזרקה על ידי הדמיתם באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי. שימו לב לכל עוברים בו המספר של תאים סרטניים נראה נמוך, או ההפצה היא עניה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את עוברי העוף בתא לחות ולאחסן אותם בחממה (37 ° C, לחות 60%). חכה 7-9 ימים לפני ספירת מוקדים גרורתי. </li></ol> 5. גרורתי פוקוס ספירה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך תקופת הדגירה 7-9 היום, לפקח על העוברים וזורקים כל מתים. ודא שתא לחות נותר לח בכל העת במהלך תקופת הדגירה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מיקרוסקופ סטריאו ניאון בהגדלה 20X, לסרוק את כל פני השטח העליונים של CAM העובר בדפוס קבוע, כמו רשת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספור את מספר המוקדים גרורתי בכל שדה הראייה, ואז עולה בקנה אחד המספר לסך סופי לכל עובר. עושה זאת במשך ששת העוברים בכל קבוצה תספק o מספר ממוצעתמוקדים גרורתי f לכל טיפול. </li></ol>

<ol><li>Bouwman, P., Jonkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+deregulated+DNA+damage+signalling+on+cancer+chemotherapy+response+and+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">The effects of deregulated DNA damage signalling on cancer chemotherapy response and resistance.</a> Nat Rev Cancer. 12, 587-598 (2012).</li>
<li>Bozic, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolutionary+dynamics+of+cancer+in+response+to+targeted+combination+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Evolutionary dynamics of cancer in response to targeted combination therapy.</a> Elife. 2, e00747(2013).</li>
<li>Diaz, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+evolution+of+acquired+resistance+to+targeted+EGFR+blockade+in+colorectal+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The molecular evolution of acquired resistance to targeted EGFR blockade in colorectal cancers.</a> Nature. 486, 537-540 (2012).</li>
<li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hallmarks+of+cancer%3A+the+next+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144, 646-674 (2011).</li>
<li>Rytelewski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+BRCA2+and+Thymidylate+Synthase+Creates+Multidrug+Sensitive+Tumor+Cells+via+the+Induction+of+Combined+%27Complementary+Lethality%27%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther+Nucleic+Acids%22%5BJournal%5D)">Inhibition of BRCA2 and Thymidylate Synthase Creates Multidrug Sensitive Tumor Cells via the Induction of Combined 'Complementary Lethality'.</a> Mol Ther Nucleic Acids. 2, e78(2013).</li>
<li>Lord, C. J., Ashworth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+DNA+damage+response+and+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The DNA damage response and cancer therapy.</a> Nature. 481, 287-294 (2012).</li>
<li>Helleday, T., Petermann, E., Lundin, C., Hodgson, B., Sharma, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+repair+pathways+as+targets+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">DNA repair pathways as targets for cancer therapy.</a> Nat Rev Cancer. 8, 193-204 (2008).</li>
<li>Shaheen, M., Allen, C., Nickoloff, J. A., Hromas, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthetic+lethality%3A+exploiting+the+addiction+of+cancer+to+DNA+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Synthetic lethality: exploiting the addiction of cancer to DNA repair.</a> Blood. 117, 6074-6082 (2011).</li>
<li>Green, S., Benedetti, J., Smith, A., Crowley, J. Clinical trials in oncology. 28, CRC press. (2012).</li>
<li>Begley, C. G., Ellis, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+development%3A+Raise+standards+for+preclinical+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Drug development: Raise standards for preclinical cancer research.</a> Nature. 483, 531-533 (2012).</li>
<li>Galluzzi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+definitions+of+cell+death+subroutines%3A+recommendations+of+the+Nomenclature+Committee+on+Cell+Death+2012%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Molecular definitions of cell death subroutines: recommendations of the Nomenclature Committee on Cell Death 2012.</a> Cell Death Differ. 19, 531-533 (2012).</li>
<li>Ruggeri, B. A., Camp, F., Miknyoczki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+disease%3A+pre-clinical+animal+models+of+cancer+and+their+applications+and+utility+in+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Animal models of disease: pre-clinical animal models of cancer and their applications and utility in drug discovery.</a> Biochem Pharmacol. 87, 150-161 (2014).</li>
<li>Kwon, M. C., Berns, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+for+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Mouse models for lung cancer.</a> Mol Oncol. 7, 165-177 (2013).</li>
<li>Young, M., Ordonez, L., Clarke, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+are+the+best+routes+to+effectively+model+human+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Oncol%22%5BJournal%5D)">What are the best routes to effectively model human colorectal cancer.</a> Mol Oncol. 7, 178-189 (2013).</li>
<li>Sharma, S. V., Haber, D. A., Settleman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+line-based+platforms+to+evaluate+the+therapeutic+efficacy+of+candidate+anticancer+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Cell line-based platforms to evaluate the therapeutic efficacy of candidate anticancer agents.</a> Nat Rev Cancer. 10, 241-253 (2010).</li>
<li>Garnett, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+identification+of+genomic+markers+of+drug+sensitivity+in+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Systematic identification of genomic markers of drug sensitivity in cancer cells.</a> Nature. 483, 570-575 (2012).</li>
<li>Alborzinia, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+monitoring+of+cisplatin-induced+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Real-time monitoring of cisplatin-induced cell death.</a> PLoS One. 6, e19714(2011).</li>
<li>Cvetkovic, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KISS1R+induces+invasiveness+of+estrogen+receptor-negative+human+mammary+epithelial+and+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">KISS1R induces invasiveness of estrogen receptor-negative human mammary epithelial and breast cancer cells.</a> Endocrinology. 154, 1999-2014 (2013).</li>
<li>Leong, H. S., Chambers, A. F., Lewis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+cancer+cell+migration+and+metastatic+growth+in+vivo+in+the+chick+embryo+using+fluorescence+intravital+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Assessing cancer cell migration and metastatic growth in vivo in the chick embryo using fluorescence intravital imaging.</a> Methods Mol Biol. 872, 1-14 (2012).</li>
<li>Hung, Y. P., Albeck, J. G., Tantama, M., Yellen, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+cytosolic+NADH-NAD%28%2B%29+redox+state+with+a+genetically+encoded+fluorescent+biosensor%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Imaging cytosolic NADH-NAD(+) redox state with a genetically encoded fluorescent biosensor.</a> Cell Metab. 14, 545-554 (2011).</li>
<li>Tantama, M., Hung, Y. P., Yellen, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+intracellular+pH+in+live+cells+with+a+genetically+encoded+red+fluorescent+protein+sensor%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Chem+Soc%22%5BJournal%5D)">Imaging intracellular pH in live cells with a genetically encoded red fluorescent protein sensor.</a> J Am Chem Soc. 133, 10034-10037 (2011).</li>
<li>Rytelewski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BRCA2+inhibition+enhances+cisplatin-mediated+alterations+in+tumor+cell+proliferation%2C+metabolism%2C+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Onc%22%5BJournal%5D)">BRCA2 inhibition enhances cisplatin-mediated alterations in tumor cell proliferation, metabolism, and metastasis.</a> Mol. Onc. 8 (8), 1429-1440 (2014).</li>
</ol>

יש לי המחברים אין לחשוף.

בשל העלות הכרוכה והסיכון כרוך בניסויים קליניים, יש צורך לפתח טוב יותר ויותר מחמיר מתודולוגיית בדיקות פרה-קלינית להעריך כראוי משטרי טיפול אנטי-סרטני רומן. שיטות קיימים כיום נפוצה בשימוש כל חולשות התערוכה שעלולה להגביל את היכולת שלהם להבחין בין מטרות / סוכנים טיפוליים פוטנציאל מבטיחים, ואלה שעשויים להיות פחות יעילים. אנחנו המצאתי פרוטוקול להעריך גישות אנטי-סרטניות חדשות שמטפלות ברבים מהחסרונות של שיטות מסורתיות. תכ...

רכש התנגדות לממוקדת ו / או טיפול בסרטן ציטוטוקסיות היא בעיה קלינית חשובה שיכול להוביל לכישלון טיפול, התקפים, והגדיל את תמותת חולה 1. על רקע הרמה הגבוהה של ההטרוגניות ברוב הגידולים, זה ודאות מתמטית שגידול של מספר תאים גבוה מספיק יכיל תת-קבוצה של תאים עמידים לטיפולים בודדים או בשילוב מיקוד מסלולים מולקולריים שבו תאים אלה תלויים להישרדות 2,3. תאי גידול מסוג זה יכול להיות שנבחר באופן חיובי לטיפול ב, שמוביל להישנות מחלה. פיתוח של טיפולים חדשניים שבו זמנית למקד מנגנוני הישרדות של תאי הסרטן שונים, לפני או אחרי בחירה בתיווך טיפול, לכן חשוב מבחינה קלינית. רמה גבוהה של חוסר יציבות הגנום ומוטציה בגנומים גידול היא מאפיין בסיסי שמבדיל את התאים סרטניים לתאי מארח שאינו סרטני 4. כתוצאה מכך, usefuאסטרטגית l כדי להגדיל את האפקטיביות של כימותרפיה פוגע ב- DNA ולמנוע את התפתחותה של התנגדות היא לעכב באופן פעיל בתיקון ה- DNA בתאי גידול 5. זהו שדה פעיל של חקירה ומגוון רחב של יעדי תיקון DNA רומן נבדקים בסביבה פרה-קלינית. מספר המולקולה קטנה או המעכבים מבוססי antisense של מטרות אלו פותחו ועוברים בדיקת 6-8. המטרה היא לזהות את המועמדים פרה-קליניים המבטיחים ביותר ולהעריך את הבטיחות והיעילות שלהם בניסויים קליניים. העלות הגבוהה של ניסויים קליניים ואת הסיכון לכשל (עבור מגוון רחב של סיבות, כולל הערכה טרום-קלינית תת-אופטימלי) הם מכשולים אדירים להתקדמות בפיתוח הטיפולים החדשים 9. השימוש במודלים מתאימים וקפדניים פרה-קליניים להעריך כראוי חדש מטרות טיפוליות ותרופות מועמד עלול להפחית את שיעור כישלון הגבוה של ניסויים קליניים 10 </sup&gt;. כמה שיטות פרה-קליניות נפוצה בשימוש כדי להעריך את היעילות של טיפולים אנטי-סרטני רומן הם: א) מדידה של היכולת להפחית שגשוג תאים סרטניים במבחנה (מבחני התפשטות תאים), ב) הפחתה מושרה טיפול בקיבולת של תאי גידול ל מושבות בתרבית רקמת טופס (מבחני הקמת מושבה), ג) הפחתה מושרה טיפול בפעילות המטבולית של תאי גידול במבחנה (המרה חיזור-צבע), ד) אינדוקציה מושרה טיפול של מוות של תאים סרטניים במבחנה (אפופטוטיים, נימקי, autophagic, הקשורים עם מיטוזה ואחרים) 11, וה) in vivo טיפול-induced הפחתה של צמיחה או אבלציה של xenografts אדם והעכבר 12-14. חולשה העיקרית של מבחנה השיטות המפורטות בהיא שאף אחד מהם לספק הערכה בזמן אמת מתמשכת של השפעת טיפולי מועמד. במקום זאת, הם מספקים מידע רק בנקודתי זמן שנבחרו באופן נרחב מופרדים,במהלך הטיפול. מדידות כאלה הצטמצמו יכולת לשקף את העוצמה ועיתוי של תגובות תאים סרטניים בצורה מדויקת. בvivo מודלים xenograft העכבר מוגבלים גם על ידי עלות גבוהה, משך זמן להשלמת, וסיכון של עיתוי אופטימלי מינון וטיפול (תזמון). בנוסף, יש ראיות לכך שמודלי xenograft המכרסמים הם מנבאים מוגבלים של יעילות קלינית בבני אדם, בהשוואה להערכה במבחנה של תגובות של תאים סרטניים אנושיים ראשוניים ושורות תאי גידול אנושי הוקמו להתערבויות טיפוליות מועמד 15,16. אנחנו המצאתי פרוטוקול שילוב רומן להעריך שילובי תרופות חדשים מראש קליני, באופן שמטפל בחולשות של ההליכים נפוצים יותר מפורטים לעיל. במקום של שגשוג, יצירת מושבות, או מבחני המרת חיזור-צבע, השתמש יחידת מדידת חילוף חומרים לנתח הידבקות תא, נשימה, והחמצה בזמן אמתבמהלך תקופת הטיפול כל 17. במקביל, אנו חקרנו את ההשפעות של שילוב הטיפול בvivo באמצעות עובר עוף מודל chorioallantoic קרום (CAM) של פלישה וגרורות 18,19. אנחנו השתמשנו בשיטות אלה כדי להעריך את היכולת של מולקולת אנטיסנס קצר (ASO) מיקוד BRCA2 להגברת היעילות של ציספלטין התרופה כימותרפיות הנפוצה.

<table><tbody><tr><td>תאי A549</td><td>ATCC</td><td>CCL-185</td><td>http://www.atcc.org/products/all/CCL-185.aspx</td></tr><tr><td>סרט AeraSeal</td><td>Carl Roth GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>AMEM</td><td>Wisent Bioproducts</td><td>210-011-QK</td><td></td></tr><tr><td>Antisense oligodeoxynucleotides</td><td>Avecia</td><td></td><td>BRCA2 רצף מטרה: 5' - UAAGGAACGUCAAGAGAUAC - 3' (בסיסים 7241-7259)</td></tr> <tr><td>Axio Zoom V16 מיקרוסקופ</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td>http://www.zeiss.ca/microscopy/en_ca/products/stereo-zoom-microscopes/axio-zoom-v16.html</td></tr><tr><td>Bionas Biosensor Chips</td><td>Bionas GmbH ו-Micronas GmbH</td><td></td> BIS8001D-Bionas <td></td></tr><tr><td>Discovery 2500 System&nbsp;</td><td>Bionas GmbH</td><td></td><td>http://www.bionas-discovery.com/prodservices/instruments/system2500/</td></tr> <tr><td>Cisplatin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>479306</td><td></td></tr><tr><td>ביצי עוף מופרות</td><td>ממקור מקומי</td><td></td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי&nbsp;</td><td>ג'יבקו - לייף טכנולוגיות</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ליפופקטמין 2000&nbsp;</td><td>Invitrogen - Life Technologies&nbsp;</td><td>12566014</td><td></td></tr><tr><td>http://www.lifetechnologies.com/ca/en/home/life-science/protein-expression-and-analysis/transfection-selection/lipofectamine-2000.html PBS</td><td>Wisent Bioproducts</td><td>311-010-CL</td><td></td></tr><tr><td>טריפסין (0.25%)/EDTA</td><td>Wisent Bioproducts</td><td>325-043-CL</td><td></td></tr></tbody></table>

הערכת היעילות של תרופות למלחמה בסרטן רגישות<em&gt; במבחנה</em&gt; ו<em&gt; in vivo</em

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

בשל הרמה הגבוהה של הטרוגניות ומוטציות הגלומות בסרטן בבני אדם, טיפולי סוכן יחידים, או משטרי שילוב הממקדים את אותו המסלול, צפויים להיכשל. דגש צריך להיות ממוקם על העיכוב של מסלולים כי הם אחראים להתנגדות פנימית ו / או להתאמה לטיפול. שדה פעיל של החקירה הוא הפיתוח והבדיקה של מעכבי תיקון דנ&quot;א המקדמים את הפעולה של, ולמנוע התנגדות ל, נפוץ כימותרפיה והקרנות. אנחנו השתמשנו בפרוטוקול רומן כדי להעריך את היעילות של עיכוב BRCA2 כאמצעי לרגישות תאים סרטניים לציספלטין התרופה המזיק DNA. חילוף חומרים בתא גידול (החמצה ונשימה) היה פיקוח בזמן אמת, לתקופה של 72 שעות כדי להתוות את יעילות טיפול בדקה אחרת דקת בסיס. בשילוב, ביצענו הערכה של תדירות גרורתי באמצעות קרום עובר עוף chorioallantoic (רמ&quot;א) מודל של extravasation ופלישה. זהפרוטוקול כמה כתובות של החולשות של שימוש נפוץ במבחנה ובשיטות vivo להעריך משטרי טיפול בסרטן רומן. ניתן להשתמש בו, בנוסף לשיטות נפוצות כגון מבחני שגשוג תאים, מבחני מוות של תאים, ובמחקרי xenograft עכבריים vivo, להפלות באופן הדוק יותר בין יעדי מועמד וסוכנים, ובחר את המועמדים המבטיחים ביותר רק להמשך פיתוח.

תוצאות ונתונים מותאמים באישור העבודה שפורסמה 22. עיכוב BRCA2 גורם לירידה בנשימה בתאי גידול ציספלטין טופל תאים אנושיים ריאות A549 סרטן שטופלו ב- BRCA2 מיקוד ASO וציספלטין הציג ירידה מוקדמת ובלתי הפיכה בנשימה, בהשוואה לתאים שקיבלו שליטה ASO וציספלטין לבד; לאחר 24 שעות של טיפול ציספלטין ההבדל בנשימה בין BRCA2 ASO והשליטה ASO תאי...

כאן, ניטור בזמן אמת של חילוף החומרים של תאי הגידול, בשילוב עם מודל ממברנה כוריו-אלנטואית של עובר עוף (CAM) של גרורות, משמשים להערכת מטרות/סוכנים אנטי-סרטניים חדשים על יכולתם לעורר רגישות לתאי גידול לכימותרפיה הפוגעת ב-DNA.

הערכת היעילות של תרופות למלחמה בסרטן רגישות<em&gt; במבחנה</em&gt; ו<em&gt; In vivo</em

Due to the high level of heterogeneity and mutations inherent in human cancers, single agent therapies, or combination regimens which target the same ...

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא להעריך את היעילות של רגישות לתרופות לסרטן על ידי מדידת שינויים בחילוף החומרים של התאים במבחנה ותדירות גרורתית in vivo. זה מושג על ידי טרנסקטציה ראשונה של תאים סרטניים במבחנה עם מולקולות אנטי-סנס כדי להפיל את המטרה המעניינת. לאחר מכן, התאים המועברים מצופים על שבבי חיישנים ביולוגיים ונטענים למערכת מדידת חילוף חומרים כדי לספור שינויים בהחמצה, בנשימה ובהידבקות במהלך טיפול תרופתי.בנפרד, תאים שעברו טרנספטציה מטופלים בתרופה ומוזרקים למחזור הוורידי של עובר תרנגולת על מנת להעריך את ההשפעות על התדירות הגרורתית. התוצאות מראות רגישות לתרופות לסרטן כפי שמומחש על ידי שינויים בחילוף החומרים של התאים ובתדירות גרורתית. טכניקה זו מרחיבה את פיתוח הטיפול בסרטן מכיוון שהיא מאפשרת הערכה בו זמנית של פרמטרים שלא תמיד נלקחים בחשבון במהלך בדיקות פרה-קליניות קונבנציונליות של מטרות או תרכובות תרופתיות.למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנה לגבי מטרות תרופות חדשות המעורבות בתיקון DNA, ניתן ליישם אותה גם לאימות מטרה במערכות אחרות כגון בקרת מחזור התא. לאחר העברת תאי גידול עם אוליגונוקלאוטידים אנטיסנס, על פי פרוטוקול הטקסט בסביבה סטרילית, השתמש ב-400 מיקרוליטר של PBS כדי לשטוף בזהירות שישה שבבי חיישן ביולוגי כדי לעקר את השבבים, הסר את ה-PBS והוסף 400 מיקרוליטר של 70% אתנול דגירה למשך 20 דקות לפני השימוש ב-PBS כדי לשטוף את השבבים שלוש פעמים. מניחים שלושה צ'יפס כל אחד בכלי תרבית סטריליים, מסומנים בבקרה ויעד מעניין, ומסמנים שני צינורות של 50 מיליליטר בצורה דומה.לאחר מכן, השתמש ב-PBS כדי לשטוף את התאים שעברו טרנספטציה לפני הוספת נפח מתאים של 0.25% טריפסין EDTA, המתן עד שהחד-שכבה תתנתק והעביר את תרחיף התא לצינור המתאים. לאחר ספירת התאים, התאם את הנפח כדי להגיע לריכוז סופי של 6.0 כפול 10 לתאים החמישיים למיליליטר על ידי הוספת מדיום או ריכוז התאים. הכנת קבוצה אחת בכל פעם, הוסף 250 מיקרוליטר של תמיסת תאים לכל שבב חיישן ביולוגי.הניחו את הכלים הסטריליים המכילים את הצ'יפס בתוך תא לחות כדי למנוע אידוי ודגרו למשך הלילה כדי לבצע מדידות חילוף חומרים בהתאם למתווה הניסוי המפורט בפרוטוקול הטקסט תווית 1450 מיליליטר צינורות והוסיפו 50 מיליליטר של צמיחה, בינונית פלוס 0.2% FBS ו-x פניצילין וסטרפטומיצין. או נ.ב. הנח שישה צינורות במערכת מדידת חילוף חומרים אחת, מתלה צינורות שש באחרת ואת הצינור הנותר במדף צינור שלישי המכיל גם צינורות עם ציספלטין. השתמש בקרום חדיר אוויר כדי לאטום את שני המדפים הראשונים כדי למנוע אידוי.לאחר מכן, הכינו נפח מתאים של שישה ציספלטין מיקרו-מולרי בבינוני עם 0.2% FBS ו-XPS אחד. הוצא את הנפח הנדרש של המדיום לארבעה צינורות מסומנים של 50 מיליליטר, והנח אותם בחזרה לארבעת החריצים של מתלה צינור מדידת חילוף החומרים השלישי. השתמש בקרום חדיר אוויר כדי לאטום את הצינורות.סמן שש שפופרות של 50 מיליליטר והוסף 20 מיליליטר לכל אחד מתמיסת טריטון X של 0.1% במדיום, תמיסת טריטון X תשכב את כל התאים שנותרו ותספק ערך אפס לכל שבב. הניחו את הצינורות במתלה צינור רביעי ואטמו אותם. לאחר מכן טען את השבבים למודולים הביולוגיים.טען את שני הברקים לתוך מחזיק שני הברקים, ולאחר מכן התחל את הניסוי. לאחר הכנת עוברי תרנגולות כפי שצוין בפרוטוקול הטקסט ביום השני של העברת התאים, חלקו את קבוצות העניין והביקורת לשתי צלוחיות לרכב ושתיים לציספלטין. שאפו את המדיום והשתמשו בשלושה מיליליטר טרי, בינוני או בינוני עם שישה ציספלטין מיקרומולריים לחידוש.הצלוחיות דוגרות במשך שש שעות. לאחר הדגירה שואבים את המדיום, ואז שוטפים ומנסים להחזיר את התאים, מעבירים את תרחיף התאים לארבעה צינורות של 15 מיליליטר המסומנים כראוי לפני הסיבוב ושימוש ב-PBS כדי לשטוף שלוש פעמים Resus משהה מחדש את התאים. ולאחר מכן, לאחר הספירה, השתמש ב-PBS כדי לדלל או צנטריפוגה כדי לרכז את התאים לריכוז סופי של 1.0 כפול 10 לתאים השישיים למיליליטר.העבירו את תרחיף התאים לצינורות של חמישה מיליליטר המסומנים להזרקה והניחו על קרח. לאחר מכן, הניחו בצד עוברי תרנגולות בני 24 ו-9 ימים להזרקה תחת מיקרוסקופ סטריאו ובאמצעות מחט זכוכית המחוברת לצינור גמיש המחובר למזרק מיליליטר אחד בתנועה פועמת איטית. הזרקו 1.0 פעמים 10 לתאים החמישיים בנפח של 100 מיקרוליטר למחזור הוורידי של קרום הצ'ואל טויק או פקה בעזרת ניגוב רך.טפחו בעדינות את מקום ההזרקה כדי לעצור את זרימת הדם ולספוג כל שפיכת ספין. סמן כל מיכל עובר כראוי לאחר כל הזרקה תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי. אשר את נוכחותם והפצתם של תאים פלואורסצנטיים בכלי הדם של המצלמה.שימו לב לכל עובר שבו מספר תאי הגידול נראה נמוך או שההתפלגות גרועה. לבסוף, הניחו את עוברי התרנגולות בתא לחות ודגרו במשך שבעה עד תשעה ימים לפני ספירת מוקדים גרורתיים כמתואר בפרוטוקול הטקסט כפי שמוצג כאן לאחר 24 שעות אנושיות, 5 49 תאי סרטן ריאות שטופלו ב-BRCA שניים מכוונים ל-SO וציספלטין הראו ירידה מוקדמת ובלתי הפיכה בנשימה בהשוואה לתאים שקיבלו ביקורת SO וציספלטין בלבד. הירידה של 39% בהשוואה לתאי הביקורת שטופלו החלה כ-10 שעות לפני ירידה ניתנת לזיהוי בהידבקות התאים, מה שמרמז על כך שהיא התרחשה ללא תלות בשינויים במספר התאים וכי ייתכן שמדובר באירוע מעצב שקדם למוות תאי כפי שמודגם כאן.לא נצפה הבדל בהחמצה במהלך הניסוי בן 72 השעות, מה שמצביע על כך שלטיפול ב-BRCA 2 a SO ו-cisplatin הייתה השפעה מועטה עד אפסית על חילוף החומרים של הגלוקוז. בניסוי זה, תאי סרטן ריאה אנושיים A 5 49 טופלו בביקורת SO או BRCA 2 A SO בנוכחות או היעדר ציספלטין והוזרקו למחזור הוורידי של ה-cam. תשעה ימים לאחר מכן, תאים שטופלו ב-BRCA 2 a SO ו-cisplatin הראו שכיחות נמוכה ב-77% של מוקדים גרורתיים בהשוואה לתאים שטופלו ב-SO ביקורת ו-cisplatin או BRCA 2 A SSO בלבד, מה שמצביע על כך שלטיפול ב-BRCA 2 a SO ו-cisplatin יש פוטנציאל להפחית או למנוע עומס גרורתי בחולים עם גידולים מוצקים.בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות מסורתיות יותר כגון התפשטות תאים, בדיקות ומחקרי קסנוגרפט in vivo על מנת לחקור עוד יותר את התרומה של מטרה מסוימת להגברת הרגישות לתרופות.

evaluating-effectiveness-cancer-drug-sensitization-vitro

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

עמידות לתרופות לטיפולים ממוקדים היא נרחבת והצורך לזהות מנגנונים של התנגדות - לפני או אחרי הופעה קלינית - היא קריטי להדרכת אסטרטגיות ניהול קליניות חלופיות. כאן, אנו מציגים פרוטוקול לגזירה כמה קווים עמידים לתרופות במבחנה עם רצף לזרז גילוי המנגנונים אלה.

הטמעה של<em&gt; במבחנה</em&gt; תרופות מבחני התנגדות: למקסם את הפוטנציאל לחשיפת מנגנוני התנגדות קלינית רלוונטיים

אנו מתארים בדיקת רגישות לתרופות בתפוקה גבוהה עבור תאי מיאלומה נפוצה ראשוניים. הוא מורכב משחזור של מיקרו-סביבת מח העצם (כולל מטריצה חוץ-תאית וסטרומה) בצלחות מרובות בארות, ושיטה לא פולשנית לכימות אורך של כדאיות התא.

מערכת תפוקה Organotypic גבוהה לאפיון של תרופות רגישות של תאי מיאלומה נפוצה ראשיים

הדוח הנוכחי מסכם פרוטוקול שניתן להשתמש בו כדי לדגמן את ההשפעה של נישת המיקרו-סביבה של מח העצם על תאים לוקמיים עם דגש על העשרת תת-האוכלוסייה העמידה ביותר לכימותרפיה.

לוקמיה עמידה דוגמנות כימותרפיה<em&gt; במבחנה</em

מטרת פרוטוקול זה היא להעריך ספציפי של תרופות נגד סרטן במבחנה באמצעות תרבויות מעורבות המכילות הוא גידול ותאי שאינו סרטני.

הערכה ספציפית של תרופות נגד הסרטן<em&gt; במבחנה</em

אנו מציגים מודל תלת מימדי (תלת מימדי) של סרטן ריאות המבוסס על פיגום קולגן ביולוגי כדי לחקור את הרגישות לטיפולים ממוקדי תאים לא קטנים-סרטן-ריאות (NSCLC). אנו מדגימים טכניקות קריאה שונות לקביעת מדד ההתפשטות, האפופטוזיס ומצב המעבר האפיתלי-מזנכימלי (EMT). הנתונים שנאספו משולבים במודל סיליקו לחיזוי רגישות לתרופות.

רקמת 3D משולב תכנון הנדסי<em&gt; במבחנה</em&gt; /<em&gt; סיליקו</em&gt; דגם גידול ריאות לניבוי יעילות טיפול תרופתי רקעים מוטציוני ספציפיים

מתוארת שיטה במבחנה להקמת התנגדות כפול של EGFR-TKI ו- MET-TKI בתאים סרטניים. שיטה זו שימושית לפיתוח טיפולים עבור חולים עם EGFR-מוטציות, אשר מוצג התקדמות המחלה למרות הטיפול EGFR-TKI עם MET-הגברה. זה גם יכול להיות שונה עבור מעכבי מיקוד מולקולות אחרות.

יצירת עמידות כפול EGFR-TKI ו- TKI פגש ריאות אדנוקרצינומה תאי במבחנה עם הליך דו-שלבי המינון

פרוטוקול זה מתאר כיצד להעריך הסינרגטיות בין נוגדן נגד סרטן תרופות antineoplastic במודלים פרה באמצעות המשוואה אינדקס שילוב של צ'או, Talalay.

Potentiation של נוגדנים נגד סרטן יעילות על-ידי סמים Antineoplastic: זיהוי של נוגדן תרופתיים הסינרגטיות באמצעות המשוואה אינדקס שילוב

כאן נתאר שיטת הפריה תרבות משותפת כדי באופן רקורסיבי אתגר, ממוקדות גידול תאי T, המאפשר ניתוח פנוטיפי ופונקציונליים של פעילות antitumor תא T...

ב- Rechallenge תא הגידול חוץ גופית להערכה חזוי של Chimeric אנטיגן קולטן תא T פונקציה Antitumor

כתב יד זה מתאר כיצד להעריך במערכת החיסונית של vivo של שלפוחיות חוץ-תאיות שמקורן בתאי הגידול (EVs) באמצעות ציטומטריית זרימה. רכבים חשמליים שמקורם בגידולים העוברים מוות תאי אימונוגני שנגרם כתוצאה מהטיפול נראים רלוונטיים במיוחד במערכון הגידול. פרוטוקול זה מדגים את ההערכה של אוקסליפלטין-induced emunostimulatory גידול EVs אבל יכול להיות מותאם להגדרות שונות.

ב-Vivo הקרנה אימונוגנית של שלפוחיות חוץ-תאיות שמקורן בגידול על ידי ציטומטריית זרימה של תאי T טחול

פרוטוקול זה מתאר הערכה מתוקננת של רגישויות לתרופות למעכבי איתות ממוקדים במודלים אורגנויד שמקורם בחולה NSCLC.

רגישות ליצירת פרופילים לטיפולים ממוקדים באורגנוידים שמקורם ב-EGFR-Mutant NSCLC

פרוטוקול זה מציג סדרה של ניסויים שאומצו להערכת פפטידים אנטי-סרטניים הניתנים להחלפה, שניתן להשתמש בהם בסינון פרה-קליני של תרכובות כאלה. זה כולל הערכת ציטוטוקסיות בתרביות תאים דו-ממדיות ותלת-ממדיות, הערכת יעילות פוטואיזומריזציה של רקמת מודל (ex vivo) ויעילות in vivo .

הערכה חוץ גופית ו-in vivo של תרכובות פעילות ביולוגיות מבוקרות - תרופות מועמדות פוטנציאליות לפוטופרמקולוגיה של סרטן

למדו הערכת רגישות תרופות בסרטן באמצעות מדידת מטבוליזם תאי ותדירות גרורות. השיטה משתמשת במודל עוברי עוף וביוסנסורים לבחינת יעילות טיפולים נוגדי סרטן.

הערכת היעילות של תרופות למלחמה בסרטן רגישות

גלה סרטונים נוספים